(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211137257.2 (22)申请日 2022.09.19 (71)申请人 武汉新华扬生物 股份有限公司 地址 430206 湖北省武汉市东湖新 技术开 发区光谷八 路98号 （自贸区武汉片区） (72)发明人 张云非　付大波　张成杰　张小龙　 刘国红　习羽　詹志春　周樱　 (74)专利代理 机构 北京汇泽知识产权代理有限 公司 11228 专利代理师 吴慧珺 (51)Int.Cl. G01N 5/04(2006.01) G01N 1/28(2006.01) G01N 1/38(2006.01) (54)发明名称 一种体外评估狗粮营养成分消化 率的方法 (57)摘要 本发明属于宠物 粮检测技术领域， 具体提供 了一种体外评估狗粮营养成分消化率的方法， 根 据犬肠道特点和狗粮营养指标选择消化酶的种 类和添加剂量， 调整各消化阶段反应间和温度， 控制酶和肠段缓冲液的添加速率， 以模拟肠道消 化特点， 达到在实验室中用简单器材模拟犬肠道 进而评估狗粮各营养成分的消化率。 本发明提供 的这种体外评估狗粮营养成分消化率的方法成 本低， 操作方便， 重复性好， 更好地匹配犬类对营 养的实际消化吸收结果， 为狗粮的测评、 改进提 供试验方案 。 权利要求书1页 说明书7页 CN 115508245 A 2022.12.23 CN 115508245 A 1.一种体外 评估狗粮营养成分消化 率的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)狗粮样品烘干后， 测定 干物质中淀粉、 粗蛋白、 粗脂肪和粗纤维含量； (2)向其中加入缓冲液 Ⅰ和胃液， 39℃水浴搅拌反应1h后， 调整pH至6.0 ‑6.3， 继续搅拌 30min； (3)向步骤(2)反应后溶液中加入缓冲液 Ⅱ， 以0.2‑0.4ml/min流速加入胰液， 期间pH维 持在6.2‑7.5； 开始滴加胰液20mi n后， 以2ml/mi n流速加入胆汁盐溶 液， 反应3 h； (4)将步骤(3)中反应后样品用水完全洗入14KD 半透膜中， 密封后 置于装有缓冲液 Ⅲ的 容器中， 摇床水浴39℃振荡2h； (5)将步骤(4)反应后样品过滤、 烘干， 得到消化后食糜， 测定消化后 淀粉、 粗蛋白、 粗脂 肪和粗纤维的含量， 计算淀粉、 粗蛋白、 粗脂肪和粗纤维的消化 率。 2.如权利要求1所述的体外评估狗粮营养成分消化率的方法， 其特征在于， 所述缓冲 液 Ⅰ的制备方法为： 将浓度为36％ ‑38％的盐酸以1： 5的体积比加蒸馏水， 并调节pH至1.0 ± 0.01。 3.如权利要求1所述的体外评估狗粮营养成分消化率的方法， 其特征在于， 所述胃液的 制备方法为： 精确称量 胃蛋白酶， 溶于pH为1.0盐酸中， 胃蛋白酶与盐酸的质量体积比为3: 100。 4.如权利要求1所述的体外评估狗粮营养成分消化率的方法， 其特征在于， 每升所述缓 冲液Ⅱ的制备方法为： 称取55g  CaCl2、 9.5gMgCl2、 和33.56g  KHCO3溶于蒸馏水中， 定容至 1L， 调节pH 至6.2。 5.如权利要求1所述的体外评估狗粮营养成分消化率的方法， 其特征在于， 所述胰液的 制备方法为： 称取胰蛋白酶溶于缓冲液 Ⅱ中混匀， 胰蛋白酶与缓冲液 Ⅱ的质量体积比为3: 50。 6.如权利要求1所述的体外评估狗粮营养成分消化率的方法， 其特征在于， 所述胆汁盐 溶液的制备方法为： 称取猪胆汁盐溶于缓冲液 Ⅱ中混匀， 猪胆汁盐与缓冲液 Ⅱ的质量体积 比为23:5 00。 7.如权利要求1所述的体外评估狗粮营养成分消化率的方法， 其特征在于， 每升所述缓 冲液Ⅲ的制备方法为： 称取11.8g  NaHCO3， 5.3g KCl， 0.3g  CaCl2， 溶于蒸馏水中， 定容至1L， 调节pH至6.7。 