(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210577234.7 (22)申请日 2022.05.25 (71)申请人 连云港市农业科 学院 地址 222006 江苏省连云港市海州区迎宾 大道西首连云港市农业科 学院 (72)发明人 柴文波　王军　李淑芬　许瀚元　 祝庆　李洪涛　 (74)专利代理 机构 南京天华专利代理有限责任 公司 32218 专利代理师 李晓峰　李德溅 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 玉米抗纹枯病相关基因的KASP分子标记及 其应用 (57)摘要 本发明公开了一种玉米抗纹枯病相关基因 的KASP分子标记及其应用， 该分子标记是与玉米 抗纹枯病相关基因FBL紧密连锁的KASP标记 KASP_FBL。 位于玉米4号染色体的第180199014 位， 该位点的碱基为A或者C。 该标记基于KASP技 术开发， 可高通量检测玉米基因组4号染色体的 第180199014位碱基。 本发明应用KASP技术对玉 米抗纹枯病相关基因FBL进行基因型鉴定， 具有 操作简便、 成本低廉、 检测周期短、 标记稳定、 绿 色环保等优点， 可精准检测玉米抗纹枯病相关基 因FBL， 对促进玉米抗纹枯病相关育种具有重要 意义。 权利要求书1页 说明书6页 序列表2页 附图2页 CN 114941039 A 2022.08.26 CN 114941039 A 1.用于检测与玉米抗纹枯病相关基因FBL紧密连锁的KASP分子标记位点的多态性或基 因型的物质在 如下(1)、 (2)或(3)中的应用： (1)鉴定或辅助鉴定抗纹枯病玉米； (2)制备用于鉴定或辅助鉴定抗纹枯病玉米的相关产品； (3)玉米辅助育种或制备用于玉米辅助育种的产品。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述的与玉米抗纹枯病相关基因FBL紧密 连锁的KASP分子标记位点位于玉米4号染色体的第180199014位， 为SEQ  ID No.4的第83位 核苷酸， 该位 点的碱基为A或者C 。 3.根据权利要求1或2所述的应用， 其特征在于， 所述的用于检测与玉米抗纹枯病相关 基因FBL紧密连锁的KAS P分子标记位 点的多态性或基因型的物质为以下的D1)或D2)： D1)用于检测与玉米抗纹枯病相关基因FBL紧密连锁的KASP分子标记位点的多态性或 基因型的引物组； D2)包含D1)中所述引物组的PCR试剂或试剂盒。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于， 所述的用于检测与玉米抗纹枯病相关基因 FBL紧密连锁的KASP分子标记位点的多态 性或基因型的引物组包含SEQ  ID No.1的第22 ‑39 位的单链DNA、 SEQ  ID No.2的第2 2‑39位的单链DNA和SEQ  ID No.3的单链DNA； 或者， 包含如SEQ  ID No.1所示的Primer  X、 如SEQ ID No.2所示的Primer  Y和如SEQ   ID No.3所示的Primer  R。 5.根据权利要求1～4中任意一种所述的应用， 其特征在于， 检测与玉米抗纹枯病相关 基因FBL紧密连锁的KASP分子标记位点的多态性或基因型， 根据待测玉米的基因型选育抗 纹枯病玉米品种； 基因型为CC的待测玉米为抗纹枯病玉米； 基因型为AC或者AA的待测玉米 为纹枯病敏感型玉米。 6.用于检测与玉米抗纹枯病相关基因FBL紧密连锁的KASP分子标记位点的多态性或基 因型的引物组， 其特征在于： 该引物组包含SEQ  ID No.1的第22 ‑39位的单链DNA、 SEQ  ID  No.2的第2 2‑39位的单链DNA和SEQ  ID No.3的单链DNA； 或者， 包含如SEQ  ID No.1所示的Primer  X、 如SEQ ID No.2所示的Primer  Y和如SEQ   ID No.3所示的Primer  R； 所述的与玉米抗纹枯病相 关基因FBL紧密连锁的KASP分子标记位点位于玉米4号染色 体的第18019 9014位， 该位点的碱基为A或者C 。 