(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210817285.2 (22)申请日 2022.07.12 (71)申请人 山东柏佳薇生物科技有限公司 地址 256399 山东省淄博市张店区房镇 镇 三赢路69 号淄博科技工业园创业园东 区814-B房间 (72)发明人 罗维鹏　于家懿　李悦　 (74)专利代理 机构 北京知企鸿蒙专利代理事务 所(普通合伙) 11692 专利代理师 刘帅帅 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 检测胃癌外泌体中lncRNA-NEAT1的试剂盒 及其在胃癌诊断中的应用 (57)摘要 本发明公开了lncRNA ‑NEAT1在制备胃癌诊 断标志物中的应用， 同时还公开了一种检测胃癌 外泌体中lncRNA ‑NEAT1的试剂盒及其在诊断学 中的应用。 通过使用实时荧光定量PCR技术， 对捕 获的外泌体中lncRNA  NEAT1表达量进行检测， 胃 癌细胞系外泌体的捕获方法能够高效捕获胃癌 外泌体； 早期辅助性诊断的体外方法， 能够为胃 癌患者早诊断早治疗提供技术支持， 对体外诊断 试剂盒的开发等有深远意 义。 权利要求书2页 说明书5页 附图2页 CN 114959046 A 2022.08.30 CN 114959046 A 1.lncRNA‑NEAT1 在制备胃癌诊断标志 物中的应用。 2.lncRNA‑NEAT1 在制备诊断 胃癌的检测试剂或检测试剂盒中的应用。 3.根据权利要求2所述的lncRNA ‑NEAT1 在制 备诊断胃癌的检测试剂或检测试剂盒中 的应用， 其特 征在于， 所述的检测试剂或检测试剂盒为血清学检测试剂或试剂盒。 4.根据权利要求2 或3 所述的lncRNA ‑NEAT1 在制备诊断胃癌的检测试剂或检测试剂 盒中的应用， 其特征在于， 所述的检测试剂或试剂盒用于检测生物样品中lncRNA ‑NEAT1 的 表达量。 5.根据权利要求2 或3 所述的l ncRNA‑NEAT1 在制备诊断 胃癌的检测试剂或检测试剂 盒中的应用， 其特征在于， 所述的检测试剂或试剂盒包括： 对lncRNA ‑NEAT1 具有检测 特异性的探针、 基因芯片， 或PCR引物。 6.根据权利 要求4 所述的lncRNA ‑NEAT1 在制备诊断胃癌的检测试剂或检测试剂盒中 的应用， 其特征在于， 所述的生物样品选自： 获自对象 的胃癌外泌体、 新鲜组织或细胞、 福尔 马林固定或石蜡包埋组织或细胞、 血 液或体液。 7.根据权利 要求4 所述的lncRNA ‑NEAT1 在制备诊断胃癌的检测试剂或检测试剂盒中 的应用， 其特 征在于， 所述的生物样品为胃癌外泌体。 8.根据权利 要求5 所述的lncRNA ‑NEAT1 在制备诊断胃癌的检测试剂或检测试剂盒中 的应用， 其特 征在于， 所述的对l ncRNA‑NEAT1 具有检测特异性的PCR 引物如下： lncRNA NEAT1上游引物： 5 ’ ‑GGCAGGTCTAGTTTGGGCAT‑3’， 下游引物： 5 ’ ‑CCTCATCCCTCCCAGTACC ‑3’； 内参 GAP DH上游引物： 5 ’ ‑ GCAACTAGGATGGTGTGGCT ‑3’， 下游引物： 5 ’ ‑TCCCATTCCCCAGCTCTCATA ‑3’。 9.一种检测胃癌外泌体中l ncRNA‑NEAT1 的试剂盒， 其特 征在于， 所述的试剂盒包括： A、 逆转录系统， 由逆转录体系缓冲液、 引物、 dNTPs、 逆转录酶和RNA 酶抑制剂组成； B、 引物系统， lncRNA NEAT1上游引物： 5 ’ ‑GGCAGGTCTAGTTTGGGCAT‑3’， 下游引物： 5 ’ ‑CCTCATCCCTCCCAGTACC ‑3’； 内参 GAP DH上游引物： 5 ’ ‑ GCAACTAGGATGGTGTGGCT ‑3’， 下游引物： 5 ’ ‑TCCCATTCCCCAGCTCTCATA ‑3’ C、 扩增系统， 由SYBR Gre en Mix试剂盒的试剂组成。 10.一种利用如权利要求9 所示的检测胃癌外泌体中lncRNA ‑NEAT1 的试剂盒的检测 方法， 具体步骤如下： 采用Trizol试剂（ 美国 Invitrogen公司）从组织样本中提取总 RNA， 采用 NanoDrop2000光度计测定RNA 浓度和纯度， 采用试剂盒进行逆转录反应， 获得 cDNA， 在 2720型热循环 PCR系统中使用SYBR Gre en Mix试剂盒对cDNA产物进行扩增，  lncRNA NEAT1上游引物： 5 ’ ‑GGCAGGTCTAGTTTGGGCAT‑3’， 下游引物： 5 ’ ‑CCTCATCCCTCCCAGTACC ‑3’； 内参 GAP DH上游引物： 5 ’ ‑ GCAACTAGGATGGTGTGGCT ‑3’， 下游引物： 5 ’ ‑TCCCATTCCCCAGCTCTCATA ‑3’；  PCR 扩增条件包括以下三个步骤： 第一步 95.0 ℃ 2min； 第二步 95.0 ℃ 15s， 58℃  权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114959046 A 240s （共 40个循环） ； 第三步 （分离阶段） ， 95.0 ℃ 15s， 60.0 ℃ 15s， 95.0 ℃ 15s 自动 记录NEAT1 和 GAP DH， 用 ２ －Δ ΔCt表示lncRNA NEAT1 的相对表达量。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114959046 A 3