(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210581296.5 (22)申请日 2022.05.26 (71)申请人 中国中医科学院中药研究所 地址 100700 北京市东城区东 直门内南小 街16号 (72)发明人 袁媛　华中一　赵玉洋　黄璐琦　 (74)专利代理 机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 专利代理师 关畅 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/683(2018.01) C12N 15/11(2006.01) A01H 1/04(2006.01) (54)发明名称 快速筛选高纯合度天麻的方法及其所用引 物组合物 (57)摘要 本发明公开了快速筛选高纯合度天麻的方 法及其所用引物组合物。 本发明所要解决的技术 问题是如何筛选或辅助筛选高纯合度天麻品种。 本发明提供了鉴定天麻的RFLP分子标记位点的 试剂， 通过检测待测天麻的RFLP分子标记位点基 因型， 鉴定或辅助鉴定天麻品种的纯合度； 不同 天麻品种基因组DNA片段RFLP位点的PCR产物酶 切后凝胶电泳结果可出现不同数量的条带， 选择 天麻品种基因组DNA片段 RFLP位点的纯合度等于 大于95％为高纯合度天麻品种。 将检测所述天麻 基因组中RFLP分子标记位点的组合物质与其他 物质(如检测其他与天麻纯合度相关的分子标记 的单核苷 酸多态性或基因型的物质)联合在一起 制备鉴定天麻高纯度品种产品。 权利要求书6页 说明书15页 序列表8页 附图1页 CN 114990252 A 2022.09.02 CN 114990252 A 1.鉴定天麻的RFLP分子标记位点的试剂， 其特征在于： 所述RFLP分子标记位点为20个 SNP位点， 所述20个SNP位点由E1标记 位点、 E2标记位点、 E3标记位点、 E4标记位点、 E5标记位 点、 E6标记 位点、 E7标记 位点、 E8标记位点、 E9标记位点、 E10标记位点、 E11标记位点、 H1标记 位点、 H2标记位点、 H3标记位点、 S1标记位点、 X1标记位点、 X2标记位点、 X3标记位点、 X4标记 位点和X5标记位 点组成， 所述E1标记位点是天麻3号染色体上的一个位点， 其核苷酸种类为T或G， 为天麻基因组 中SEQ ID No.1的第43 5位核苷酸， 所述E2标记位点是天麻7号染色体上的一个位点， 其核苷酸种类为A或C， 为天麻基因组 中SEQ ID No.2的第39 2位核苷酸， 所述E3标记位点是天麻1号染色体上的一个位点， 其核苷酸种类为G或C， 为天麻基因组 中SEQ ID No.3的第3 60位核苷酸， 所述E4标记位点是天麻2号染色体上的一个位点， 其核苷酸种类为C或T， 为天麻基因组 中SEQ ID No.4的第409位核苷酸， 所述E5标记位点是天麻2号染色体上的一个位点， 其核苷酸种类为C或G， 为天麻基因组 中SEQ ID No.5的第171位核苷酸， 所述E6标记位点是天麻8号染色体上的一个位点， 其核苷酸种类为T或C， 为天麻基因组 中SEQ ID No.6的第313位核苷酸， 所述E7标记位点是天麻17号染色体上的一个位点， 其核苷酸种类为A或G， 为天麻基因 组中SEQ ID No.7的第280位核苷酸， 所述E8标记位点是天麻2号染色体上的一个位点， 其核苷酸种类为C或A， 为天麻基因组 中SEQ ID No.8的第347位核苷酸， 所述E9标记位点是天麻3号染色体上的一个位点， 其核苷酸种类为A或G， 为天麻基因组 中SEQ ID No.9的第140位核苷酸， 所述E10标记位点是天麻4号染色体上的一个位点， 其核苷酸种类为G或A， 为天麻基因 组中SEQ ID No.10的第3 33位核苷酸， 所述E11标记位点是天麻5号染色体上的一个位点， 其核苷酸种类为G或A， 为天麻基因 组中SEQ ID No.11的第330位核苷酸， 所述H1标记位点是天麻5号染色体上的一个位点， 其核苷酸种类为C或T， 为天麻基因组 中SEQ ID No.12的第194 