7.一种用于检测与玉米抗纹枯病相关基因FBL紧密连锁的KASP分子标记位点的多态性 或基因型的P CR试剂或试剂盒， 其特征在于： 该PCR试剂或试剂盒包含权利要求2所述的引物 组。 8.一种分子标记辅助选育抗纹枯病 玉米品种的方法， 其特征在于， 采用权利要求6所述 的引物组或权利要求7所述的P CR试剂或试剂盒检测与玉米抗纹枯病相关基因FBL紧密连锁 的KASP分子标记位点的多态性或基因型， 根据待测玉米的基因型选育抗纹枯病玉米品种； 基因型为CC的待测玉米为抗纹枯病玉米； 基因型为AC或者AA的待测玉米为纹枯病敏感型玉 米。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114941039 A 2玉米抗纹枯病相关基因的KASP分子标记及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物技术领域， 尤其是涉及与玉米抗纹枯病相关基因的KASP分子标记 及其应用。 背景技术 [0002]玉米纹枯病主要是由腐生营养真菌 R.Solani导致的玉米疾病， 这种疾病 在中国以 及亚洲南部和东 南部频发， 已经严重影响了玉米的产量。 [0003]目前， 抗纹枯病的玉米品种得到了选育， 但是利用基因手段来得到抗纹枯病的种 植资源还未有应用。 同时， 也开发了与基因连锁的分子标记， 通过分子标记辅助选择技术 (Marker‑assisted  Selection， MAS)进行玉米抗纹枯病相关的育种工作， 弥补了传统育种 中出现的诸多弊端， 成为 解决品种选 育难这一问题的有效途径。 [0004]然而， 玉米抗纹枯病相关基因的连锁标记虽然可以用于分子标记辅助选择， 但多 为CAPS标记、 SSR标记、 InDel标记或酶切标记， 检测效率低， 同时还可能会产生气溶胶污染 环境， 不适用于高通量的分子检测平台。 因此， 开发低 成本、 可高通量检测的分子标记是促 进玉米抗纹枯病相关基因鉴定与提高育种效率的迫切需求。 [0005]KASP(Kompetit ive Allele‑Specific  PCR， 竞争性等位基因特异 性PCR)通过荧光 探针特异性识别基因位点达到基因分型的效果， 可快速检测SNP位点。 与SSR、  RFLP、 InDel 等分子标记相比， KASP标记具有检测快速， 成本低， 易于规模化应用等特点， KASP标记不需 要根据DNA片段大小进行分型， 能够摆脱传统凝胶电泳这种步骤相对繁琐， 低通量， 价格又 较贵的检测方法， 更加适用于现阶段飞速发展的高通量分子检测平台。 因此， 开发低 成本、 适合于高通量分子检测平台的玉米抗纹枯病相关基因KASP分子标记对于推广普及分子标 记技术的应用、 提高我国玉米抗纹枯病相关育种效率和育种水平具有重要意 义。 发明内容 [0006]本发明的目的在于提供用于检测与玉米抗纹枯病相关基因FBL紧密连锁的KASP   分子标记位 点的多态性或基因型的物质及其应用。 [0007]本发明的目的可以通过以下技 术方案实现： [0008]用于检测 与玉米抗纹枯病相关基因FBL紧密连锁的KASP分子标记位点的多态性或 基因型的物质在 如下(1)、 (2)或(3)中的应用： [0009](1)鉴定或辅助鉴定抗纹枯病玉米； [0010](2)制备用于鉴定或辅助鉴定抗纹枯病玉米的相关产品； [0011](3)玉米辅助育种或制备用于玉米辅助育种的产品。 [0012]作为一种优选技术方案， 所述的与 玉米抗纹枯病相关基因FBL紧密连锁的KASP  分 子标记位点是玉米基因组中的一个SNP位点， 位于玉米4号染色体的第  180199014位， 为SEQ   ID No.4的第83位核苷酸， 该位 点的碱基为A或者C 。 [0013]该KASP分子标记 KASP_FBL是基于玉米抗 纹枯病相关基因FBL中一个SNP  位点开发说　明　书 1/6 页 3 CN 114941039 A 3