(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210590249.7 (22)申请日 2022.05.26 (71)申请人 中山大学深圳研究院 地址 518000 广东省深圳市南 山区粤海街 道科技园南区粤兴四道1号中山大学 深圳产学研大楼14A (72)发明人 杨海涛　廖晓星　梁誉斌　 (74)专利代理 机构 深圳市鼎智专利代理事务所 (普通合伙) 44411 专利代理师 宋腾飞 (51)Int.Cl. C12Q 1/6844(2018.01) C12Q 1/6883(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 基于等温核酸扩增qPCR技术的心梗危险因 素检测方法及其PCR (57)摘要 本发明公开的基于等温核酸扩增qPCR技术 的心梗危险因素检测方法及其PCR， 本发明设计 和实验验证了合适长度的核酸探针能够在很短 的时间内的检测心血管疾病疾病状态下基因心 梗和心衰早期发病情况， 设计的核酸扩增检测方 法可以特异敏感的检测心肌细胞钙离子通道的 早期变化， 采用大多数地市级医院检验科室都有 的qPCR方法,方便 快捷,操作 简单标准,试剂已全 部能够生产,全部诊断方法可以在基层医疗单位 应用,价格也在大众可以接受的范围。 权利要求书2页 说明书6页 附图2页 CN 115261448 A 2022.11.01 CN 115261448 A 1.基于等温核酸扩增qPCR技 术的心梗危险因素检测方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1、 计出4对AHNAK核酸探针； S2、 AHNAK核酸扩增检测； S3、 设计的2对P DE4DIP引物； S4、 PDE4DIP核酸扩增检测。 2.根据权利要求1所述的基于等温核酸扩增qPCR技术的心梗危险因素检测方法， 其特 征在于： 在所述的S1中， 4对AHNAK核酸探针包括： AHNAK核酸探针序列1 AHNAK核酸探针序列2 3.根据权利要求1所述的基于等温核酸扩增qPCR技术的心梗危险因素检测方法， 其特 征在于： 在所述的S2中， 扩增检测方法包括： 体系1： 体系2： 将体系1在70℃水浴5min后， 冰浴2min后， 与体系2混合， 于37℃15min， 42℃ 60min， 70℃ 10min。 4.根据权利要求1所述的基于等温核酸扩增qPCR技术的心梗危险因素检测方法， 其特 征在于， 在所述的S3中， 包括： PDE4DIP基因核酸探针序列1权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115261448 A 2PDE4DIP基因核酸探针序列2 5.根据权利要求1所述的基于等温核酸扩增qPCR技术的心梗危险因素检测方法， ， 其特 征在于， 在所述的S4中， 扩增检测方法包括： 体系1： 体系2： 将体系1在70℃水浴5min后， 冰浴2min后， 与体系2混合， 于37℃15min， 42℃ 60min， 70℃ 10min。 等温扩增的具体方法我们根据实际情况实施。 6.基于等温核酸扩增qPCR技术的心梗危险因素检测PCR， 其特征在于， 针对目的基因的 6个区域设计4条特异性引物(包括2条内引物和2条外引物)， 利用一种具有链置换特性的 Bst DNA聚合酶， 在等温条件下高效、 快速、 高特异地扩增靶序列， 其反应过程包括哑铃状模 板合成阶段、 循环扩增阶段、 伸长和再循环阶段； 靶DNA变性后， 内外引物在Bst  DNA聚合酶作用下延伸， 随后 外引物进行延伸， 同时其延 伸产物将内引物的延伸产物置换出来， 形成一个哑铃状的DNA， 然后进入循环扩增阶段， 不 断延伸和扩增， 最终形成茎环结构和多环花椰菜样结构的DNA片段混合物。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115261448 A 3