位核苷酸， 所述H2标记位点是天麻14号染色体上的一个位点， 其核苷酸种类为C或T， 为天麻基因 组中SEQ ID No.13的第46 0位核苷酸， 所述H3标记位点是天麻14号染色体上的一个位点， 其核苷酸种类为C或T， 为天麻基因 组中SEQ ID No.14的第13 3位核苷酸， 所述S1标记位点是天麻10号染色体上的一个位点， 其核苷酸种类为G或C， 为天麻基因 组中SEQ ID No.15的第387位核苷酸， 所述X1标记位点是天麻1号染色体上的一个位点， 其核苷酸种类为A或C， 为天麻基因组 中SEQ ID No.16的第3 50位核苷酸， 所述X2标记位点是天麻5号染色体上的一个位点， 其核苷酸种类为A或G， 为天麻基因组 中SEQ ID No.17的第28 8位核苷酸，权　利　要　求　书 1/6 页 2 CN 114990252 A 2所述X3标记位点是天麻8号染色体上的一个位点， 其核苷酸种类为G或A， 为天麻基因组 中SEQ ID No.18的第310位核苷酸， 所述X4标记位点是天麻12号染色体上的一个位点， 其核苷酸种类为T或C， 为天麻基因 组中SEQ ID No.19的第31 1位核苷酸， 所述X5标记位点是天麻6号染色体上的一个位点， 其核苷酸种类为A或G， 为天麻基因组 中SEQ ID No.20的第186位核苷酸； 所述试剂由名称为E1组的组合物、 E2组的组合物、 E3组的组合物、 E4组的组合物、 E5组 的组合物、 E6组的组合物、 E7组的组合物、 E8组的组合物、 E9组的组合物、 E10组的组合物、 E11组的组合物、 H1组的组合物、 H2组的组合物、 H3组的组合物、 S1组的组合物、 X1组的组合 物、 X2组的组合物、 X3组的组合物、 X4组的组合物、 X5组的组合物共20种组合物组成， 所述E1组由名称为E1引物对的扩增包括所述E1标记位点在内的天麻基因组DNA片段的 引物组合物和限制性核酸内切酶E coRⅠ组成， 所述E2组由名称为E2引物对的扩增包括所述E2标记位点在内的天麻基因组DNA片段的 引物组合物和限制性核酸内切酶E coRⅠ组成， 所述E3组由名称为E3引物对的扩增包括所述E3标记位点在内的天麻基因组DNA片段的 引物组合物和限制性核酸内切酶E coRⅠ组成， 所述E4组由名称为E4引物对的扩增包括所述E4标记位点在内的天麻基因组DNA片段的 引物组合物和限制性核酸内切酶E coRⅠ组成， 所述E5组由名称为E5引物对的扩增包括所述E5标记位点在内的天麻基因组DNA片段的 引物组合物和限制性核酸内切酶E coRⅠ组成， 所述E6组由名称为E6引物对的扩增包括所述E6标记位点在内的天麻基因组DNA片段的 引物组合物和限制性核酸内切酶E coRⅠ组成， 所述E7组由名称为E7引物对的扩增包括所述E7标记位点在内的天麻基因组DNA片段的 引物组合物和限制性核酸内切酶E coRⅠ组成， 所述E8组由名称为E8引物对的扩增包括所述E8标记位点在内的天麻基因组DNA片段的 引物组合物和限制性核酸内切酶E coRⅠ组成， 所述E9组由名称为E9引物对的扩增包括所述E9标记位点在内的天麻基因组DNA片段的 引物组合物和限制性核酸内切酶E coRⅠ组成， 所述E10组由名称为E10引物对的扩增包括所述E10标记位点在内的天麻基因组DNA片 段的引物组合物和限制性核酸内切酶E coRⅠ组成， 所述E11组由名称为E11引物对的扩增包括所述E11标记位点在内的天麻基因组DNA片 段的引物组合物和限制性核酸内切酶E coRⅠ组成， 所述H1组由名称为H1引物对的扩增包括所述H1标记位点在内的天麻基因组DNA片段的 引物组合物和限制性核酸内切酶Hi ndⅢ组成， 所述H2组由名称为H2引物对的扩增包括所述H2标记位点在内的天麻基因组DNA片段的 引物组合物和限制性核酸内切酶Hi ndⅢ组成， 所述H3组由名称为H3引物对的扩增包括所述H3标记位点在内的天麻基因组DNA片段的 引物组合物和限制性核酸内切酶Hi ndⅢ组成， 所述S1组由名称为S1引物对的扩增包括所述S1标记位点在内的天麻基因组DNA片段的权　利　要　求　书 2/6 页 3 CN 114990252 A 3