(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210765658.6 (22)申请日 2022.06.30 (71)申请人 湖南家辉生物技 术有限公司 地址 410205 湖南省长 沙市高新 开发区麓 谷麓景路2号 (72)发明人 曾桥　薛斌　李婵艺　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 专利代理师 张梦泽 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12N 15/11(2006.01) G01N 33/573(2006.01) (54)发明名称 导致进行性家族性肝内胆汁淤积症 Ⅰ型的 ATP8B1基因突变 体、 蛋白和应用 (57)摘要 本发明属于生物医药技术领域， 具体涉及导 致进行性家族性肝内胆汁淤积症 Ⅰ型的ATP8B1基 因突变体、 蛋白和应用。 所述ATP8B1基因突变体 包括复合杂合突变， 所述复合杂合突变包括 c.2113G>A和exon24 ‑28del。 上述复合杂合突变 为尚未公开的突变位点， 与进行性家族性肝内胆 汁淤积症 Ⅰ型具有密切关系， 可作为进行性家族 性肝内胆汁淤积症 Ⅰ型筛查的候选位点， 进而将 其应用到制备进行性家族性肝内胆汁淤积症 Ⅰ型 诊断或筛查试剂盒中， 快速有效地预测或诊断进 行性家族性肝内胆汁淤积症 Ⅰ型， 为进行性家族 性肝内胆汁淤积症 Ⅰ型患者的治疗提供全新的理 论依据。 权利要求书1页 说明书28页 序列表27页 附图8页 CN 115404273 A 2022.11.29 CN 115404273 A 1.一种ATP8B1基因突变体， 其特征在于， 所述ATP8B1基因突变体为复合杂合突变， 所述 复合杂合 突变包括c.21 13G>A和exo n24‑28del。 2.权利要求1所述的ATP8B1基因突变体编码的蛋白， 其特征在于， 所述蛋白上包括 p.A705T的突变。 3.用于检测权利要求1所述的ATP8B1基因突变体或权利要求2所述的蛋白的试剂在下 述Ⅰ～Ⅲ至少一种中的应用； Ⅰ： 制备进行性家族性 肝内胆汁 淤积症Ⅰ型分子遗传学检测试剂盒； Ⅱ： 制备进行性家族性 肝内胆汁 淤积症Ⅰ型产前诊断试剂盒； Ⅲ： 制备辅助防治 进行性家族性 肝内胆汁 淤积症Ⅰ型的试剂盒。 4.一种用于检测权利要求1所述的ATP8B1基因突变体或权利 要求3所述的蛋白的试剂， 其特征在于， 所述试剂包括 抗体、 探针、 引物对和质谱检测试剂中的至少一种。 5.一种用于检测权利要求1所述的ATP8B1基因突变体的引物 组， 其特征在于， 所述引物 组包括检测c.21 13G>A的引物对A和检测exo n24‑28del的引物对B～F； 所述引物组A的上游引物ATP8B1 ‑19F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示， 下游引物 ATP8B1‑19R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.4所示； 所述引物组B的上游引物ATP8B1 ‑24F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.33所示， 下游引物 ATP8B1‑24R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.34所示； 所述引物组C的上游引物ATP8B1 ‑25F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.53所示， 下游引物 ATP8B1‑25R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.54所示； 所述引物组D的上游引物ATP8B1 ‑26F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.73所示， 下游引物 ATP8B1‑26R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.74所示； 所述引物组E的上游引物ATP8B1 ‑27F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.93所示， 下游引物 ATP8B1‑27R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.94所示； 所述引物组F的上游引物ATP8B1 ‑28F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.113所示， 下游引物 ATP8B1‑28R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.114所示。 