(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210780498.2 (22)申请日 2022.06.28 (71)申请人 上海睿璟生物科技有限公司 地址 200000 上海市闵行区召楼路3 632号2 幢5层 (72)发明人 杨峰　李雯　龚伟　石涵　洪跟东　 (74)专利代理 机构 上海新申信知识产权代理有 限公司 31480 专利代理师 戚鹏 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于诊断甲状腺癌淋巴结转移的试剂 盒及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种用于诊断甲状腺癌淋巴 结转移的试剂盒及其应用， 属于生物医药技术领 域。 本发明用于检测的生物标志物组包含有TG基 因、 TSH‑R基因、 TPO基因， 基于 该生物标志物组设 计了检测引物和探针， 进一步开发了检测试剂所 应用的诊断产品， 可用于诊断甲状 腺癌淋巴结转 移和/或评估甲状腺癌淋巴结转移风险等； 本发 明同时还进一步公开了诊断产品之一的试剂盒 的使用方法， 采用一步法RT ‑qPCR， 使反转录和 PCR扩增在同一反应体系中进行， 可以降低污染 风险， 节省操作步骤和操作时间； 并且将目的基 因与内参基因在单管内同时进行反应， 可以提高 结果的准确性和检测通量； 采用多基因联检， 三 基因交并集联合判断方式， 可以提高结果的准确 性和灵敏度， 具有广泛应用前 景。 权利要求书2页 说明书16页 附图6页 CN 115109852 A 2022.09.27 CN 115109852 A 1.一种用于诊断甲状腺癌淋巴结转移诊断的生物标志物组， 其特征在于， 所述生物标 志物组包括有甲状腺球蛋白基因、 促甲状腺素激素受体 基因和甲状腺过 氧化物酶基因。 2.一种用于检测权利要求1所述生物标志物 组的试剂， 其特征在于， 包含用于检测目的 基因和内参基因β ‑2‑微球蛋白表达的引物探针组合物； 更具体地， 包含用于检测甲状腺球 蛋白基因、 促甲状腺素激素受体基因、 甲状腺过氧化物酶基因以及内参基因β ‑2‑微球蛋白 的特异性检测引物和/或特异 性检测探针， 其中， 所述特异 性检测引物包括以下引物对A～D 至少任一： 针对甲状腺球蛋白基因的引物对A， 其序列如SEQ  ID NO： 1～2所示； 针对促甲状腺素激素受体 基因的引物对B， 其序列如SEQ  ID NO： 4～5所示； 针对甲状腺过 氧化物酶基因的引物对C， 其序列如SEQ  ID NO： 7～8所示； 针对内参基因β ‑2‑微球蛋白的引物对D， 其序列如SEQ  ID NO： 10～1 1所示； 所述特异性检测探针包括以下探针A ～D至少任一： 针对甲状腺球蛋白基因的探针A， 其序列如SEQ  ID NO： 3所示； 针对促甲状腺素激素受体 基因的探针B， 其序列如SEQ  ID NO： 6所示； 针对甲状腺过 氧化物酶基因的探针C， 其序列如SEQ  ID NO： 9所示； 针对内参基因β ‑2‑微球蛋白的探针D， 其序列如SEQ  ID NO： 12所示。 3.如权利要求1所述的生物标志 物组在制备甲状腺癌淋巴结转移诊断产品中的应用。 4.如权利要求2所述的用于检测权利要求1所述生物标志物组的试剂在制备甲状腺癌 淋巴结转移诊断产品中的应用。 5.一种用于诊断甲状腺癌淋巴结转移的诊断产品， 其特征在于， 所述诊断产品为试剂 盒、 芯片、 膜条、 蛋白阵列、 组合物或检测系统之任一； 所述诊断产品采用RT ‑PCR方法检测目 的基因以及内参基因β ‑2‑微球蛋白的表达水平。 6.根据权利要求5所述的诊断产品， 其特征在于， 所述甲状腺癌淋巴结转移是指甲状腺 癌颈淋巴结转移； 所述诊断具体包括甲状腺癌淋巴结转移的早期鉴别诊断、 动态监测、 甲状 腺癌淋巴结转移复发及预后的辅助判断、 药物疗效评估。 7.一种用于诊断甲状腺癌淋巴结转移诊断的试剂 盒， 其特征在于， 包括如权利要求2所 述的试剂、 检测反应液、 检测酶液、 阳性对照品和空白对照品。 8.根据权利要求7所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述检测反应液包括进行实时荧光定量 PCR检测试剂反应所需的dNTPs、 dU TP、 Mg2+和缓冲液； 所述检测酶液包括UDG酶、 逆转录酶和热启动DNA聚合酶； 所述阳性对照品为有甲状腺球 蛋白基因、 促甲状腺素激素受体基因和甲状腺过氧化物 酶基因mRNA的RNA样品； 所述空白对照品为无RNA酶的水。 9.如权利要求7或8中所述的甲状腺癌淋巴结转移诊断用试剂 盒的使用方法， 其特征在 于， 具体包括以下内容： S1、 收集待检样本， 提取总RNA； S2、 配制反应体系； 所述反应体系包括所述的检测试剂、 检测反应液、 检测酶液， 待检样 本或阳性对照品或空白对照品模板， 以及无RNA酶的水； S3、 进行实时荧 光定量PCR检测试剂扩增反应和信号收集；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115109852 A 2S4、 基于Ct值法， 根据ΔCt， 采用并集和交集的判断方式， 对结果进行分析， 判断待测样 本为阴性或阳性。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115109852 A 3