(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210567646.2 (22)申请日 2022.05.24 (71)申请人 宁波大学附属人民医院 地址 315043 浙江省宁波市 鄞州区百丈东 路251号 申请人 宁波海尔施基因科技股份有限公司 (72)发明人 张军涛　徐智　吴宇霏　吴勇　 汪一萍　朱浩威　 (74)专利代理 机构 宁波市鄞州盛飞专利代理事 务所(特殊普通 合伙) 33243 专利代理师 洪珊珊 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6851(2018.01)C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 同步检测多种眼内感染病毒的多重实时荧 光定量PCR试剂盒和方法 (57)摘要 本发明公开了一种同步检测多种眼内感染 病毒的多重实时荧光定量PCR试剂盒和方法。 该 试剂盒中含有用于检测人类疱疹病毒6型的引物 对和探针及用于检测风疹病毒的引物对和探针， 用于检测人类疱疹病毒6型的引物对和探针分别 具有如SEQ  ID No.1‑3所示的核苷酸序列， 用于 检测风疹病毒的引物对和探针分别具有如SEQ   ID No.4‑6所示的核苷酸序列。 本发明使用多重 实时荧光定量PCR技术对HHV ‑6和RV进行同时检 测， 操作简便； 引物对和探针不仅特异性强、 准确 性高， 而且对各自对应的病毒检测灵敏度高， HHV‑6和RV的最低检出限均为5 00copies/mL。 权利要求书2页 说明书6页 序列表3页 附图3页 CN 115044708 A 2022.09.13 CN 115044708 A 1.一种同步检测多种眼内感染病 毒的多重实时荧光定量PCR试剂 盒， 其特征在于， 含有 用于检测人类疱疹病毒6型的引物对和探针， 以及用于检测风疹病毒的引物对和探针； 用于检测人类疱疹病毒6型的引物对和探针分别具有如下 所示的核苷酸序列： 上游引物： 5 ’ ‑TCCTTGTTCGTGTAGATC CTGTTAT‑3’； 下游引物： 5 ’ ‑GATCTAAGCAAGTCTCTCTA AACGAATG‑3’； 探针： 5’ ‑ACGGCTTGTTTCACACGGTTCTGATTTTC‑3’； 用于检测风疹病毒的引物对和探针分别具有如下 所示的核苷酸序列： 上游引物： 5 ’ ‑GTGGGAAGTGCGCGATGT ‑3’； 下游引物： 5 ’ ‑CGTGGAGTGCTG GGTGA‑3’； 探针： 5’ ‑CCCAGACCTGTGTTCAC‑3’。 2.如权利要求1所述的同步检测多种眼内感染病 毒的多重实时荧光定量PCR试剂 盒， 其 特征在于， 还 含有用于检测内参基因的引物对和探针。 3.如权利要求2所述的同步检测多种眼内感染病 毒的多重实时荧光定量PCR试剂 盒， 其 特征在于， 所述的内参基因为人Act in基因， 用于检测内参基因的引物对和探针 分别具有如 下所示的核苷酸序列： 上游引物： 5 ’ ‑AAATATGAGATGCGT TGTTACAGGAA‑3’； 下游引物： 5 ’ ‑TGTGGACTTGGGAGAGGAC‑3’； 探针： 5’ ‑CCTAAAAGCCACCCCACTTCTCT‑3’。 4.如权利要求1所述的同步检测多种眼内感染病 毒的多重实时荧光定量PCR试剂 盒， 其 特征在于， 还含有用于扩增质控的引物对和探针， 该用于扩增质控的引物对和探针分别具 有如下所示的核苷酸序列： 上游引物： 5 ’ ‑TTCTAATACGACTCACTATAG GATGGG‑3’； 下游引物： 5 ’ ‑CACGGCGGCATCAGAG ‑3’； 探针： 5’ ‑TTCGGCTATGACTG GGCACAAC‑3’。 5.如权利要求1 ‑4中任意一项所述的同步检测多种眼内感染病 毒的多重实时荧光定量 PCR试剂盒， 其特征在于， 还含有阳性对照， 该阳性对照为含有人类疱疹病毒6型基因、 风疹 病毒基因、 内参基因和质控的混合质粒。 6.一种同步检测多种眼内感染病 毒的多重PCR试剂盒， 其特征在于， 含有用于检测人类 疱疹病毒6型的引物对， 以及用于检测风疹病毒的引物对； 用于检测人类疱疹病毒6型的引物对分别具有如下 所示的核苷酸序列： 上游引物： 5 ’ ‑TCCTTGTTCGTGTAGATC CTGTTAT‑3’； 下游引物： 5 ’ ‑GATCTAAGCAAGTCTCTCTA AACGAATG‑3’； 用于检测风疹病毒的引物对分别具有如下 所示的核苷酸序列： 上游引物： 5 ’ ‑GTGGGAAGTGCGCGATGT ‑3’； 下游引物： 5 ’ ‑CGTGGAGTGCTG GGTGA‑3’。 7.如权利要求6所述的同步检测多种眼内感染病毒的多重PCR试剂盒， 其特征在于， 还 含有用于检测内参基因人Actin和质控的引物对， 该用于检测内参基因人Actin的引物对分 别具有如下 所示的核苷酸序列： 上游引物： 5 ’ ‑AAATATGAGATGCGT TGTTACAGGAA‑3’；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115044708 A 2下游引物： 5 ’ ‑TGTGGACTTGGGAGAGGAC‑3’； 该用于扩增质控的引物对分别具有如下 所示的核苷酸序列： 上游引物： 5 ’ ‑TTCTAATACGACTCACTATAG GATGGG‑3’； 下游引物： 5 ’ ‑CACGGCGGCATCAGAG ‑3’。 8.用于检测人类疱疹病毒6型的引物对， 其特 征在于， 包括： 上游引物： 5 ’ ‑TCCTTGTTCGTGTAGATC CTGTTAT‑3’； 下游引物： 5 ’ ‑GATCTAAGCAAGTCTCTCTA AACGAATG‑3’。 9.用于检测风疹病毒的引物对， 其特 征在于， 包括： 上游引物： 5 ’ ‑GTGGGAAGTGCGCGATGT ‑3’； 下游引物： 5 ’ ‑CGTGGAGTGCTG GGTGA‑3’。 10.一种同步检测多种眼内感染病毒的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)收集眼内液样本， 采用磁珠法核酸提取试剂对样本进行提取， 同时加入质控IC和蛋 白酶K， 用以监控提取质量和裂解病毒； (2)以步骤(1)提取到的核酸作为模板， 采用如权利要求1 ‑5中任意一项所述的多重实 时荧光定量PCR试剂盒进行实时荧 光定量PCR； (3)根据PCR结果判断样本中人类疱疹病毒6型和风疹病毒的感染情况。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115044708 A 3