(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210729770.4 (22)申请日 2022.06.24 (71)申请人 贵州省烟草科学研究院 地址 550004 贵州省贵阳市观山湖区龙 滩 坝路29号 (72)发明人 余世洲　曹领改　赵会纳　雷波　 张孝廉　刘杰　杨志晓　王丰　 任学良　 (74)专利代理 机构 贵阳中新专利商标事务所 52100 专利代理师 李亮　李龙 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) G16B 20/30(2019.01) (54)发明名称 一组辅助选择改良烟草品种 ‘K326’叶宽性 状的SNP位 点及对应KAS P标记 (57)摘要 本发明公开了一组辅助选择改良烟草品种 ‘K326’叶宽的SNP位点， 其特征在于： 所述的SNP 位点为烟草430K  SNP芯片探针编号为AX ‑ 117602251、 AX ‑117602267和AX ‑117598761的3个 位点， 所述的3个SNP位点及上下游各50nt的DNA 单链序列分别如SEQ  ID 1、 SEQ ID 2和SEQ ID 3 所示。 本发明提供的与烟草叶宽性状的SNP位点 及对应KASP检测引物， 能提高K32 6叶宽性状定向 改良中的选择效率， 加快新品种培 育进程。 权利要求书2页 说明书7页 序列表2页 附图4页 CN 114959104 A 2022.08.30 CN 114959104 A 1.一组辅助选择改良烟草品种 ‘K326’叶宽的SNP位点， 其特征在于： 所述的SNP位点为 烟草430K SNP芯片探针编号为AX ‑117602251、 AX‑117602267和AX‑117598761的3个位点， 所 述的3个SNP位点及上下游各50nt的DNA单链序列DNA序列分别如SEQ  ID 1、 SEQ ID 2和SEQ  ID 3所示。 2.根据权利 要求1所述的一组辅助选择改良烟草品种 ‘K326’叶宽的SNP位点， 其特征在 于： 所述的AX ‑117602251、 AX‑117602267、 AX‑117598761位 点基因型选择为 “AAGGCC”。 3.选择如权利要求1所述的一组辅助选择改良烟草品种 ‘K326’叶宽的SNP位点的方法， 其特征在于： 用于选择3个SNP位点AX ‑117602251、 AX ‑117602267和AX ‑117598761转化为 KASP标记， 提供对应的KAS P检测引物， 所述的引物如下： 检测AX‑117602251位点KASP引物： 正向引物1FAM： GAAGGTGACCAAGTTCATGCTACT TCCGCCAATCAATCCCAC； 正向引物1H EX： GAAGGTCGGAGTCAACGGATTACTTCCGCCAATCAATCCCAA； 反向引物1： CGCGAGTG GTTTCGTGACT TTGTCCCATCT； 检测AX‑117602267位点KASP引物： 正向引物 2FAM： GAAGGTGACCAAGTTCATGCTTAACACTAGGGATTCGTGACG GCA； 正向引物 2HEX： GAAGGTCGGAGTCAACGGATTTAACACTAGGGATTCGTGACG GCG； 反向引物 2： GAGGGTTGAATATAATGAGCCC； 检测AX‑117598761位 点KASP引物： 正向引物3FAM： GAAGGTGACCAAGTTCATGCTG GAGTCCTAGCTACAGCATCTCATG； 正向引物3 HEX： GAAGGTCGGAGTCAACGGATTGGAGTCCTAGCTACAGCATCTCATC； 反向引物3： GTAGTA AACAACAAACAAGGTC。 4.筛选如权利要求1所述的一组辅助选择改良烟草品种 ‘K326’叶宽的SNP位点的方法， 其特征在于： 包 含以下步骤： (1)将已构建的与烟草 叶宽性状相 关的烟草品种K326染色体片段代换系材料， 常规种 植在田间， 在成熟期测量烟草叶宽表型， 选出5～7个烟草叶片宽度较K326发生明显变大的 代换系材料， 再选出5～7个烟草叶片宽度较K326品种没有变化或者变小的代换系材料， 对 上述选出的宽叶组、 窄叶组材料， 叶片取样， 提取DNA， 然后利用郑州烟草研究院开 发定制的 430K SNP芯片进行基因分型； (2)对上述各材料430K  SNP芯片基因分型结果进行处理， 首先剔除掉没有多态性的SNP 位点及低质量的SNP位点， 仅保留纯合且具有多态性的SNP位点， 然后依次对每个材料与对 照材料K326各SNP位点上基因型进 行比较， 并根据与对照材料K326基因型的异同进行转换， 与K326相同记为 “XX”， 与K326不同记录为 “YY”； (3)将各SNP位点的基因型类型与表型进行组合， 如基因型为 “XX”， 表型为“BLG”， 记为权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114959104 A 2“BLG‑XX”， 则共有4种组合类型， 分别为 “BLG‑XX”、“BLG‑YY”、“NLG‑XX”和“NLG‑YY”， 统计各 组合类型包含材料的数目， 随后利用费希尔精确测验的方法对基因型和表型之 间的相关性 进行显著性检验； (4)对获得与烟草 叶宽性状显著相 关的SNP位点， 结合烟草参考基因组注释信息， 重点 关注位于基因外显子区域的SNP位点， 并结合GO和KE GG注释等生物信息学手段， 筛选出基因 型发生变异能够显著改良烟草叶宽性状， 但对其他性状 没有影响或者影响不大的SNP位点， 并明确SNP位 点及对应的基因型。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114959104 A 3