(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210919207.3 (22)申请日 2022.08.02 (71)申请人 吉林正业生物制品股份有限公司 地址 132000 吉林省吉林市昌邑区九站街 道联盟街 一号 (72)发明人 姬洪卫　宋松林　廉维　李晓蕊　 王国辉　边少国　孟相秋　李爽　 贾小营　吴晶　张馨元　周洋　 江松寰　包俊威　蒋焯　陈彦男　 (74)专利代理 机构 沈阳一诺君科知识产权代理 事务所(普通 合伙) 2126 6 专利代理师 刘丽娟 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6851(2018.01)C12N 15/11(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 一种荧光定量PCR检测禽腺病毒的引物、 试 剂盒及方法 (57)摘要 本发明公开了一种荧光定量PCR检测禽腺病 毒的引物、 试剂盒及方法， 本发明通过在PCR反应 中加入过量荧光染料， 该染料与DNA双链小沟结 合， 且游离状态不发荧光， 只有与 DNA摻入后才发 光， 因此在PCR体系中随着PCR产物的增加荧光强 度加强可快速准确检测禽腺病毒， 且染料荧光定 量PCR特异性高、 灵敏度强、 反应时间短， 可进行 相对定量对比不同样本病毒 含量。 权利要求书1页 说明书3页 附图1页 CN 115261516 A 2022.11.01 CN 115261516 A 1.一种荧 光定量PCR检测禽腺病毒的引物， 其特 征在于， 所述引物如下： 上游引物F： 5 ’ ‑TCCTTGTTACCTCCCTCTACTT‑3’； 下游引物R： 5 ’ ‑GGGTTGCATTGCTGGAGATA‑3’。 2.一种荧光定量PCR检测禽腺病毒的试剂盒， 其特征在于， 包含如权利要求1所述的荧 光定量PCR检测禽腺病毒的引物、 荧 光染料、 阴 阳性对照。 3.一种荧 光定量PCR检测禽腺病毒的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 步骤一、 取待检测样品进行PCR扩增； 步骤二、 在PCR反应 中加入过量荧光染料， 该染料与DNA双链小沟结合， 且游离状态不发 荧光， 只有与DNA摻入后才发光， 因此通过检测PCR反应液中的荧光信号强度来对目的基因 进行准确定量。 4.根据权利 要求3所述的荧光定量PCR检测禽腺病毒的方法， 其特征在于： 所述PCR扩增 的标准程序包括： Stage 1、 预变性： 95℃， 3 0秒； Stage 2、 PCR反应： 95℃、 5秒， 6 0℃、 30秒， 45循环； Stage 3、 溶解曲线： 95℃、 5秒， 6 0℃、 30秒， 95℃、 5秒。 5.根据权利要求3所述的荧光定量PCR检测禽腺病毒的方法， 其特征在于： 所述荧光染 料为TB Green。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115261516 A 2一种荧光定量PCR检测禽腺病毒 的引物、 试剂盒及方 法 技术领域 [0001]本发明涉及荧光定量PC R检测技术领域， 特别是一种荧光定量PC R检测禽腺病毒的 引物、 试剂盒及方法。 背景技术 [0002]禽腺病毒属于腺病毒科禽腺病毒属成员， 腺病毒科(Adenoviridae)可分为5个属， 腺胸腺病毒属(Atadenovirus)、 禽腺病毒属(Aviadenovirus)、 鱼腺病毒属 (Ichtadenovirus)、 哺乳动物腺病毒属(Mastadenovirus)和唾液酸酶病毒属 (Siadenovirus)。 根据目前的分类， 禽腺病毒属共有12 个种： 5个禽(禽腺病毒A ‑E)、 3个火鸡 (火鸡腺病毒B ‑D)、 1个隼(隼腺病毒A)、 1个鹅(鹅腺病毒A)、 1个鸭(鸭腺病毒B)和1个鸽(鸽 腺病毒A)腺病毒种。 根据血清 中和试验， 禽腺病毒A ‑E又可分为12个血清型。 腺病毒大部分 为长期潜伏病毒， 引起无症状的感染， 其中部分可以引起致病。 Ⅰ群禽腺病毒存在于多种禽 类的呼吸道和 消化道， 作为原发病原引起发病， 往 往与其他病毒混合感染致病。 [0003]目前， 市面上禽腺病毒检测方法少没有成熟的检测试剂盒， 且无法对不 同样本病 毒含量进行比较。 发明内容 [0004]本发明的目的是要解决现有技术中存在的不足， 提供一种荧光定量PCR检测禽腺 病毒的引物、 试剂盒及方法。 [0005]为达到上述目的， 本发明是按照以下技 术方案实施的： [0006]本发明的第一个目的是要提供一种荧光定量PCR检测禽腺病毒的引物， 所述引物 如下： [0007]上游引物F： 5 ’ ‑TCCTTGTTACCTCCCTCTACTT‑3’； [0008]下游引物R： 5 ’ ‑GGGTTGCATTGCTGGAGATA‑3’。 [0009]本发明的第二个目的是要提供一种荧光定量PCR检测禽腺病毒的试剂盒， 包含上 述荧光定量PCR检测禽腺病毒的引物、 荧 光染料、 阴 阳性对照。 [0010]本发明的第三个目的是要提供一种荧光定量PCR检测禽腺病毒的方法， 包括以下 步骤： [0011]步骤一、 取待检测样品进行PCR扩增； [0012]步骤二、 在PC R反应中加入过量荧光染料， 该染料与D NA双链小沟结合， 且游离状态 不发荧光， 只有与DNA摻入后才发光， 因此通过检测PCR反应液中的荧光信号强度来对目的 基因进行准确定量。 [0013]进一步地， 所述PCR扩增的标准 程序包括： [0014]Stage 1、 预变性： 95℃， 3 0秒； [0015]Stage 2、 PCR反应： 95℃、 5秒， 6 0℃、 30秒， 45循环； [0016]Stage 3、 溶解曲线： 95℃、 5秒， 6 0℃、 30秒， 95℃、 5秒。说　明　书 1/3 页 3 CN 115261516 A 3