(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210868547.8 (22)申请日 2022.07.22 (71)申请人 四川大学华西医院 地址 610041 四川省成 都市武侯区国学巷 37号 (72)发明人 王振磊　郑莉　金瑛　邸相杰　 崔冬瀚　齐小慧　付丽莎　 (74)专利代理 机构 北京众合诚成知识产权代理 有限公司 1 1246 专利代理师 刘妮 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/30(2006.01) G01N 30/32(2006.01)G01N 30/34(2006.01) G01N 30/72(2006.01) (54)发明名称 UPLC-MS/MS法同时测定人尿液中缬沙坦、 沙 库巴曲及其代谢物浓度的方法 (57)摘要 本发明公开了一种UPLC ‑MS/MS法同时测定 人尿液生物样品中缬沙坦、 沙库巴曲及其代谢物 LBQ657浓度的方法， 应用超高效液相色谱 ‑质谱 联用(UPLC ‑MS/MS)同时测定人尿液生物样品中 缬沙坦、 沙库巴曲及其代谢物LBQ657的浓度， 前 处理采用乙腈作为沉淀剂， 并进一步稀释进样； 进样量比较少大大降低对仪器的污染； 该方法应 用了梯度洗脱的方式， 并解决了化合物的残留； 与现有文献相比， 尿液样本量为50μL， 对于终末 期肾衰患者， 收集临床样本容易， 实验方法更加 友好。 权利要求书2页 说明书12页 附图6页 CN 115144505 A 2022.10.04 CN 115144505 A 1.一种UPLC ‑MS/MS法同时测定人尿液生物样品中缬沙坦、 沙库巴曲及其代谢物LBQ657 浓度的方法， 其特 征在于， 该 方法针对的是慢性肾病终末期患者尿液样品； 该方法包含： 采用乙腈蛋白沉淀法对样品进行前处理， 样品前处理后采用等体积的稀释剂进行稀 释， 其中所述稀释剂为5 0％乙腈‑0.1％甲酸水； 采用超高效液相色谱串联质谱 对稀释后的样品进行检测： 温度： 40℃， 流动相： A相0.1％甲酸水溶液， B相是体积比为50:50:0.2的甲醇 ‑乙腈‑甲 酸， 洗脱方式： 梯度洗脱； 其中， 梯度洗脱条件设置为： 0min时， 流动相流速为0.3mL/mi n， 流动相中的B相含量6 5％； 1.50min时， 流动相流速为0.3mL/mi n， 流动相中的B相含量80％； 2.00min时， 流动相流速为0.3mL/mi n， 流动相中的B相含量98％； 2.60min时， 流动相流速为0.3mL/mi n， 冲洗自动进样器高压阀； 2.61～3.0 0min时， 流动相流速为0.6mL/mi n， 流动相中的B相含量98％； 3.01min时， 流动相流速为0.6mL/mi n， 流动相中的B相含量6 5％； 3.51min时， 流动相流速为0.3mL/mi n， 流动相中的B相含量6 5％； 4.00min时， 流动相流速为0.3mL/mi n， 停止进样。 2.根据权利要求1所述的UPLC ‑MS/MS法同时测定人尿液生物样品中缬沙坦、 沙库巴曲 及其代谢物LBQ657浓度的方法， 其特征在于， 所述的超高效液相色谱串联质谱中， 高效液相 色谱仪是岛津LC ‑30AD超高效液相色谱， 质谱仪是日本岛津公司80 60型串联质谱仪 。 3.根据权利要求2所述的UPLC ‑MS/MS法同时测定人尿液生物样品中缬沙坦、 沙库巴曲 及其代谢物LBQ657浓度的方法， 其特征在于， 所述的高效液相色谱仪， 色谱柱： ACQUITY   UPLC BEH C18， 规格为2.1m m×50mm， 1.7 μm。 4.根据权利要求2所述的UPLC ‑MS/MS法同时测定人尿液生物样品中缬沙坦、 沙库巴曲 及其代谢物LBQ657浓度的方法， 其特征在于， 所述的高效液相色谱仪， 配有自动进样器， 该 自动进样器为SI L‑30AC HT自动进样器。 5.根据权利要求2所述的UPLC ‑MS/MS法同时测定人尿液生物样品中缬沙坦、 沙库巴曲 及其代谢物 LBQ657浓度的方法， 其特征在于， 所述的质谱仪， 配有Turbo  Ionspray离子源以 及LabSolutions 6.70数据处 理系统。 6.根据权利要求2所述的UPLC ‑MS/MS法同时测定人尿液生物样品中缬沙坦、 沙库巴曲 及其代谢物LBQ6 57浓度的方法， 其特 征在于， 辅助数据处 理软件为Microsoft  Office。 7.根据权利要求4所述的UPLC ‑MS/MS法同时测定人尿液生物样品中缬沙坦、 沙库巴曲 及其代谢物LBQ6 57浓度的方法， 其特 征在于， 所述的自动进样器温度设为15℃。 8.根据权利要求1所述的UPLC ‑MS/MS法同时测定人尿液生物样品中缬沙坦、 沙库巴曲 及其代谢物LBQ657浓度的方法， 其特征在于， 所述的超高效液相色谱串联质谱， 在洗针时， 解决残留的洗针 程序为： 洗针液R0及外置泵R3连通的溶液均为体积比为25: 25:25:25:1的甲 醇‑乙腈‑异丙醇‑水‑甲酸， 洗针程序为洗针液R0清洗进样针的外壁， 进样 前后各润洗3s， 洗 针速度35μL/s， 洗针体积500μL， 外置泵R3的程序为清洗泵 ‑>清洗进样口， 用于进一步在进 样前后清洗进样针的外壁。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115144505 A 29.根据权利要求1所述的UPLC ‑MS/MS法同时测定人尿液生物样品中缬沙坦、 沙库巴曲 及其代谢物LBQ657浓度的方法， 其特征在于， 所述的超高效液相色谱串联质谱的分析中所 用内标为待分析物的氘代衍 生物， 选用缬沙坦 ‑d9、 沙库巴曲 ‑d4和LBQ657‑d4。 10.根据权利 要求1所述的UPLC ‑MS/MS法同时测定人尿液生物样品中缬沙坦、 沙库巴曲 及其代谢物LBQ657浓度的方法， 其特征在于， 所述的超高效液相色谱串联质谱的进样量为4 μL。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115144505 A 3