(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211257091.8 (22)申请日 2022.10.14 (71)申请人 复旦大学附属眼耳 鼻喉科医院 地址 200031 上海市徐汇区汾阳路83号 申请人 上海昂朴生物科技有限公司 (72)发明人 陈泽旭　蒋永祥　贾婉楠　窦同海　 陈诚文　陈雯烨　 (74)专利代理 机构 上海华工专利事务所(普通 合伙) 31104 专利代理师 缪利明 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6869(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 先天性晶状体不全脱位的靶基因二代测序 panel及测序方法 (57)摘要 本发明公开了一种先天性晶状体不全脱位 的靶基因二代测序panel， 包括41个基因。 本发明 还公开了使用所述的靶基因二代测序panel进行 的先天性晶状体不全脱位的靶基因二代测序方 法。 本发明设计了新的专用于先天性晶状体不全 脱位CEL的靶基因二代测序panel， 设计 的panel 具有针对性强、 准确性高等特点， 并且， 通过挑选 出41个靶基因组合成了panel， 降低了测序成本， 提高了测序深度。 权利要求书2页 说明书14页 附图2页 CN 115491418 A 2022.12.20 CN 115491418 A 1.一种先天性晶状体不全脱位的靶基因二代测序panel， 其特征在于包括以下41个基 因： 权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115491418 A 22.一种先天性晶状体不全脱位的靶基因二代测序方法， 使用权利要求1所述的靶基因 二代测序panel， 其特 征在于包括以下步骤： S1： 提取样本的全血基因 组DNA； S2： 对提取的基因组DNA进行质控， 包括： 用琼脂糖凝胶电泳检测完整性， 用N anodrop检 测DNA的纯度， 以及用Qubit测量DNA的浓度， 对合格的样本进行建库； S3： 取500ng基因组DNA进行片段化， 将片段化的基因组DNA进行末端补平， 并在5 ’端进 行磷酸化和3’末端加碱基A； S4： 已片段化并末端修复的产物两端连接 接头， 用磁珠对产物进行 纯化及片段分选； S5： 对纯化后的接头连接产物进行PCR扩增， 用磁珠纯化得到基因组文库， 用Qubit测定 DNA浓度； S6： 取500ng构建好的基因组文库， 使用先天性晶状体不全脱位专用靶基因二代测序探 针对目标区域进行捕获， 将 捕获的目的片段分离； S7： 对捕获的目的基因PCR扩增， 扩增产物用磁珠 纯化回收。 S8： 文库使用Qubit定量， 毛细管电泳查看文库片段 大小， 如片段在3 50‑600bp则合格； S9： 用Illumina测序仪对文库进行测序； S10： 对测序结果进行 数据分析以获得变异位 点信息。 3.根据权利要求2所述的方法， 其特 征在于， S2中所述的选择合格样本的条件如下： 琼脂糖凝胶电泳检测样本 完整性的要求： 条 带单一无弥散； Nanodrop检测样本纯度的要求： DNA的OD26 0/280值在1.8 ‑2.0； Qubit检测样本浓度的要求： ＞5 00ng。 4.根据权利要求2所述的方法， 其特征在于， S9中所述的测序是使用Illumina  NovaSeq  6000测序仪进行双端15 0bp测序。 5.根据权利要求2所述的方法， 其特征在于， S10中所述的数据分析包括对于Illumina   NovaSeq产生的原始数据进行质控以获得高质量的DNA序列数据， 将reads在人类基因组上 进行定位， 根据 reads定位信息获取原始变异信息， 对原始变异信息进 行质控以获得高质量 的变异位 点。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115491418 A 3