(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210768281.X (22)申请日 2022.06.30 (71)申请人 湖南家辉生物技 术有限公司 地址 410205 湖南省长 沙市高新 开发区麓 谷麓景路2号 (72)发明人 曾桥　李婵艺　刘鑫林　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 专利代理师 苏士莹 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6858(2018.01) (54)发明名称 一种诱导Muenke综合征的突变基因及其诊 断试剂 (57)摘要 本发明一种诱导Muenke综合征的突变基因 及其诊断试剂， 涉及医学诊断技术领域。 本发明 首次发现FGFR3一种新型突变， 可导致Muenke综 合征， 并据此研制相应的诊断试剂盒， 助力 Muenke综合征基因突变的筛查和诊断， 并为其药 物筛选、 药效评价及靶向治疗提供新的技术支 持。 本发明所提供的诊断试剂盒可用于快速、 有 效地预测或诊断Muenke 综合征。 本发明为Muenke 综合征的发病机制研究奠定了重要基础， 为 Muenke综合征患者的治疗 提供全新的理论依据。 本发明还可以为治疗Muenke综合征提供可能的 药物靶点。 权利要求书1页 说明书16页 序列表6页 附图2页 CN 115216535 A 2022.10.21 CN 115216535 A 1.一种诱导Muenke综合征的突变基因， 其特征在于， 所述突变基因的位点为FGFR3:NM_ 000142.4:exo n7:c.749_75 0delinsGC:p.P25 0R。 2.一种用于Muenke综合征基因诊断的试剂， 其特征在于， 包括基于权利要求1所述突变 基因设计的特异性扩增引物。 3.根据权利要求2所述试剂， 其特征在于， 所述特异性扩增引 物包括FGFR3 ‑F和FGFR3 ‑ R， 所述FGFR3 ‑F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示， 所述FGFR3 ‑R的核苷酸序列如SEQ  ID  NO.2所示。 4.一种检测权利要求1所述突变基因的特异性扩增引物， 其特征在于， 所述特异性扩增 引物包括FGF R3‑F和FGFR3 ‑R， 所述FGF R3‑F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示， 所述FGF R3‑R 的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示。 5.权利要求1所述突变基因或权利要求2或3所述试剂或权利要求4所述特异性扩增引 物在构建Muen ke综合征基因诊断工具中的应用。 6.根据权利要求5所述应用， 其特 征在于， 所述诊断工具包括诊断试剂盒。 7.根据权利要求6所述应用， 其特征在于， 利用所述诊断工具进行PCR检测时， 以血液或 羊水为样本来源。 8.根据权利要求7所述应用， 其特征在于， 所述PCR检测的程序包括： 95℃预变性5min； 95℃变性3 0s， 56℃退火3 0s， 72℃延伸6 0s， 30个循环； 72℃再延伸7mi n。 9.一种用于Muenke综合征基因诊断的试剂盒， 其特征在于， 包括权利要求2或3所述试 剂或权利要求4所述特异性扩增引物， 还包括PCR扩增反应中的常规试剂， 和 /或DNA测序使 用的试剂及测序引物。 10.根据权利要求9所述试剂盒， 其特征在于， 所述测序引物包括FGFR3 ‑SeqF和FGFR3 ‑ SeqR， 所述FGFR3 ‑SeqF的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示， 所述FGF R3‑SeqR的核苷酸序列如 SEQ ID NO.4所示。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115216535 A 2一种诱导Muenke综合征的突变基因及其诊断试剂 技术领域 [0001]本发明属于医学诊断技术领域， 具体涉及一种诱导Muenke综合征的突变基因及其 诊断试剂。 背景技术 [0002]颅缝早闭症又称狭颅症， 是指出生时或出生后颅缝过早闭合导致的以颅骨畸形为 主要特点的一类疾病， 美国耶鲁大学报道 其发病率约为 1/2500。 由于颅缝过早闭合， 颅骨块 之间以膜状连接的延展性被破坏， 原本适合大脑发育的颅腔空间受 限， 导致受累颅骨对软 性大脑组织形成挤压甚至卡压。 严重者可伴有颅内高压、 脑积水、 脑发育落后、 智力发育低 下等。 外形方面， 颅骨在垂直于闭合颅缝方向生长受到限制， 同时随着大脑的生长发育， 颅 骨在平行于闭合颅缝方向代偿性生长， 导致头颅畸形。 颅缝早闭症按颅面畸形 的严重程度 和是否伴有其 他脏器的疾病可分为单 纯型颅缝早闭症和综合征 型颅缝早闭症。 [0003]单纯型颅缝早闭症发病率约在0.4 ‑1/1000， 与综合征型颅缝早闭症相比， 单纯型 颅缝早闭症通常累及一条颅缝， 且不伴有面中部发育不良、 躯干及四肢畸形等。 常见的类型 有矢状缝早闭、 单侧冠状缝早闭、 双侧冠状缝早闭、 额缝早闭、 人字缝早闭等。 [0004]综合征型颅缝早闭症患儿多伴有颅内高压， 严重者可伴有脑发育落后， 基因检查 常能找到突变基因。 除早闭颅缝所致的头颅畸形外， 还常伴有严重的面部发育畸形和手足 畸形。 综合征型颅缝早闭症临床表现复杂多样， 文 献报道有一百余种， 常见的有Mu enke综合 征、 Crouzon综合征、 Apert综合征、 Pfeiffer综合征、 Carpenter综合征和 Saethre‑Chotzen 综合征等。 [0005]Muenke综合征是常染色体显性遗传性疾病。 临床主要表现为正常身高、 发育迟缓、 智力低下、 大头畸形、 冠状颅缝早闭、 眼距过宽、 感音神经性听力损伤、 斜视以及上睑下垂 等。 Muenke综合征是颅缝骨病最 常见的综合征形式， 发病率为1/30000。 FGFR3(MIM  134934) 基因位于染色体4p 16.3， 基因全长15.6kb， 包含18个外显子和17个内含子， 编码806个氨基 酸。 目前国际上人类基因突变数据库(HGMD)已收录的FGFR3基因突变多为点突变， 包括无义 突变和错义突变。 该基因在Muenke综合征中最常见突变是p.Pro250Arg。 FGFR3基因突变导 致软骨发育障碍的机制与FGFR3的激活性突变有关， 突变型受体自主兴奋， 激活其对骨生长 的抑制作用， 使软骨增生、 分化和软骨内成骨过程受到持续性抑制， 软骨内化骨不能正常进 行， 骨骺软骨 细胞发育障碍 。 [0006]因此， 基因突变是导致疾病发生发展的重要遗传基础， 基因诊断是确诊Muenke综 合征的重要遗传学标准。 临床上需要针对不同突变建立相应的检测技术并用于明确病因和 疾病诊断。 发明内容 [0007]有鉴于此， 本 发明的目的在 于提供一种诱导Muenke综合征的突变基因及其诊断试 剂， 助力Mu enke综合征基因突变的筛查和诊断， 并为其药物筛选、 药效评价及靶向治疗提供说　明　书 1/16 页 3 CN 115216535 A 3