8.如权利要求1所述的体外评估狗粮营养成分消化率的方法， 其特征在于： 所述步骤 (2)中烘干后样品与缓冲液 Ⅰ和胃液的质量体积比为2:5:5 。 9.如权利要求1所述的体外评估狗粮营养成分消化率的方法， 其特征在于： 所述步骤 (3)中缓冲液 Ⅱ、 胰液和胆汁盐的添加量与烘干后样品的体积质量比为3 0:5:5:2。 10.如权利要求1所述的体外评估狗粮营养成分消化率的方法， 其特征在于： 所述步骤 (3)中通过滴加稀盐酸/稀氢 氧化钠将pH维持在6.2 ‑7.5。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115508245 A 2一种体外评估狗粮营养成分消 化率的方法 技术领域 [0001]本发明属于宠物粮检测技术领域， 具体涉及一种体外评估狗粮营养成分消化率的 方法。 背景技术 [0002]随着国内宠物市场稳步繁荣， 在国内已形成千亿级的市场规模。 宠物粮作为宠物 产业的核心， 部分产品往往局限于营养成分的堆叠或单一有益添加物的引入， 而面向宠物 对饲粮的消化能力， 吸 收能力等基础研究少。 [0003]饲粮评估目前常用的方法有代谢试验、 饲养试验、 化学分析、 仿生评估试验等。 Mans Minekus等提出了一种TNO胃肠 模型， 通过多室串 联用于模拟胃肠内腔环 境的条件。 该 模型的优势在于详细模拟各肠道环 境并可通过计算机精确控制模型的温度、 酶的流速、 pH、 过滤速度等各项数据， 可以在理论上精细模拟各类动物消 化道环境， 但该模型设计过于精 细， 整个试验过于复杂， 试验繁琐， 试验对仪器依赖过高， 而仪器价格昂贵， 性价比过低， 对 试验人员要求过高， 灵活性低， 不宜大规模推广。 此外， Cindy  Duysburgh等开发一种SCIME   的犬四级反应器的体外模型， 其具体通过胃和小肠隔室以及随后的近端和远端结肠组成， 呈较好地模拟犬肠道菌群的种类及环境， 但分析发现， 该方法仅适宜评估犬肠道对微生物 丰度及菌群改变的影响， 无法较好评估犬 日粮的消 化效果。 且该模型中食糜在胃中停留时 间1h， 小肠停留时间4h， 大肠中停留16h， 这与犬进食后3 ‑4h从胃中推向肠管， 5 ‑10h排空胃 内容物的真实犬肠道消化节律存在较大差别。 国内有文献提出通过采用猪体系手工仿生消 化来模拟犬体系环境， 该方法忽视了犬生理结构与猪生理结构的巨大差异， 两种动物在肠 道结构、 饲粮结构种类、 营养需求存在明显差异， 且手工仿生消化存在内源酶过量添加及过 度消化的问题， 无法模拟犬对营养的实际消化吸 收。 [0004]因此开发一种成本低、 易于在实验室中操作的狗粮评估方法具有规范产品效果， 建立统一行业标准的重要意 义。 发明内容 [0005]本发明的目的是克服现有技术操作复杂、 成本高， 无法模拟犬对营养 的实际消化 吸收效果的问题。 [0006]为此， 本发明提供了一种体外 评估狗粮营养成分消化 率的方法， 包括以下步骤： [0007](1)狗粮样品烘干后， 测定 干物质中淀粉、 粗蛋白、 粗脂肪和粗纤维含量； [0008](2)向其中加入缓冲液 Ⅰ和胃液， 39℃水浴搅拌反应1h后， 调整pH至6.0 ‑6.3， 继续 搅拌30min； [0009](3)向步骤(2)反应后溶液中加入缓冲液 Ⅱ， 以0.2‑0.4ml/min  流速加入胰液， 期 间pH维持在6.2 ‑7.5； 开始滴加胰液20mi n后， 以 2ml/min流速加入胆汁盐溶 液， 反应3 h； [0010](4)将步骤(3)中反应后样品用水完全洗入14KD半透膜中， 密封后置于装有缓冲液 Ⅲ的容器中， 摇床水浴39℃振荡2h；说　明　书 1/7 页 3 CN 115508245 A 3