(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210724296.6 (22)申请日 2022.06.23 (71)申请人 广西医科 大学附属肿瘤医院 地址 530021 广西壮 族自治区南宁市青秀 区河堤路71号 (72)发明人 刘军杰　陈洁　罗涛　 (74)专利代理 机构 北京鑫瑞森知识产权代理有 限公司 1 1961 专利代理师 王立普 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6806(2018.01) C12N 15/11(2006.01) G06F 16/9035(2019.01) G16B 30/10(2019.01)G16B 50/00(2019.01) (54)发明名称 一种肝癌多结节相关驱动基因的筛选方法 及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种肝癌多结节相关驱动基 因的筛选方法及其应用， 属于医学技术领域。 该 方法包括以下步骤： (1)收集肝癌组织标本及对 照癌旁标本； (2)提取样本DNA进行全外显子组测 序； (3)生物信息学分析； (4)结合样本的病理学 信息特征进行个性化分析， 得到与肝癌多结节发 生密切相关的驱动基因并进行功能富集。 本发明 筛选得到了多个与人类肝癌发生有关的驱动基 因， 如： MTOR、 CDKN1A、 MACF1、 CHD8和KDM6B等。 因 此， 本发明为多结节肝癌的精 准医疗提供了科学 依据。 权利要求书1页 说明书8页 附图4页 CN 115044677 A 2022.09.13 CN 115044677 A 1.一种肝癌多结节相关驱动基因的筛 选方法， 其特 征在于， 所述方法包括以下步骤： (1)收集肝癌组织标本及对照癌旁 标本； (2)提取样本DNA进行全外 显子组测序； (3)生物信息学分析。 2.根据权利要求1所述的筛选方法， 其特征在于， 所述步骤(2)的具体操作为： 采取 Covaris技术将检测合格的DNA样品打断成180 ‑220bp的片段， 采用Roche  NimbleGen   SeqCap EZ Exome V3/Agilent  SureSelect  HumanAll  Exon V6外显子捕获试剂盒构 建文 库， 经Illumina Nova Seq6000系列测序仪 完成双端测序。 3.根据权利要求2所述的筛选方法， 其特征在于， 所述步骤(3)的具体操作为： 原始下机 数据进行过滤后得到高质量数据， 将之与参考基因组序列进行比对， 后再完成生物信息学 分析。 4.根据权利要求3所述的筛选方法， 其特征在于， 还包括步骤(4)结合样本的病理学信 息特征进行个性 化分析， 得到与肝癌多结节发生密切相关的驱动基因并进行功能富 集。 5.根据权利要求4所述的筛选方法， 其特征在于， 筛选得到的肝癌结节相关驱动基因包 括MTOR、 CDKN1A、 MACF1、 C HD8和KDM6B。 6.权利要求1 ‑5中任一项所述的筛 选方法在肝癌多结节相关驱动基因筛 选中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115044677 A 2一种肝癌多结节相关驱动基因的筛选方 法及其应用 技术领域 [0001]本发明属于医学技术领域， 尤其涉及一种肝癌 多结节相关驱动基 因的筛选方法及 其应用。 背景技术 [0002]原发性肝癌是常见的恶性肿瘤之一， 其发病率在全球范围内呈上升趋势。 而在中 国 ， 肝癌发病率已 位居恶性肿瘤第4 ， 并且是第2位肿瘤致死病因。 肝细胞癌 (hepatocellular  carcinoma,  HCC)是最常见的肝癌类型， 约占病例总数的90％。 目前， 肝 癌的外科治疗包括肝切除术和肝移 植术仍是肝癌病人获得长期生存最重要的手段。 但手术 切除治疗后面临的转移和高复发率问题是制约肝癌 患者术后生存率的一大难题。 [0003]研究表明， 肿瘤数目可作为影响肝癌患者术后早期复发的独立危险因素， 对预后 判断有价值。 但以往的研究主要通过癌结节间的影像学特征和病理组织学表现来区分不同 的转移灶， 该方法不适用于早期转移或中低分化水平的肝癌患者， 不能有效的阐明肝癌结 节间的异质性。 因此， 寻找新的分子标记， 更好的评估肝癌患者的转移潜能和预后进而指导 临床决策， 及时采取有效的个 体化防治方案是提高肝癌疗效的关键 。 [0004]全外显子组测 序技术能够有效识别蛋白质编码区中的基因突变， 是精准医学背景 下用于检测致病突变基因和 易感基因位点的常用技术。 应用该技术， 研究人员发现了多个 与人类肝癌发生有关的驱动基因， 如： TP53、 ARID1A、 CTNNB1、 CDKN2A和PTEN等。 因此， 本研究 选取了具有单个和多个肝癌结节背景的肝癌病人样本进行外显子组测序， 以期揭示多 结节 肝癌发生 发展中的体细胞突变图谱和可能的调控模式， 为多 结节肝癌的精准医疗提供科学 依据。 发明内容 [0005]本发明一方面提供一种肝癌多结节相关驱动基因的筛选方法， 所述方法包括以下 步骤： [0006](1)收集肝癌组织标本及对照癌旁 标本； [0007](2)提取样本DNA进行全外 显子组测序； [0008](3)生物信息学分析。 [0009]优选地， 所述步骤(2)的具体操作为： 采取Covaris技术将检测合格的DNA样品打断 成180‑220bp的片段， 采用Roche  NimbleGen  SeqCap EZ Exome V3/Agilent SureSelect   Human All  Exon V6外显子捕获试剂盒构建文库， 经Illumina  Nova Seq6000系列测序仪完 成双端测序。 [0010]更优选地， 所述步骤(3)的具体操作为： 原始下机数据进行过滤后得到高质量数 据， 将之与参 考基因组序列进行比对， 后再完成生物信息学分析。 [0011]更优选地， 还包括步骤(4)结合样本的病理学信息特征进行个性化分析， 得到与肝 癌多结节发生密切相关的驱动基因并进行功能富 集。说　明　书 1/8 页 3 CN 115044677 A 3