(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210874770.3 (22)申请日 2022.07.25 (71)申请人 浙江麦大基因科技有限公司 地址 316100 浙江省舟山市普陀区东港街 道海洋工业园区新驰路68号E幢4楼 (72)发明人 韩秀群　李扬兮　张旭峰　 (74)专利代理 机构 宁波市鄞州盛飞专利代理事 务所(特殊普通 合伙) 33243 专利代理师 王玲华 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12Q 1/6869(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种致病基因WFS1突变位点的检测方法及 试剂盒 (57)摘要 本发明公开了一种致病基因WFS1突变位点 的检测方法及试剂盒， 其包括扩增检测其CDS区 域的9个序列引物对； 本发明结合Sanger测序技 术， 可快速地将WFS1基因CDS区域相关的突变检 测出来， 利用本发明完成的检测结果准确， 可 以 完善Wolfram综合征的诊断， 并为其治疗提供理 论依据。 权利要求书4页 说明书9页 附图8页 CN 115141885 A 2022.10.04 CN 115141885 A 1.一种检测WFS1突变的引物系列， 其特征在于所述引物系列包括扩增WFS1第2 ‑8外显 子序列的引物对， 其碱基序列分别为: 扩增WFS1第2外 显子序列的引物对： WFS1‑Exon2‑F:ttttctgtctc cagcagacactaa WFS1‑Exon2‑R:ccacccagctatccctgaacatc； 扩增WFS1第3 外显子序列的引物对： WFS1‑Exon3‑F:agcagatctgaagaccctcatgc WFS1‑Exon3‑R:ggaaaactggcacagtgaacatgg； 扩增WFS1第4外 显子序列的引物对： WFS1‑Exon4‑F:tgacaaagggaagtgggtgaaag WFS1‑Exon4‑R:caccagcgttaggtttggtaagattt； 扩增WFS1第5和第6 外显子序列的引物对： WFS1‑Exon5&6‑F:cgcgatgtcctcttgagtcag WFS1‑Exon5&6‑R:tgggaggcacgggtgagata； 扩增WFS1第7外 显子序列的引物对： WFS1‑Exon7‑F:gcccatgctgt tttctctcatgc WFS1‑Exon7‑R:acggctgtaagacactctttgttagg； 扩增WFS1第8外 显子序列的引物对1： WFS1‑Exon8‑F1:cctcgttcccacgtaccatctt WFS1‑Exon8‑R1:ccatcgaccagtgccatttcttc； 扩增WFS1第8外 显子序列的引物对2： WFS1‑Exon8‑F2:tcatct tctccttccccatcgcc WFS1‑Exon8‑R2:ccaggatgaagcttgaccatgga； 扩增WFS1第8外 显子序列的引物对3： WFS1‑Exon8‑F3:tctctg gagctcaccaagatcgc WFS1‑Exon8‑R3:gcatgc ccacggtaatctcaaa； 扩增WFS1第8外 显子序列的引物对4： WFS1‑Exon8‑F4:ctgccacatcaagaagttcgacc WFS1‑Exon8‑R4:gtattcagagtggacagagctacaca。 2.一种致病基因WFS1突变位 点的检测方法， 其特 征在于所述检测方法包括以下步骤： (1)提取外周血中的基因 组DNA； (2)利用WFS1基因第2 ‑8外显子引物对 扩增步骤(1)中提取的DNA； (3)对步骤(2)中的扩增产物进行测序； (4)对测序结果进行比对， 确定WFS1基因是否发生 突变。 3.如权利 要求2所述一种致病基因WFS1突变位点的检测方法， 其特征在于所述步骤(1) 中抽提外周血中的基因组DNA可采用商业的试剂盒， 优选为血液基因组DNA抽提试剂盒， 由 生工生物工程(上海)股份有限公司生产。 4.如权利 要求2所述一种致病基因WFS1突变位点的检测方法， 其特征在于所述步骤(2) 中PCR扩增的扩增体系中添加了DMSO； 所述DMSO添加的体积占总扩增体系体积的5％ ‑10％，权　利　要　求　书 1/4 页 2 CN 115141885 A 2优选5.2％。 5.如权利 要求2所述一种致病基因WFS1突变位点的检测方法， 其特征在于所述步骤(2) 中PCR扩增的扩增体系为： 6.如权利 要求2所述一种致病基因WFS1突变位点的检测方法， 其特征在于所述步骤(2) 中PCR扩增的扩增条件： 7.如权利 要求2所述一种致病基因WFS1突变位点的检测方法， 其特征在于所述步骤(2) 中PCR扩增的引物为 WFS1第2‑8外显子序列的引物对， 其碱基序列分别为： 扩增WFS1第2外 显子序列的引物对： WFS1‑Exon2‑F:ttttctgtctc cagcagacactaa WFS1‑Exon2‑R:ccacccagctatccctgaacatc； 扩增WFS1第3 外显子序列的引物对： WFS1‑Exon3‑F:agcagatctgaagaccctcatgc WFS1‑Exon3‑R:ggaaaactggcacagtgaacatgg； 扩增WFS1第4外 显子序列的引物对： WFS1‑Exon4‑F:tgacaaagggaagtgggtgaaag WFS1‑Exon4‑R:caccagcgttaggtttggtaagattt； 扩增WFS1第5和第6 外显子序列的引物对： WFS1‑Exon5&6‑F:cgcgatgtcctcttgagtcag WFS1‑Exon5&6‑R:tgggaggcacgggtgagata；权　利　要　求　书 2/4 页 3 CN 115141885 A 3