(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211009861.7 (22)申请日 2022.08.23 (71)申请人 迈基诺(重庆)基因科技有限责任公 司 地址 400026 重庆市江北区港城东环路6号 1幢1-2、 2-2、 3 -2、 4-2、 5 -2、 6-2 (72)发明人 伍建　徐敏杰　姬晓雯　 (74)专利代理 机构 北京星通盈泰知识产权代理 有限公司 1 1952 专利代理师 黄正奇 (51)Int.Cl. C12Q 1/686(2018.01) C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6876(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 检测BEAN1和TK2基因TGGAA重复的引物组、 试剂盒及系统 (57)摘要 本发明涉及分子生物学诊断技术领域， 具体 涉及一种检测BEAN1和TK2基因TGGAA重复的引 物、 试剂盒及系统， 本发明方法通过提取DNA并利 用引物组进行PCR扩增， 对PCR扩增后的产物进行 毛细管电泳， 分析BEAN1和TK2基因TGGAA重复序 列情况， 得出BEAN1基因和TK2基因的内含子区域 中TGGAA重复数， 利用本发明分析得出的重复数 可以对脊髓小脑性共济失调31型进行评估， 整个 检测过程 耗时短、 效率高。 权利要求书2页 说明书6页 附图3页 CN 115198007 A 2022.10.18 CN 115198007 A 1.一种检测BEAN1和TK2基因内含子中TGGAA重复序列的引物组， 其特征在于， 所述引物 组包括： SCA31P1:CATAGTG GCACATGCATGTAGTC； SCA31P2:TACGCATC CCAGTTTGAGACG； SCA31P3:TACGCATC CCAGTTTGAGACGT TCCATTCCATTCCATTCCATTCCA； SCA31P4:TCTCA ATCAATTTAGAGGTTTCTTTTTAT； 所述SCA31P1的5 ’端有荧光基团标记。 2.根据权利 要求1所述检测BEAN1和TK2基因内含子中TGGAA重复序列的引物组， 其特征 在于， 所述SCA31P1的5 ’端带5’ ‑FAM荧光基团。 3.一种检测BEAN1和TK2基因内含子中TGGAA重复序列的试剂盒， 其特征在于， 包括权利 要求1或2所述的引物组。 4.一种检测BEAN1和TK2基因内含子中TGGAA重复序列非疾病诊断的方法， 其特征在于， 包括： 1)提取DNA并利用权利要求1或2所述引物组进行PCR扩增； 2)对PCR扩增后的产物进行毛细管电泳； 3)分析BEAN1和TK2基因内含子中TG GAA的重复情况。 5.根据权利要求4所述检测BEAN1和TK2基因内含子中TGGAA重复序列非疾病诊断的方 法， 其特征在于， 所述PCR扩增包括： 按DNA检测样本数量配置扩增反应液混合液， 所述扩增反应液混合液包括： 2 × GoldStar  Best Master Mix试剂用量12.5 ×n μl、 浓度为10 μM的SCA31P1引物用量1 ×n μl、 浓度为10 μM的SCA31P2引物用量1 ×n μl、 浓度为10 μM的SCA31P3引物用量0.1 ×n μl、 浓度为 10 μM的SCA3 1P4引物用量1 ×n μl、 DMSO用量1 ×n μl和ddH2O用量7.4 ×n μl； 其中n＝检测样本 数量+1； 按24 μl扩增反应混合液中加入1 μlDNA； 进行PCR扩增。 6.根据权利要求5所述检测BEAN1和TK2基因内含子中TGGAA重复序列非疾病诊断的方 法， 其特征在于， 所述PCR扩增的程序为： 在PCR仪中先以98℃变性1分钟； 再运行35次如下循环： 98℃变性10秒、 60℃退火20秒、 72℃延伸3 0秒； 之后72℃延伸10分钟， 4℃保存。 7.根据权利要求4所述检测BEAN1和TK2基因内含子中TGGAA重复序列非疾病诊断的方 法， 其特征在于， 所述对PCR扩增后的产物进行毛细管电泳包括： 对PCR扩增后的产物进行稀释， 在ddH2O中加入PCR扩增产物； 取ABI  GS500‑LIZ内标和 HIDI按1∶250的体积比混合后， 取混合液与稀释后的PCR扩增后的产物混合制成上机混合 液； 将上机混合液在PCR仪上以95℃运行3分钟后， 冰水混合物中冷却5分钟， 温度在0 ±1 ℃， 进行变性处 理， 通过ABI373 0xl测序仪进行检测。 8.根据权利要求4所述检测BEAN1和TK2基因内含子中TGGAA重复序列非疾病诊断的方 法， 其特征在于， 所述分析BEAN1和TK2基因内含子中TG GAA的重复情况包括： 采用genemarker  ID v2.6.3软件对分型结果进行判读， 核对校正内标峰后定义188bp 处为TGGAA1处， 根据每隔5bp出现的荧 光串峰个数判断TG GAA的重复数。 9.权利要求1或2所述检测BEAN1和TK2基因内含子中TGGAA重复序列的引物组或权利要权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115198007 A 2求3所述检测BEAN1和TK2基因内含子中TGGAA重复序列的试剂盒在制备脊髓小脑性共济失 调31型病样诊断剂中的应用。 10.一种检测BEAN1和TK2基因内含子中TGGAA重复序列的系统， 其特征在于， 包括提取 扩增模块、 毛细管电泳模块、 TG GAA重复情况分析模块； 所述提取扩增模块， 用于提取DNA并利用权利要求1或2所述引物组进行PCR扩增； 所述毛细管电泳模块， 用于对PCR扩增后的产物进行毛细管电泳； 所述TGGAA重复情况分析模块， 用于分析BEAN1和TK2基因内含子中TG GAA的重复情况。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115198007 A 3