(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210919212.4 (22)申请日 2022.08.02 (71)申请人 成都普康生物科技有限公司 地址 610000 四川省成 都市新津 县工业园 区A区青年 （大 学生） 创业园 (72)发明人 舒娟　徐春梅　吴涛　 (74)专利代理 机构 北京超凡宏宇专利代理事务 所(特殊普通 合伙) 11463 专利代理师 宋南 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/34(2006.01) (54)发明名称 Boc-His(Trt)-Aib-OH及其异构体的分离检 测方法 (57)摘要 本发明公开了Boc ‑His(Trt) ‑Aib‑OH及其异 构体的分离检测方法， 涉及医药中间体检测技术 领域。 本采用反相色谱条件进行分离， 通过对色 谱条件进行优化， 特别是优化流动相的组成， 能 够显著提升Boc ‑His(Trt)‑Aib‑OH和及其异构体 [Boc‑D‑His(Trt) ‑Aib‑OH]的分离效果， 主成分 峰与异构体峰间分离度大于1.5， 且峰型较好， 故 能对异构体进行准确定量。 权利要求书1页 说明书6页 附图3页 CN 115494169 A 2022.12.20 CN 115494169 A 1.一种Boc ‑His(Trt)‑Aib‑OH及其异构体的分离检测方法， 其特 征在于， 包括： 利用流动相将待测试样溶解得到待测溶 液； 利用反相高效液相色谱法对所述待测溶液进行检测， 所述流动相采用乙腈、 甲醇、 冰醋 酸和三乙胺形成的混合物， 乙腈、 甲醇、 冰醋酸和三乙胺的体积比为260 ‑300:100‑140:0.5‑ 2:0.05‑0.2； 按照面积归一 化法计算Boc ‑His(Trt)‑Aib‑OH及其异构体的含量。 2.根据权利要求1所述的分离检测方法， 其特征在于， 在所述流动相中， 乙腈、 甲醇、 冰 醋酸和三乙胺的体积比为270 ‑290:110‑130:1.0‑1.5:0.1‑0.2。 3.根据权利要求1或2所述的分离检测方法， 其特征在于， 所述待测溶液中待测样品的 浓度为1‑3mg/mL。 4.根据权利 要求1所述的分离检测方法， 其特征在于， 采用色谱柱的内径为4 ‑5mm， 长度 为150mm， 填料粒径为3‑6 μm。 5.根据权利要求4所述的分离检测方法， 其特征在于， 采用色谱柱的型号为CHIRALPAK   QD‑AX， 色谱柱的内径为 4.6mm， 长度为15 0mm， 填料粒径为5 μm。 6.根据权利要求4所述的分离检测方法， 其特征在于， 所述色谱柱的填料选自含奎纳啶 衍生物键合硅胶中的任意 一种。 7.根据权利要求4 ‑6中任一项所述的分离检测方法， 其特征在于， 色谱条件： 柱温为23 ℃‑27℃， 流速为0.4 ‑0.6mL/mi n， 检测波长为252 ‑256nm。 8.根据权利 要求7所述的分离检测方法， 其特征在于， 进样体积为5 ‑15 μL； 优选为9 ‑11μ L。 9.根据权利要求7 所述的分离检测方法， 其特 征在于， 测试时等度运行20 ‑40min。 10.根据权利要求1所述的分离检测方法， 其特 征在于， 按照如下公式计算异构体含量： 异构体含量 式中， Ai表示异构体峰面积； A表示主成分峰面积。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115494169 A 2Boc‑His(Trt) ‑Aib‑OH及其异构体的分离检测方 法 技术领域 [0001]本发明涉及医药中间体检测技术领域， 具体而言， 涉及Boc ‑His(Trt) ‑Aib‑OH及其 异构体的分离检测方法。 背景技术 [0002]Boc‑His(Trt) ‑Aib‑OH是目前较常用的氨基酸衍生物， 其存在异构体Boc ‑D‑His (Trt)‑Aib‑OH。 由于对映异构体间的性质十 分相似， 普通的反相色谱条件 下， 异构体间难以 分离， 故大多数物质间异构体的分离检测主 要采取正相色谱 模式。 [0003]但本品种(Boc ‑His(Trt) ‑Aib‑OH)在现有的正相色谱条件下， 构型易翻转导致测 得的异构 体值不准确， 且色谱峰拖尾严重， 异构体间难以达到基线分离， 从而难以对本品种 中的异构体进行准确定量检测。 目前文献中暂未见有效解决该品种异构体分离的相关报 道。 [0004]鉴于此， 特提出本发明。 发明内容 [0005]本发明的目的在于提供Boc ‑His(Trt) ‑Aib‑OH及其异构体的分离检测方法， 旨在 解决Boc‑His(Trt)‑Aib‑OH及其异构体峰型较差、 难分离 定量的难题。 [0006]本发明是这样实现的： [0007]第一方面， 本发明提供一种Boc ‑His(Trt) ‑Aib‑OH及其异构体的分离检测方法， 包 括： [0008]利用流动相将待测试样溶解得到待测溶 液； [0009]利用反相高效液相色谱法对待测溶液进行检测， 流动相采用乙腈、 甲醇、 冰醋酸和 三乙胺形成的混合物， 乙腈、 甲醇、 冰醋酸和三乙胺的体积比为260 ‑300:100‑140:0.5‑2: 0.05‑0.2； [0010]按照面积归一 化法计算Boc ‑His(Trt)‑Aib‑OH及其异构体的含量。 [0011]在可选的实施方式中， 在流动相中， 乙腈、 甲醇、 冰醋酸和三乙胺的体积比为270 ‑ 290:110‑130:1.0‑1.5:0.1‑0.2。 [0012]在可选的实施方式 中， 待测溶 液中待测样品的浓度为1 ‑3mg/mL。 [0013]在可选的实施 方式中， 采用色谱柱的内径为4 ‑5mm， 长度为150mm， 填料粒径为3 ‑6 μ m。 [0014]在可选的实施方式中， 采用色谱柱的型号为CHIRALPAK  QD‑AX， 色谱柱的内径为 4.6mm， 长度为15 0mm， 填料粒径为5 μm。 [0015]在可选的实施方式中， 色谱柱的填料选自含奎纳啶衍生物键合硅胶中的任意一 种。 [0016]在可选的实施方式中， 色谱条件： 柱温为23℃ ‑27℃， 流速为0.4 ‑0.6mL/min， 检测 波长为252 ‑256nm。说　明　书 1/6 页 3 CN 115494169 A 3