(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210766313.2 (22)申请日 2022.06.30 (71)申请人 湖南家辉生物技 术有限公司 地址 410205 湖南省长 沙市高新 开发区麓 谷麓景路2号 (72)发明人 曾桥　伊宁　罗娇娇　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 专利代理师 苏士莹 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12Q 1/6869(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种短链 酰基辅酶A脱 氢酶缺乏症的诊断试 剂和试剂盒 (57)摘要 本发明涉及基因诊断技术领域， 特别是涉及 一种短链 酰基辅酶A脱氢酶缺乏症的诊断试剂和 试剂盒。 本发明通过外显子组测序技术发现了 ACADS:NM_000017.4:exon10:c.1195C>T: p.R399W位点基因型为TT时， 可以导致短链酰基 辅酶A脱氢酶缺乏症， 根据该突变制备的诊断试 剂或试剂盒， 可以特异性区分短链酰基辅酶A脱 氢酶缺乏症患者、 携带者和正常人群， 可用于快 速、 有效地预测或诊断短链酰基辅酶A脱氢酶缺 乏症， 可以提供优生优育和治疗干预指导。 另 一 方面， 本发明为短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症的 发病机制研究奠定了重要基础， 为短链酰基辅酶 A脱氢酶缺乏症患者的治疗提供全新的理论依 据。 权利要求书1页 说明书13页 序列表5页 附图2页 CN 115216532 A 2022.10.21 CN 115216532 A 1.利用生物标志物在制备短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症诊断试剂或试剂盒中的应用， 其特征在于， 所述生物标志物在登录号为NM_000017.4的10号外显子的第1195位存在C>T突 变。 2.一种短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症的诊断试剂， 其特征在于， 所述试剂包括扩增生物 标志物的引物； 所述生物标志物在登录号为NM_000017.4的10号外显子的第1195位存在C>T 突变； 扩增所述 生物标志 物的引物包括ACAD S‑F和ACADS‑R； 所述ACAD S‑F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示； 所述ACAD S‑R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示。 3.权利要求2所述试剂在制备短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症诊断试剂盒中的应用。 4.一种短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症的诊断试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒包括权利 要求2所述试剂和 测序引物。 5.根据权利要求4所述的诊断试剂盒， 其特征在于， 所述测序引物包括ACADS ‑SeqF和 ACADS‑SeqR 所述ACAD S‑SeqF的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示； 所述ACAD S‑SeqR的核苷酸序列如SEQ  ID NO.4所示。 6.根据权利要求4或5所述的诊断试剂盒， 其特征在于， 所述诊断试剂盒还包括生物标 志物阳性突变参考品DNA； 所述生物标志 物阳性突变参考品DNA的单链核苷酸序列如SEQ  ID NO.5所示。 7.一种鉴定生物标志物基因型的方法， 其特征在于， 所述生物标志物在登录号为NM_ 000017.4的10号外 显子的第1195位存在C>T突变； 所述方法包括以下步骤： 以待测样品DNA为模板， 利用权利 要求2所述诊断试剂中的引物进行PCR扩增， 得到扩增 产物； 将扩增产物进行测序， 确定生物标志 物的基因型。 8.根据权利 要求7所述的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的反应进程包括： 95℃预变性 5min； 95℃变性3 0s， 57℃退火3 0s， 72℃延伸6 0s， 33个循环； 72℃反应7mi n。 9.根据权利要求7所述的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的反应体系以20 μL计， 包括10 ×PCR缓冲液2 μL、 dNTPs  0.4 μL、 ACADS‑F 0.5 μL、 ACADS ‑R 0.5 μL、 模板1 μL、 Taq酶0.2 μL和余 量的ddH2O。 10.根据权利要求7～ 9任一项所述的方法， 其特 征在于， 所述样本包括血 液。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115216532 A 2一种短链酰基辅酶A脱 氢酶缺乏症的诊断试剂 和试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及基因诊断技术领域， 特别是涉及一种短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症的 诊断试剂和试剂盒。 背景技术 [0002]短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症可导致患儿脂肪氧化代谢障碍的常染色体隐性遗传 病。 该病的发病 率为1/84117万。 短链酰基辅酶A脱氢酶是线粒体β 氧化代谢通路酰基辅酶A 脱氢酶家族中的一个中重要酶， 该酶结构上和中链脂酰辅酶A脱氢酶以及极长链脂肪酸脱 氢酶的序列有高度同源性。 在体内可以催化C4 ‑C6的短链辅酶A脱氢。 ACADS基因(606885)突 变导致短链 酰基辅酶A脱 氢酶活性降低或丧 失， 致丁酰基辅酶A蓄积， 丁酰辅酶A旁路代谢生 成丁酰基肉碱、 丁酰基甘氨酸， 丁酸盐或通过丙酰辅酶A羧化酶作用生成乙基丙二酸， 造成 患者血中丁酰基肉碱(C4)和尿中乙基丙二酸升高。 患者主要表现为 发育迟缓和神经系统症 状， 以及语言发育落后和肌张力低下、 惊厥、 喂养困难、 昏睡和行为问题， 有时患者可有畸 形、 心肌病、 宫内发育迟缓和呼吸抑制， 偶见急性酸中毒表现。 ACADS基因位于号染色体 12q24.31， 基因全长13kb， 包含10个外显子和9个内含子， 编码412个氨基酸； 目前 国际上有 多种ACAD S基因突变 类型报道， 多为 错义突变。 [0003]因此， 基因突变是导致疾病 发生发展的重要遗传基础， 基因诊断是确诊短链酰基 辅酶A脱氢酶缺乏症的金标准。 临床上需要针对不同突变建立相应的检测技术并用于明确 病因和疾病诊断， 现有技术中对基因突变位点基因型的检测方法包括限制性酶切片段长度 多态性、 单链构象多态性、 等位基因特异的寡聚核苷酸杂交等， 但 这些检测方法均不能同时 满足定性、 定量及明确突变基因序列的目的， 所以需要针对特异 突变位点设计引物， 并结合 sanger测序技术完成基因序列检测工作。 但目前并没有 能特异性区分短链酰基辅酶A脱氢 酶缺乏症患者、 携带者和正常人群的诊断试剂的报道。 发明内容 [0004]为了解决上述问题， 本发明提供了一种短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症的诊断试剂 和试剂盒。 本发明提供的诊断试剂， 可以助力短链酰基辅酶A脱 氢酶缺乏症基因突变的筛查 和诊断， 可以特异性区分 短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症患者、 携带者和正常人群。 [0005]为了实现上述目的， 本发明提供如下技 术方案： [0006]本发明提供了利用生物标志物在制备短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症诊断试剂或试 剂盒中的应用， 所述生物标志物在登录号为NM_000017.4的10号外显子的第1195位存在C>T 突变。 [0007]本发明还提供了一种短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症的诊断试剂， 所述试剂包括扩 增生物标志物的引物； 所述生物标志物在登录号为NM_000017.4的10号外显子的第1195位 存在C>T突变； [0008]扩增所述 生物标志 物的引物包括ACAD S‑F和ACADS‑R；说　明　书 1/13 页 3 CN 115216532 A 3