(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210608605.3 (22)申请日 2022.05.31 (71)申请人 广东华银医药 科技有限公司 地址 510663 广东省广州市经济技 术开发 区科学城揽月路8 0号广州科技创新基 地C区第三层 (72)发明人 张海强　罗园香　付军鹏　张芬　 (74)专利代理 机构 广州帮专高智知识产权代理 事务所 (特殊普通合伙) 44674 专利代理师 颜德昊 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01)C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 一种麻疹病毒、 风疹病毒和腮腺炎病毒核酸 检测的引物探 针组合物和检测试剂盒 (57)摘要 本发明公开了一种麻疹病毒、 风疹病毒和腮 腺炎病毒核酸检测的引物探针组合物和检测试 剂盒， 涉及病毒核酸检测技术领域。 本发明的麻 疹病毒、 风疹病毒和腮腺炎病毒核酸检测的引物 探针组合物， 包括用于检测麻疹病毒和/或风疹 病毒和/或腮腺炎病毒核酸的引物探针。 本发明 针对麻疹病毒、 风疹病毒和腮腺炎病毒同时进行 多重实时荧光PCR检测分析， 对麻疹、 风疹及流行 性腮腺炎的临床检测及预防诊断有积极作用。 本 发明的检测试剂盒检测灵敏度高、 特异性强、 重 复性好， 可以对临床样本实现快速鉴别诊断， 使 得不同患者得到及时针对性预防和治 疗。 权利要求书2页 说明书9页 序列表5页 附图8页 CN 114891928 A 2022.08.12 CN 114891928 A 1.一种麻疹病 毒、 风疹病 毒和腮腺炎病 毒核酸检测的引物探针组合物， 其特征在于， 包 括用于检测麻疹病毒和/或风疹病毒和/或腮腺炎病毒 核酸的引物探针， 其中， 用于检测麻疹病毒的引物和探针为： 正向引物： SEQ  ID NO： 1； 反向引物： SEQ  ID NO： 2； 探针： SEQ ID NO： 3； 用于检测风疹病毒的引物和探针为： 正向引物： SEQ  ID NO： 4； 反向引物： SEQ  ID NO： 5； 探针： SEQ ID NO： 6； 用于检测腮腺炎病毒的引物和探针为： 正向引物： SEQ  ID NO： 7； 反向引物： SEQ  ID NO： 8； 探针： SEQ ID NO： 9。 2.根据权利要求1所述的引物探针组合物， 其特 征在于， 还包括用于检测内标对照基因的引物和探针， 优选地， 内标对照基因为GAPDH基因， 检 测GAPDH基因的引物和探针为： 正向引物： SEQ  ID NO： 10； 反向引物： SEQ  ID NO： 11； 探针： SEQ ID NO： 12。 3.根据权利要求1或2所述的引物探针组合物， 其特 征在于， 检测GAPDH基因、 麻疹病毒、 风疹病毒、 腮腺炎病毒核酸的检测探针的5 ’端和3’端分别 连接有荧光报告基团和荧光淬灭基团， 不同探针上 的荧光报告基团各不相同且互不干扰， 优选地， 各探针中荧光报告基团分别选自VIC、 FAM、 ROX、 HEX和CY5中的一种； 各探针中荧光 淬灭基团为BHQ ‑1或BHQ‑2或BHQ3。 4.根据权利要求1或2所述的引物探针组合物， 其特 征在于， 组合物中上、 下游引物的用量 为300～600nM； 组合物中探针的用量 为120～240nM。 5.根据权利要求1或2或3所述的引物探针组合物在制备多种病 毒核酸联合检测试剂 盒 中的应用。 6.根据权利要求5所述的应用， 其特 征在于， 所述病毒包括麻疹病毒和/或风疹病毒和/或腮腺炎病毒。 7.一种病毒核酸联合检测试剂盒， 其特征在于， 包括权利要求1所述的引物探针组合 物。 8.根据权利要求7 所述的病毒 核酸联合检测试剂盒， 其特 征在于， 还包括权利要求2所述的检测GAP DH基因的引物和探针； 检测GAPDH基因、 麻疹病毒、 风疹病毒、 腮腺炎病毒核酸的检测探针的5 ’端和3’端分别 连接有荧光报告基团和荧光淬灭基团， 不同探针上 的荧光报告基团各不相同且互不干扰， 优选地， 各探针中荧光报告基团分别选自VIC、 FAM、 ROX、 HEX和CY5中的一种； 各探针中荧光权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114891928 A 2淬灭基团为BHQ ‑1或BHQ‑2或BHQ3。 9.根据权利要求8所述的病毒 核酸联合检测试剂盒， 其特 征在于， 所述联合检测试剂盒还 包括PCR缓冲液、 酶混合液、 阴性对照和阳性对照。 10.根据权利要求9所述的病毒 核酸联合检测试剂盒， 其特 征在于， 所述PCR缓冲液组成包括： 28mol/LpH8.0Tris ‑HCl， 20mmol/L(NH4)2SO4， 30mmol/LKC1， 4.0mmol/LMgCl2， 0.2mol/LdNTPs； 所述酶混合液包括热启动Taq酶和逆转录酶， 其中热启动Taq酶的用量为3～8U/人份， 逆转录酶的用量 为2～5U/人份； 所述阳性对照： 麻疹、 风疹、 腮腺炎病毒和内标GAPDH重组质粒， 浓度为1.0 ×105copies/ mL； 所述阴性对照为 生理盐水。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114891928 A 3