(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210617046.2 (22)申请日 2022.06.02 (71)申请人 昆明理工大 学 地址 650093 云南省昆明市五华区学府路 253号 (72)发明人 冯悦　张伊菲　夏雪山　刘丽　 (74)专利代理 机构 昆明同聚专利代理有限公司 53214 专利代理师 苏芸芸 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 呼吸道感染性疾病病原体的多重qPCR检测 引物组合 (57)摘要 本发明公开了一种呼吸道感染性疾病病原 体的多重qPCR检测引物组合， 其包括检测甲型流 感病毒、 乙型流感病毒、 副流感病毒1型、 副流感 病毒3型、 呼吸道合胞病毒A型、 鼻病毒、 偏肺病 毒、 呼吸道合胞病毒B型的特异性引物和探针； 本 发明利用实时荧光定量PCR技术对病原 体靶基因 进行检测； 该方法具有耗时短、 特异性高、 成本 低， 一次可检测多种病原体的优点， 为呼吸道感 染性疾病病原 体的检测提供了便捷方法， 对呼吸 道感染患者临床早期分子诊断具有重要意 义。 权利要求书1页 说明书7页 序列表6页 附图15页 CN 114836580 A 2022.08.02 CN 114836580 A 1.一种呼吸道感染性疾病病原体的多重qPCR检测引物组合， 其特征在于： 包括检测甲 型流感病毒、 乙型流 感病毒、 副流感病毒1型、 副流 感病毒3型、 呼吸道 合胞病毒A型、 鼻病毒、 偏肺病毒、 呼吸道合胞病毒B型的特异性引物和探针； 所述特异性引物为针对甲型流感病毒的SEQ  ID NO:1和SEQ  ID NO:2、 针对乙型流感病 毒的SEQ ID NO:4和SEQ  ID NO:5、 针对副流感病毒1型的SEQ  ID NO:7和SEQ  ID NO:8、 针对 副流感病毒3 型的SEQ ID NO:10和SEQ  ID NO:11、 针对呼吸道合胞病毒A型的SEQ  ID NO:13 和SEQ ID NO:14、 针对鼻病毒的SEQ  ID NO:16和SEQ  ID NO:17、 针对偏肺病毒的SEQ  ID  NO:19和SEQ  ID NO:20、 针对呼吸道合胞病毒B型的SEQ  ID NO:22和SEQ ID NO:23； 所述探针为针对甲型流感病毒的SEQ  ID NO:3、 针对乙型流感病毒的SEQ  ID NO:6、 针 对副流感病毒1型的SEQ  ID NO:9、 针对副流感病毒3型的SEQ  ID NO:12、 针对呼吸道合胞病 毒A型的SEQ  ID NO:15、 针对鼻病毒的SEQ  ID NO:18、 针对偏肺病毒的SEQ  ID NO:21、 针对 呼吸道合胞病毒B型的SEQ  ID NO:24。 2.根据权利要求1所述的呼吸道感染性疾病病原体的多重qPCR检测引物组合， 其特征 在于： 甲型流感病毒、 乙型流 感病毒、 副流感病毒1型和 副流感病毒3型的特异 性引物和探针 在检测中共同使用； 呼吸道合胞病毒A型、 鼻病毒、 偏肺病毒和呼吸道合胞病毒B型的特异 性 引物和探针在检测中共同使用， 以人呼吸道上皮细胞核糖核酸酶P基因为内参。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114836580 A 2呼吸道感 染性疾病病原体的多重qPCR检测引物组合 技术领域 [0001]本发明属于病原体检测技术领域， 涉及一种呼吸道感染性疾病病原体的多重qPC R 检测引物组合， 本发明利用多重实时荧 光定量PCR技 术检测呼吸道感染性疾病 病原体。 背景技术 [0002]呼吸道感染是临床常见疾病， 也是主要致死性疾病， 呼吸道感染性疾病可由病毒、 细菌、 真菌、 支 原体、 衣原体等多种微 生物引起， 感染力强， 临床症状多样。 [0003]急性上呼吸道感染(Upper  Respiratory  Tract Infection,URTI)可引起普通感 冒、 急性病毒性咽炎、 喉炎， 急性扁桃体炎等常见临床症状。 儿童、 老年人、 免疫功能低下和 （或） 伴随有呼吸系统疾病的人群更易 感染发病。 发病患者往往具有病程短、 易自愈、 预后良 好等临床特点。 少数急性上呼吸道感染患者伴 随严重的并发症， 如以咽炎为表现的上呼吸 道感染， 部 分患者可继发溶血性链球菌引起的风湿热、 肾小球肾炎； 少数患者亦可能并发病 毒性心肌 炎、 急性鼻窦炎、 中耳炎、 气管 ‑支气管炎等。 [0004]急性下呼吸道感染(Lower  Respirat ory Tract Infection, LRTI)多发于寒冷季 节， 通常引起包括 急性支气管炎、 急性毛细支气管炎以及肺炎等临床症状。 急性下呼吸道感 染是发展中国家５岁以下儿童死亡的一个重要因素， 根据WHO  2018年发布的数据， 2016  年 下呼吸道感染在 全球造成300万人死亡。 早期及时准确的诊断有助于临床精 准用药， 帮助患 者恢复健康， 减少病死率。 基于此， 有必 要加强对流 感病毒、 副流感病毒、 鼻病毒等临床常见 呼吸道感染性疾病 病原体的诊断。 [0005]呼吸道病原体检测方法众多。 传统的细菌或真菌培养鉴定法耗费时间且检出率 低； 基于抗原、 抗体反应原理的商品化试纸条 （试剂盒） 具有简 便迅速的优势， 但较低的灵敏 度以及假阳性结果， 使其应用受限。 近些年， 分子生物学相关检测技术蓬勃发展， PCR ‑一代 测序、 LAMP、 基因芯片、 数字PCR以及NGS等技术， 均被用于呼吸道病原体的检测； 但上述技术 方法仍旧存在价格昂贵、 操作要求高、 耗费时间等 不足之处。 发明内容 [0006]本发明提供了一种呼吸道感染性疾病病原体的多重qPC R检测引物组合， 其包括用 于检测8种呼吸道感染性疾病病原体的特异性引物和 探针， 在进行多重qPCR检测中还涉及 多重qPCR检测的其他常规检测试剂， 该方法以人呼吸道上皮细胞核糖核酸酶P （RNP） 为内 参， 通过该方法， 可实现对呼吸道样本的高通量检测， 具有简便、 快速、 准确和经济等特点， 为呼吸道病原体临床早期诊断检测提供了新途径。 [0007]本发明多重qPCR检测引物组合包括检测甲型流感病毒、 乙型流感病毒、 副流感病 毒1型、 副流 感病毒3型、 呼吸道 合胞病毒A型、 鼻病毒、 偏肺病毒、 呼吸道合胞病毒B型的特异 性引物和探针； 其中特异性引物为针对甲型流感病毒的SEQ  ID NO:1和SEQ  ID NO:2、 针对 乙型流感病毒的SEQ  ID NO:4和SEQ  ID NO:5、 针对副流感病毒1型的SEQ  ID NO:7和SEQ  ID  NO:8、 针对副流感病毒3 型的SEQ ID NO:10和SEQ  ID NO:11、 针对呼吸道合胞病毒A型的SEQ  说　明　书 1/7 页 3 CN 114836580 A 3