(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221098676 6.6 (22)申请日 2022.08.17 (71)申请人 上海卓鼎生物技 术有限公司 地址 200000 上海市金山区亭卫公路10 00 号一层(湾区科创中心) (72)发明人 滕院　赵晓怡　杨青春　马秋丽　 胡倩　普倩　陶琪　 (74)专利代理 机构 上海汇齐专利代理事务所 (普通合伙) 31364 专利代理师 童强 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/34(2006.01) (54)发明名称 一种7-Troc-巴卡亭 Ⅲ-13-O-恶唑啉羧酸酯 的检测方法 (57)摘要 本发明公开了一种7 ‑Troc‑巴卡亭Ⅲ‑13‑O‑ 恶唑啉羧酸酯的检测方法； 采用反相高效液相色 法， 检测波长为22 0‑230nm； 采用紫外线或二 极管 阵列检测器； 柱温为30℃ ±5℃； 稀释剂为乙腈； 流动相组成为乙腈 ‑水， 洗脱程序如下： 0到 20min， 乙腈从60％变化到 72％， 水从40％变化到 28％； 20到40min， 乙腈从72％变化到76％， 水从 28％变化到24％； 40到50min， 乙腈从76％变化到 88％， 水从24％变化到12％； 50到60min， 乙腈从 88％变化到95％， 水从12％变化到5％； 60到 61min， 恢复初 始运行梯度， 以初始 洗脱梯度运行 到70min； 本发明具有很高的灵敏度及专属性。 权利要求书1页 说明书10页 附图4页 CN 115326970 A 2022.11.11 CN 115326970 A 1.一种7‑Troc‑巴卡亭Ⅲ‑13‑O‑恶唑啉羧酸酯的检测方法， 其特征在于， 所述检测方法 包括以下步骤： 步骤一、 将含有7 ‑Troc‑巴卡亭Ⅲ‑13‑O‑恶唑啉羧 酸酯物质用色谱纯乙腈溶解； 步骤二、 对步骤一制备的乙腈溶液采用高效液相色谱进行检测， 高效液相色谱中流动 相为乙腈 ‑水系统， 流动的水相为酸性； 柱温为30℃ ±5℃； 流动相流速为1 ‑1.5ml/min； 检测 器为紫外线检测器或者二极管阵列检测器， 检测光的波长为220 ‑230nm； 洗脱程序如下： 0到 20min， 乙腈从60％变化到72％， 水从40％变化到28％； 20到40min， 乙腈从72％变化到 76％， 水从28％变化到24％； 40到50min， 乙腈从76％变化到88％， 水从24％变化到12％； 50到 60min， 乙腈从88％变化到95％， 水从12％变化到5％； 60到61min， 恢复初始运行梯度， 以初 始洗脱梯度运行到70mi n。 2.根据权利 要求1所述的一种7 ‑Troc‑巴卡亭Ⅲ‑13‑O‑恶唑啉羧酸酯的检测方法， 其特 征在于， 所述步骤一中如果含有 7‑Troc‑巴卡亭Ⅲ‑13‑O‑恶唑啉羧酸酯物质是水溶液， 则将 该水溶液干燥结晶后 再用乙腈溶解； 如果含有7 ‑Troc‑巴卡亭Ⅲ‑13‑O‑恶唑啉羧酸酯物质 有不溶解的物质则充分溶解后， 取 上层过滤清液。 3.根据权利 要求1所述的一种7 ‑Troc‑巴卡亭Ⅲ‑13‑O‑恶唑啉羧酸酯的检测方法， 其特 征在于， 所述 步骤二中流动的水相中含有质量分数为0.5％的磷酸。 4.根据权利 要求1所述的一种7 ‑Troc‑巴卡亭Ⅲ‑13‑O‑恶唑啉羧酸酯的检测方法， 其特 征在于， 所述 步骤二中检测波长为2 27nm。 5.