(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210760857.8 (22)申请日 2022.06.30 (66)本国优先权数据 202111473100.2 2021.12.02 CN (71)申请人 连云港市农业科 学院 地址 222000 江苏省连云港市海州区迎宾 大道西 (72)发明人 王军　柴文波　许翰元　李淑芬　 祝庆　迟铭　李洪涛　 (74)专利代理 机构 上海怡恩专利代理事务所 (普通合伙) 31336 专利代理师 牟俊玲 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01)A01H 1/04(2006.01) (54)发明名称 玉米耐旱基因的KASP分子标记的开发及应 用 (57)摘要 本发明公开了玉米耐旱基因的KASP分子标 记的开发及应用， 属于生物技术领域。 它包括检 测待测玉米的基因型， 根据待测玉米的基因型鉴 定或辅助鉴定玉米耐旱； 所述基因型为玉米基因 组中KASP_RSP位点的基因型； 所述KASP_RSP位点 是玉米基因组中的一个SNP位点。 本发明提供了 一种玉米耐旱基因RSP41紧密连锁的KASP标记开 发与应用， 所述分子标记是与玉米耐旱基因 RSP41紧密连锁的KASP标记KASP_RSP。 该标记基 于KASP技术开发， 可高通量检测玉米基因组5号 染色体的第73851206位碱基。 本发明应用KASP技 术对玉米耐旱基因RSP41进行基因型鉴定， 具有 操作简便、 成本低廉、 检测周期短、 标记稳定、 绿 色环保等优 点， 可精准检测玉米耐旱基因RSP41， 对促进玉米耐旱育种具有重要意 义。 权利要求书2页 说明书7页 序列表1页 附图1页 CN 115505648 A 2022.12.23 CN 115505648 A 1.玉米耐旱基因的KASP分子标记 的开发方法， 其特征在于： 包括检测待测玉米的基因 型， 根据待测玉米的基因型鉴定或辅助鉴定玉米耐旱； 所述基因型为玉米基因组中KASP_ RSP位点的基因型； 所述KASP_RSP位点是玉米基因组中的一个SNP位点， 位于玉米5号染色体 的第7385120 6位， 所述SNP位 点是核苷酸种类为C或者T， 为SEQ  ID No.4的第51位核苷酸； 所述KASP_RSP位点的基因型为CC基因型的待测玉米为耐旱或者候选为耐旱玉米； 所述 KASP_RSP位点的基因型为TT基因型或者CT基因型的待测玉米为不耐旱或者候选为不耐旱 玉米； 其中， 所述CC基因型表示玉米基因组中所述KASP_RSP位点的核苷酸种类为C的纯合 型； 所述TT基因型表 示玉米基因组中所述KASP_RSP位点的核苷 酸种类为T的纯合型； 所述CT 基因型表示玉米 基因组中所述KAS P_RSP位点的核苷酸种类为C和T的杂合型。 2.根据权利要求1所述的玉米耐旱基因的KASP分子标记的开发方法而提出的应用， 其 特征在于， 所述应用包括以下几个方面： 1） 、 所述KASP_RSP位点的多态性或基因型的物质在鉴定或辅助鉴定玉米耐旱中的应 用； 2） 、 所述KASP_RSP位点的多态性或基因型的物质在制备鉴定或辅助鉴定玉米耐旱的产 品中的应用； 3） 、 所述KASP_RSP位点的多态性或基因型的物质在玉米辅助育种或制备玉米辅助育种 产品中的应用。 3.根据权利要求1所述的玉米耐旱基因 的KASP分子标记的开发方法而提出的玉米育种 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 包括选择权利要求1中所述KASP_RSP位点的基因型为CC的玉米作为亲本进行育种， 所 述CC基因型表示玉米基因组中所述KASP_RSP位点的核苷酸种类为C的纯合型； 所述玉米育 种可为培 育耐旱玉米。 4.根据权利要求1所述的玉米耐旱基因的KASP分子标记的开发方法而生产出的产品， 其特征在于， 主 要包括以下几种产品， C1） 检测与玉米耐旱相关的SNP多态性或基因型的产品； C2） 鉴定或辅助鉴定玉米耐旱的产品； C3） 用于玉米辅助育种的产品。 5.根据权利要求2所述的玉米耐旱基因 的KASP分子标记的开发方法而提出的应用或权 利要求4所述的玉米耐旱基因的KASP分子标记的开 发方法而生产出的产品， 其特征在于： 所 述KASP_RSP位点多态性或基因型的物质为如下D1） 、 D2） 或D3） ： D1） 所述检测权利要求1中KASP_RSP位点的多态性或基因型的物质含有扩增包括所述 KASP_RSP位点在内的玉米 基因组DNA片段的PCR引物； D2） 所述检测权利要求1中KASP_RSP位点的多态性或基因型的物质为含有所述PCR引物 的PCR试剂； D3） 含有D1） 所述PCR引物或D2） 所述PCR试剂的试剂盒。 6.根据权利要求5所述的应用或产品， 其特征在于： 所述PCR引物为由核苷酸序列是序 列表中SEQ  ID No.1的第22 ‑44位的单链DNA、 核苷酸序列 是序列表中SEQ  ID No.2的第22 ‑ 44位的单链DNA和核苷酸序列是序列表中SEQ  ID No.3的单链DNA组成的引物组。 7.根据权利要求5或6所述的应用或产品， 其特征在于： 所述PCR引物为由序列表中SEQ  权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115505648 A 2ID No.1所示的单链DNA、 序列表中SEQ  ID No.2所示的单链DNA和由序列表中SEQ  ID No.3 所示的单链DNA的引物组。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115505648 A 3