(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210642388.X (22)申请日 2022.06.08 (71)申请人 北京诺安百汇医药 科技有限公司 地址 100089 北京市海淀区开拓路5号2层 B209 (72)发明人 潘强　任慧英　于凌云　孙虎芝　 田延军　 (51)Int.Cl. C12N 9/88(2006.01) C12N 15/60(2006.01) C12N 15/11(2006.01) C12N 15/70(2006.01) A61K 38/51(2006.01) A61P 31/04(2006.01) (54)发明名称 一种裂解 酶、 编码基因、 组合物、 抑菌剂制备 方法及应用 (57)摘要 本申请属于分子生物学技术领域， 尤其涉及 一种裂解酶、 编码基因、 组合物、 抑菌剂制备方法 及应用。 一种葡萄球菌噬菌体裂解酶PB50， 其氨 基酸序列如SEQ  ID NO.1所示。 一种编码权利要 求1所述的葡萄球菌裂解酶PB50的基因， 所述基 因序列如SEQ  ID NO.2所示。 本申请的裂解酶能 够快速裂解葡萄球菌， 裂解 酶的异源表达可溶性 强， 包涵体 较少。 权利要求书2页 说明书13页 序列表2页 附图3页 CN 114990098 A 2022.09.02 CN 114990098 A 1.一种葡萄球菌噬菌体 裂解酶PB5 0， 其特征在于： 其氨基酸序列如SEQ  ID NO.1所示。 2.一种编码权利要求1所述的葡萄球菌裂解酶PB50的基因， 其特征在于： 所述基因序列 如SEQ ID NO.2所示。 3.如权利要求2所述编码权利要求1所述葡萄球菌噬菌体裂解酶PB50的基因 的用途， 其 特征在于： 应用时采用该基因重组表达产生权利要求1所述的能裂解葡萄球菌的酶。 4.一种抑菌组合物， 其特征在于： 包括如权利要求1或2所述的葡萄球菌噬菌体裂解酶 PB50。 5.一种抑菌剂， 其特征在于： 其主要活性成分为葡萄球菌噬菌体裂解酶PB50、 含有PB50 表达元件的载体、 含有PB50表达元件的表达盒或含有PB50表达元件的宿主细胞中的至少一 种， 裂解酶PB50的氨基酸序列为SEQ  ID NO.1所示或者编码葡萄球菌裂解酶PB50的基因序 列如SEQ ID NO.2所示。 6.根据权利要求5所述的抑菌剂， 其特征在于： 抑菌谱为人源葡萄球菌和动物源葡萄球 菌。 7.一种PCR引物组， 其特征在于： 包括特异性扩增葡萄球菌噬菌体PB50基因的引物对 pET22b‑PB50‑F’和pET22b ‑PB50‑R’、 pET25b‑PB50‑F’和pET25b ‑PB50‑R’、 pET28a‑PB50‑F’ 和pET28a ‑PB50‑R’或pET32a ‑PB50‑F’和pET32a ‑PB50‑R’， 各个引物的核苷酸序列分别为： pET22b‑PB50‑F’： GGAATTCCATATGAAAACAAAAACTCAAGCTCTTG Nde I酶切位点 pET22b‑PB50‑R’： CCGCTCGAGACTA AATGTACCCCATGCAGCAC Xhol I酶切位点 pET25b‑PB50‑F’： GGAATTCCATATGAAAACAAAAACTCAAGCTCTTG Nde I酶切位点 pET25b‑PB50‑R’： CCGCTCGAGACTA AATGTACCCCATGCAGCAC Xhol I酶切位点 pET28a‑PB50‑F’： CGGGATCCATGAAAACAAAAACTCAAGCTCTTG BamH I酶切位点 pET28a‑PB50‑R’： CCGCTCGAGT TAACTAAATGTACCCCATGCAGCAC CA Xhol I酶切位点 pET32a‑PB50‑F’： CGGGATCCATGAAAACAAAAACTCAAGCTCTTG BamH I酶切位点 pET32a‑PB50‑R’： CCGCTCGAGT TAACTAAATGTACCCCATGCAGCAC CA Xhol I酶切位点， 引物对用于扩增的目的片段的大小为798bp。 8.葡萄球菌噬菌体裂解酶PB50的制备方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 以葡萄球菌噬 菌体基因组为模板， 加入引物， PCR扩增， 回收葡萄球菌噬菌体裂解 酶PB50的编码基因， 与相 同酶切后的表达载体骨架连接， 验证为阳性的重组表达载体pET ‑PB50转化表达宿主BL21 (DE3)后， 经液体培养基培养， 诱导表达， 收集菌体， 提取， 纯化， 葡萄球菌噬菌体裂解 酶PB50 具有如SEQ  ID NO.1所示的氨基酸序列。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114990098 A 29.如权利要求8所述葡萄球菌噬菌体裂解酶PB50的制备方法， 其特征在于： 所述的酶切 采用Nde I/Xho I或者BamH  I/Xho I双酶切。 10.如权利要求8 或9所述的葡萄球菌噬菌体裂解酶PB50的制备方法， 其特征在于， 所述 的表达载体骨架为pET2 2b、 pET25b、 pET28a或pET32a。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114990098 A 3