6.一种用于检测进行性家族性肝内胆汁淤积症 Ⅰ型的试剂 盒， 其特征在于， 包括权利要 求4所述的试剂或权利要求5所述的引物组。 7.根据权利要求6所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括分子遗传学诊断试剂 盒、 产前基因诊断试剂盒 或辅助防治家族性高胆固醇血症试剂盒。 8.根据权利要求6或7所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒中还包括测序引物和PCR 扩增所需要的试剂。 9.根据权利要求8所述的试剂盒， 其特征在于， 所述PCR扩增所需要的试剂包括dNTP， PCR缓冲液， 镁离 子和Tap聚合酶中的一种或多种。 10.权利要求4所述的试剂、 权利要求5所述的引物组或权利要求6～9任一项所述的试 剂盒在下述 Ⅰ～Ⅲ至少一种中的应用； Ⅰ： 制备进行性家族性 肝内胆汁 淤积症Ⅰ型分子遗传学检测试剂盒； Ⅱ： 制备进行性家族性 肝内胆汁 淤积症Ⅰ型产前诊断试剂盒； Ⅲ： 制备辅助防治 进行性家族性 肝内胆汁 淤积症Ⅰ型的试剂盒。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115404273 A 2导致进行性家族性肝内胆汁淤积症 Ⅰ型的ATP8B1基因 突变体、 蛋白和应用 技术领域 [0001]本发明属于生物医药技术领域， 具体涉及导致进行性家族性肝内胆汁淤积症 Ⅰ型 的ATP8B1基 因突变体、 蛋白和应用。 背景技术 [0002]进行性家族性肝内胆汁淤积症(progressive  familial  intrahepatic   cholestasis， PFIC)是一种常染  色体隐性遗传性疾病 。 因基因突变导致胆汁排泌障碍， 发 生肝内胆汁淤积， 最终可发展为肝衰竭。  根据其致病基因不同， 该疾病分为3型， 包括PFIC ‑ Ⅰ型、 PFIC‑Ⅱ型和PFIC ‑Ⅲ型。 [0003]PFIC‑Ⅰ型又称Byler氏病， 由ATP8B1基因突变引起， ATP8B1位于常染色体 18q21.31， 基因  全长15.7kb， 包含28个外显子和27个内含子， 编码1146个氨基酸， 组成P型 ATP酶‑FIC1蛋白。  FIC1蛋白位于肝细胞胆小管膜和胆管细胞顶端膜 等处； 作为一种氨基磷 脂易位酶， FIC1 蛋白负责  把磷脂酰丝氨酸 从生物膜外层转移到内层， 从而维持膜两侧脂质 分布的不对称性， 维持毛细胆管膜  双分子层内膜高浓度的氨基磷脂， 其功能异常可间接干 扰胆管胆汁 酸分泌。 [0004]黄疸和皮肤瘙痒是PFIC典型的临床表现， 通常在1岁之前发病， 平均发病年龄是3 月龄。 其 他有身材矮小、 青春期发育落后等 发育迟缓表现， 胆囊结石， 脂肪吸收 障碍所致的 脂肪泻， 肝脾肿  大以及脂溶性 维生素缺乏所致佝偻病、 骨龄延迟、 干眼症、 凝血障碍和神经 肌肉病变等症状。 患儿  亦可以出现视觉及听力异常， 出现烦 躁、 嗜睡及注意力不集中等改 变。 晚期可出现门静脉高压症和  肝脏肿瘤等。 三种PFIC临床表现各有其特点， 水样腹泻 是 PFIC‑Ⅰ型常见肝外表现， 此外有胰腺  炎和听力减退等表现。 [0005]基因突变是导致进行性家族性肝内胆汁淤积症 Ⅰ型发生发展的重要遗传基础， ATP8B1基因突  变呈世界性分布， 不同种族、 甚至不同患者之间其突变类型也不相同， 目前 已报道的突变类型超过  几十种。 在我国低谷氨酰转肽酶进行性胆汁淤积患者中也已检测 到ATP8B1基因突变， 突变类型大  多与西方人群不同， 其中P209T/IVS6+5G>T连锁突变是我 国PFIC‑1患者中的热点 突变类型。 [0006]因基因诊断是确诊进行性家族性肝内胆汁淤积症 Ⅰ型的金标准， 临床上需要针对 不同突变建立  相应的检测技 术并用于明确病因和疾病诊断。 发明内容 [0007]本发明的目的在 于提供导致进行性家族性肝内胆汁淤积症 Ⅰ型的ATP8B1基因突变 体、 蛋白和  应用。 本发明发现了新的ATP8B1基因突变体， 可作为进行性家族性肝内胆汁淤 积症Ⅰ型的筛查的  候选筛查位点， 制备分子 遗传学及诊断试剂盒。 [0008]本发明提供了一种ATP8B1基因突变体， 所述ATP8B1基因突变体为复合杂合突变， 所述复合  杂合突变包括c.21 13G>A和exo n24‑28del。说　明　书 1/28 页 3 CN 115404273 A 3