(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210945615.6 (22)申请日 2022.08.08 (71)申请人 江苏慧聚药业股份有限公司 地址 226123 江苏省南 通市海门区三厂街 道青化路18号 (72)发明人 邹平　左呈露　吴忠平　沈烨冰　 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/54(2006.01) G01N 30/72(2006.01) (54)发明名称 GC-MS/MS联用测定醰露替尼中游离肼的方 法 (57)摘要 本发明提供了GC ‑MS/MS联用检测醰露替尼 中游离肼的方法。 通过本发明所述方法， 能够有 效地检测药物 醰露替尼中游离肼的含量。 本发明 所述方法操作简单、 检测限度低、 精确度高， 重复 性好， 可用于醰露替尼生产的质量控制。 具体是 游离肼在苯甲酸和乙二胺四乙酸二钠条件下与 丙酮衍生成二丙酮腙使用顶空气相质谱仪联用 仪EI源进行检测， 定量离 子97， 定性离 子112。 权利要求书2页 说明书6页 附图2页 CN 115267002 A 2022.11.01 CN 115267002 A 1.一种醰露替尼中游离肼的分析 方法， 其特 征在于， 具体包括如下步骤： A.衍生化 将游离肼对照品溶液或醰露替尼供试品溶液放入顶空瓶中， 加入衍生化试剂， 混合均 匀， 进行衍 生， 生成二丙酮腙， 反应式见式I： (1)衍生化试剂： 称量适量的苯甲酸固体， 适量的N ‑甲基吡咯烷酮溶解， 加入一定体积的丙酮， 混合均匀 后， 即为衍生化试剂； 苯甲酸的浓度为0.05mg/mL～ 0.5mg/mL之间， 丙酮的浓度为0.05mL/mL ～0.5mg/mL之间； (2)取适量的游离肼对照品， 加入0.5mg/mL～2.0mg/mL的EDTA二钠溶液溶解， 各取一定 体积的含游离肼对照品EDTA二钠溶液和衍生化剂放入顶空瓶中， 混合均匀， 作为对照品溶 液； (3)取适量的醰露替尼供试品， 加入0.5mg/mL～2.0mg/mL的EDTA二钠溶液溶解， 各取一 定体积的含醰露替尼供试品EDTA二钠溶液和衍生化剂放入顶空瓶中， 加入顶空瓶中， 混合 均匀， 作为供 试品溶液； B.GC‑MS/MS条件为： 所述方法是利用GC ‑MS/MS联用检测方法进行的， 其色谱条件为： 气相色谱柱选用石英毛细管色谱柱， 以惰性气体为气源， 柱子采取程序升温模式， 分流 模式， EI检测器， 其中所述惰性气体选择氦气， 所述石英毛细管色谱柱30m～60m之间， 柱径 为0.25mm～0.53mm， 涂层厚度在0.25um～3um之间， 当所述载气气源是氦气时， 程序升温的 条件为： 起始温度为40℃～60℃， 以5℃ ～20℃/min， 最后温度为120℃ ～200℃， 维持的时间 为2～10min， 再以20℃～40℃/min， 升至180℃～2 60℃， 维持的时间为3 ‑10min， 线速度为15 ～50cm/s； 顶空温度为85 ‑120℃， 震摇时间为10 ‑50min， 定量环平衡温度80 ‑130℃， 传输线 平衡温度10 5‑120℃； C.质谱条件为： 离子源为EI源。 离 子源温度20 0‑220℃， 离子源接口温度210 ‑230℃， 溶剂 切除时间5.5mi n， 质谱采集时间5.5 ‑15min， 采集模式SIM， 定量离 子97， 定性离子112。 2.根据权利要求1(A)所述的方法， 对照品和供试品的配样溶剂为EDTA二钠溶液， 浓度 为0.5mg/mL～ 2.0mg/mL， 优选1.0mg/mL。 3.根据权利要求1(A)所述的方法， 其特征在于， 在衍生化试剂中， 苯甲酸的浓度为 0.05mg/mL～ 0.5mg/mL之间， 优选0.1mg/mL； 丙酮的浓度为0.05mL/mL～ 0.5mg/mL之间， 优选 0.1mL/mL。 4.根据权利1(A)所述的方法， 其特征在于， 衍生的温度控制在30～40℃之间.优选35 ℃。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115267002 A 25.根据权利1(B)所述的方法， 其特征在于， 所述石英毛细管色谱柱长度为30m， 柱径为 0.32mm， 涂层厚度为1.8um。 6.根据权利要求1(B)所述的方法， 其特征在于， 程序升温为： 起始温度为50℃， 升温速 率为15℃/min， 最终温度为150℃， 维持5分钟， 再以升温速率为30℃/min， 最终温度为220 ℃， 维持5mi n； 线速度为3 0cm/s。 7.根据权利要求1(B)所述的方法， 其特 征在于， 分流模式， 分流比为5:1～3 0:1。 8.根据权利要求1(B)所述的方法， 其特征在于， 顶空温度为85 ‑120℃， 震摇时间为10 ‑ 50min， 定量环 平衡温度80 ‑130℃， 传输线平衡温度10 5‑120℃。 9.根据权利要求1(C)所述的方法， 离 子源参数为： 离子源： EI源 电压： 3.8～4.5kV 离子源温度： 20 0‑220℃ 离子源接口温度210 ‑230℃， 溶剂切除时间5.5mi n， 质谱采集时间5.5 ‑15min， 采集模式SIM， 定量离 子97， 定性离 子112。 10.一种用GC ‑MS/MS联用测定醰露替尼中游离肼的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)称量适量的苯甲酸固体， 加入适量的N ‑甲基吡咯烷酮溶解， 加入一定体积的丙酮， 混合均匀后， 即为衍生化试剂。 在衍生化试剂中， 苯甲酸的浓度为0.05mg/mL～0.5mg/mL之 间； 丙酮的浓度为0.0 5mL/mL～0.5mg/mL之间。 (2)取适量的游离肼对照品， 加入0.5mg/mL～2.0mg/mL的EDTA二钠溶液溶解后， 移取适 量体积的含游离肼对照品EDTA 二钠溶液和衍生化试剂适量， 放入顶空瓶中， 混合均匀， 作为 对照品溶 液； 含游离肼对照品0.01mg/mL～0.1mg/mL之间。 (3)取适量的醰露替尼供试品， 加入0.5mg/mL～2.0mg/mL的EDTA二钠溶液溶解， 移取适 量体积的含醰露替尼供试品EDTA 二钠溶液和衍生化试剂适量， 放入顶空瓶中， 混合均匀， 作 为供试品溶液； 醰露替尼供 试品的量在20mg～10 0mg之间。 (4)取肼对照品溶液和醰露替尼供试品溶液1mL注入GC ‑MS/MS质谱联用仪， 按照B和C所 述的色谱条件和质谱条件进行检测， 记录色谱图。 (5)根据步骤(4)中所得到的色谱图， 利用外标法计算醰露替尼原料药中游离肼的含 量。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115267002 A 3