(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210576013.8 (22)申请日 2022.05.24 (71)申请人 东北农业大 学 地址 150030 黑龙江省哈尔滨市香坊区木 材街59号 (72)发明人 谢福春　李勋　陈雅君　崔国文　 秦立刚　胡国富　李冰　张攀　 孙晓阳　 (74)专利代理 机构 哈尔滨市松花江专利商标事 务所 23109 专利代理师 李红媛 (51)Int.Cl. C12N 15/113(2010.01) C12N 15/11(2006.01) C12N 15/10(2006.01) (54)发明名称 一种草地早熟禾谷氨酰胺合成酶基因 PpGS1.1启动子的克隆及其应用 (57)摘要 一种草地早熟禾谷氨酰胺合成酶基因 PpGS1.1启动子的克隆及其应用， 它涉及基因工 程领域， 本发 明为了填补现有资源中草地早熟禾 PpGS1.1启动子序列研究上的空白， 以期为改良 草地早熟禾氮素吸收与利用能力和提高草地早 熟禾的坪用品质奠定基础。 本发明的引物， SP1： 5'‑GCGGCCATGACAAGAATAAGAAG ‑3'； SP2： 5' ‑ GCGATGATCTTCTCGGTGGTGT ‑3 '； SP3： 5 ' ‑ AGATCGGTGAGGAGCGCCATAA ‑3 '； SP4： 5 ' ‑ TCGAACCGATGTACCGTATATGG ‑3'。 PpGS1.1基因启 动子片段的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示。 权利要求书4页 说明书19页 序列表3页 附图6页 CN 114736903 A 2022.07.12 CN 114736903 A 1.一种克隆草地早熟禾谷氨酰胺合成酶PpGS1.1基因启动子片段的引物， 其特征在于： 所述的引物序列如下： SP1： 5'‑GCGGCCATGACAAGAATAAGAAG‑3'； SP2： 5'‑GCGATGATCT TCTCGGTGGTGT‑3'； SP3： 5'‑AGATCGGTGAGGAGCGCCATAA‑3'； SP4： 5'‑TCGAACCGATGTAC CGTATATG G‑3'。 2.采用权利要求1所述的引物获取得到的PpGS1.1基因启动子， 其特征在于： 所述的 PpGS1.1基因启动子片段的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示。 3.包含权利要求1所述的引物的试剂盒。 4.采用权利要求1所述的引物克隆早熟禾谷氨酰胺合成酶PpGS1.1基因启动子片段的 方法， 其特 征在于： 它是按照如下 方式进行的： 步骤一、 提取草 地早熟禾的基因 组DNA； 步骤二、 以草地早熟禾的基因组DNA为模板， 采用权利要求1所述的引物进行PCR扩增， 通过琼脂糖凝胶电泳， 回收PCR产物， 即得 所述的PpGS1.1基因启动子片段。 5.根据权利 要求4所述的克隆早熟禾谷氨酰胺合成酶PpGS1.1基因启动 子片段的方法， 其特征在于： 所述的PCR扩增是分四轮PCR扩增完成的， 具体为： 第一轮PCR扩增： 以草地早熟禾的基因组DNA为模板， 采用简并引物以及SP1作 为引物进 行扩增； 第二轮PCR扩增： 取第一轮PCR扩增产物为模板， 采用简并引物以及SP2作 为引物进行扩 增； 第三轮PCR扩增： 取稀释100倍第二轮PCR扩增产物为模板， 采用简并引 物以及SP3作为 引物进行扩增； 第四轮PCR扩增： 取稀释100倍第三轮PCR扩增产物为模板， 采用简并引 物以及SP4作为 引物进行扩增。 6.根据权利 要求4或5所述的克隆早熟禾谷氨酰胺合成酶PpGS1.1基因启动 子片段的方 法， 其特征在于： 所述的PCR扩增是分四轮PCR扩增完成的， 其中， 第一轮的PCR扩增体系如下： 第一轮的PCR扩增条件如下：权　利　要　求　书 1/4 页 2 CN 114736903 A 2第二轮的PCR扩增体系如下： 第二轮的PCR扩增条件如下： 第三轮的PCR扩增体系如下：权　利　要　求　书 2/4 页 3 CN 114736903 A 3