根据权利 要求1所述的一种7 ‑Troc‑巴卡亭Ⅲ‑13‑O‑恶唑啉羧酸酯的检测方法， 其特 征在于， 所述 流动相流速为1 ‑1.5ml/mi n。 6.根据权利 要求4所述的一种7 ‑Troc‑巴卡亭Ⅲ‑13‑O‑恶唑啉羧酸酯的检测方法， 其特 征在于， 所述 步骤二中流动相流速为1.2ml/mi n。 7.根据权利 要求1所述的一种7 ‑Troc‑巴卡亭Ⅲ‑13‑O‑恶唑啉羧酸酯的检测方法， 其特 征在于， 所述 步骤二中 高效液相色谱的柱温为3 5℃。 8.根据权利 要求1所述的一种7 ‑Troc‑巴卡亭Ⅲ‑13‑O‑恶唑啉羧酸酯的检测方法， 其特 征在于， 所述单针进样量 为5‑20ul。 9.根据权利 要求8所述的一种7 ‑Troc‑巴卡亭Ⅲ‑13‑O‑恶唑啉羧酸酯的检测方法， 其特 征在于， 所述单针进样量 为10ul。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115326970 A 2一种7‑Troc‑巴卡亭Ⅲ‑13‑O‑恶唑啉羧酸酯的检测方 法 技术领域 [0001]本发明涉及药物分析技术领域， 具体是一种 7‑Troc‑巴卡亭Ⅲ‑13‑O‑恶唑啉羧酸 酯的检测方法。 背景技术 [0002]7‑Troc‑巴卡亭Ⅲ‑13‑O‑恶唑啉羧酸酯是10 ‑DAB半合成紫杉醇产生的中间产物， 可直接对其进行化学修饰进而合成原料药紫杉醇。 紫杉醇是一种抗癌药物， 在临床上已经 广泛用于乳腺癌、 卵巢癌和部分头颈癌和肺癌的治疗。 紫杉醇作为一个具有抗癌活性的二 萜生物碱类化合物， 其新颖复杂的化学结构、 广泛而显著的生物活性、 全新独特的作用机 制、 奇缺的自然资源使其受到了植物学家、 化学家、 药 理学家、 分子生物学家的极大青睐， 使 其成为20世纪下半叶举世瞩目的抗癌明星和研究重点。 天然醇来源于一种裸子植物红豆杉 的树皮分离提纯 的天然次生代谢产物， 紫杉醇是近年国际市场上最热门的抗癌药物， 被认 为是人类未来20年间最有效的抗癌药物之一。 年来地球人 口和癌发率呈爆发性增长， 对紫 杉醇的需求量亦明显增大。 临床和科研所需的紫杉醇主要是从红豆杉中直接提取， 由于紫 杉醇在植物体中的含量相当低， 因此造成了对红豆杉的大量砍伐， 致使这种 珍贵树种已濒 临灭绝。 而且红豆杉属植物生长缓慢， 这对紫杉醇的进一步开发利用造成了很大的困难。 因 此化学合成紫杉 醇成了主流市场， 其中以半合 成紫杉醇为主， 且供不应求， 但 化学合成的药 物有一定的安全隐患， 故而对化学合成的药物而言， 质量控制必须严格， 即使是药物中间 体， 也应该得到有效控制。 该检测方法正是以此为出发点发明出来， 目前没有关于7 ‑Troc‑ 巴卡亭Ⅲ‑13‑O‑恶唑啉羧 酸酯HPLC检测方法的相关报道。 [0003]7‑Troc‑巴卡亭Ⅲ‑13‑O‑恶唑啉羧 酸酯的化学名为: [0004]5β， 20‑环氧‑1， 2α， 4， 7β， 10β， 13α ‑六羟基‑7β‑(2， 2， 2‑三氯乙氧基甲酰)紫杉烷 ‑ 11‑烯‑9‑酮‑4， 10‑二乙酸酯 ‑2‑苯甲酸酯 ‑13‑O‑[(4S， 5R) ‑3‑苯甲酰基 ‑2‑(4‑甲氧基苯 基)‑4‑苯基‑5‑恶唑啉羧 酸酯] [0005]7‑Troc‑巴卡亭Ⅲ‑13‑O‑恶唑啉羧 酸酯的化学 结构式为: [0006] [0007]7‑Troc‑巴卡亭Ⅲ‑13‑O‑恶唑啉羧酸酯在生产半合成紫杉醇的工艺中作为第三个 中间体， 命名为H Ⅲ， 在HⅢ的生产中， 有四个主要杂质， 命名为H Ⅲ‑A， HⅢ‑B， HⅢ‑C， HⅢ‑D，说　明　书 1/10 页 3 CN 115326970 A 3