(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210574112.2 (22)申请日 2022.05.24 (71)申请人 季华实验室 地址 528200 广东省佛山市南海区桂城街 道环岛南路28号 (72)发明人 尹焕才　 (74)专利代理 机构 佛山市海融科创知识产权代 理事务所(普通 合伙) 44377 专利代理师 黄家豪 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/686(2018.01) (54)发明名称 乳癌HER2丰度PIK3CA突变检测探针组和试 剂盒 (57)摘要 本发明公开了一种乳癌HER2丰度PIK3CA突 变检测探针组和试剂盒， 属于分子杂交领域， 乳 癌HER2丰度PIK3CA突变检测探针组和试剂盒包 含了E542K的突变型探针与野 生型探针、 E545 K的 突变型探针与野生型探针、 H1047 R的突变型探针 与野生型探针。 探针组和试剂盒的灵敏度可高达 0.001%， 且适于复杂背景下的靶标序列检测， 是 珍贵样本或样本核酸存在降解时的最佳选择， 在 穿刺样本、 胸腹水、 外周血中即可完成靶标序列 的检测， 特异性强， 有利于 快速、 灵敏地通过血液 ctDNA测出乳腺癌。 权利要求书2页 说明书7页 序列表3页 附图4页 CN 114959032 A 2022.08.30 CN 114959032 A 1.一组乳癌H ER2丰度PIK3 CA突变检测探针组， 其特 征在于， 包括以下探针引物： E542K‑F： 5’ ‑GGGAAAATGACAAAGAACAGCTCA A‑3’； E542K‑R： 5’ ‑CTGTGACTC CATAGAAAATCTTTCTCCT‑3’； Wild type‑E542K‑probe： 5’ ‑CCTCTCTCTGA AATCA‑3’； Mutation type‑E542K probe： 5’ ‑CCTCTCTCTA AAATCA‑3’； E545K‑F： 5’ ‑TCAAAGCAATTTCTACACGAGATC CT‑3’； E545K‑R： 5’ ‑CTGTGACTC CATAGAAAATCTTTCTC‑3’； Wild type‑E545K‑probe： 5’ ‑CTCTCTGA AATCACTGAGCAG ‑3’； Mutation type‑E545K probe： 5’ ‑CTCTGAAATCACTAAGCAG‑3’； H1047R‑F： 5’ ‑TGAGCAAGAGGCTTTGGAGT‑3’； H1047R‑R： 5’ ‑TCAGTTCAATGCATGCTGT TT‑3’； Wild type‑H1047R‑probe： 5’ ‑AATGATGCACATCATG GTGGCT‑3’； Mutation type‑H1047R‑probe： 5’ ‑AATGATGCACGTCATG GTGGCT‑3’； 其中， 所述探针引物带有修饰标记。 2.根据权利要求1所述的乳癌HER2丰度PIK3CA突变检测探针组， 其特征在于， 所述修饰 标记为荧光素修饰。 3.根据权利要求2所述的乳癌HER2丰度PIK3CA突变检测探针组， 其特征在于， 所述探针 引物Mutation  type‑E542K probe、 Mutation  type‑E545K probe、 Mutation  type‑H1047R‑ probe的荧光基团修饰与所述探针引物Wild  type‑E542K‑probe、 Wild  type‑E545K‑probe、 Wild type‑H1047R‑probe的荧 光基团修饰不同。 4. 根据权利要求3所述的乳癌HER2丰度PIK3CA突变检测探针组， 其特征在于， 所述探 针引物Mutation  type‑E542K probe、 Mutation  type‑E545K probe、 Mutation  type‑ H1047R‑probe的荧 光基团修饰是 FAM。 5.根据权利要求3所述的乳癌HER2丰度PIK3CA突变检测探针组， 其特征在于， 所述探针 引物Wild  type‑E542K‑probe、 Wild  type‑E545K‑probe、 Wild  type‑H1047R‑probe的荧光 基团修饰为VIC 。 6.根据权利要求1所述的乳癌HER2丰度PIK3CA突变检测探针组， 其特征在于， 各所述探 针引物的使用浓度为10 0 nmol/L  ‑400 nmol/L。 7.根据权利要求6所述的乳癌HER2丰度PIK3CA突变检测探针组， 其特征在于， 各所述探 针引物的使用浓度为20 0 nmol/L。 8.根据权利要求1所述的乳癌 HER2丰度PIK3CA突变检测探针组， 其特征在于， 用于Bio ‑ Rad微滴数字PCR体系。 9.一种乳癌HER2丰度PIK3CA突变检测试剂盒， 其特征在于， 包括一组乳癌HER2丰度 PIK3CA突变检测探针组， 所述探针组包括以下探针引物： E542K‑F： 5’ ‑GGGAAAATGACAAAGAACAGCTCA A‑3’； E542K‑R： 5’ ‑CTGTGACTC CATAGAAAATCTTTCTCCT‑3’； Wild type‑E542K‑probe： 5’ ‑CCTCTCTCTGA AATCA‑3’； Mutation type‑E542K probe： 5’ ‑CCTCTCTCTA AAATCA‑3’； E545K‑F： 5’ ‑TCAAAGCAATTTCTACACGAGATC CT‑3’；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114959032 A 2E545K‑R： 5’ ‑CTGTGACTC CATAGAAAATCTTTCTC‑3’； Wild type‑E545K‑probe： 5’ ‑CTCTCTGA AATCACTGAGCAG ‑3’； Mutation type‑E545K probe： 5’ ‑CTCTGAAATCACTAAGCAG‑3’； H1047R‑F： 5’ ‑TGAGCAAGAGGCTTTGGAGT‑3’； H1047R‑R： 5’ ‑TCAGTTCAATGCATGCTGT TT‑3’； Wild type‑H1047R‑probe： 5’ ‑AATGATGCACATCATG GTGGCT‑3’； Mutation type‑H1047R‑probe： 5’ ‑AATGATGCACGTCATG GTGGCT‑3’； 其中， 所述探针引物带有修饰标记。 10.根据权利要求9所述的乳癌HER2丰度PIK3CA突变检测试剂盒， 其特征在于， 适用于 Bio‑Rad微滴数字PCR体系。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114959032 A 3