(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210730918.6 (22)申请日 2022.06.24 (71)申请人 中国科学院苏州生物医学工程 技术 研究所 地址 215163 江苏省苏州市高新区科灵路 88号 (72)发明人 尹焕才　陈名利　殷建　茹静　 (74)专利代理 机构 北京三聚阳光知识产权代理 有限公司 1 1250 专利代理师 周淑歌 (51)Int.Cl. C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 用于乙型流感病毒检测的LAMP引物组 (57)摘要 本发明涉及用于乙型流感病毒检测的LAMP 引物组， 属于分子生物学技术领域。 本发明提供 了用于乙型流感病毒检测的LA MP引物组， 包括核 苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示的上游内部引物 FIP、 核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示的上游外部 引物F3、 核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示的下游 内部引物BIP、 核苷酸序列如SEQ  ID NO.4所示的 下游外部引 物B3、 核苷酸序列如SEQ  ID NO.9所 示的环状引物Loop  F和核苷酸序列如SEQ  ID  NO.10所示的环 状引物LoopB。 使用所述LA MP引物 组进行乙型流 感病毒定性检测， 快速、 高效、 特异 性强、 结果 易判断、 无需特殊仪 器且不依赖 变温。 权利要求书1页 说明书4页 序列表2页 附图1页 CN 115058417 A 2022.09.16 CN 115058417 A 1.用于乙型流感病毒检测的LAMP引物组， 其特征在于， 所述LAMP引物组靶向HA基因， 包 括核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示的上游内部引物FIP、 核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示的 上游外部引物F3、 核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示的下游内部引物BIP、 核苷酸序列如SEQ   ID NO.4所示的下游外部引物B3、 核苷酸序列如SEQ  ID NO.5所示的环状引物Loop  F和核苷 酸序列如SEQ  ID NO.6所示的环状引物L oop B。 2.如权利要求1所述的LAMP引物组， 其特征在于， 所述HA基因的核苷酸序列如SEQ  ID  NO.7所示。 3.用于乙型流感病毒检测的LAMP检测试剂盒， 其特征在于， 所述LAMP检测试剂盒包括 权利要求1或2所述的LAMP引物组。 4.如权利 要求3所述的LAMP检测试剂盒， 其特征在于， 所述LAMP检测试剂盒还包括荧光 染料和LAMP预混液。 5.如权利要求4所述的LAMP检测试剂盒， 其特征在于， 所述荧光染料为SYTO  9荧光染 料、 SYTO 12荧光染料或SYTO  16荧光染料中的至少一种。 6.一种定性检测乙型流感病 毒的方法， 其特征在于， 所述方法为： 使用权利要求3～5任 一项所述的LAMP检测试剂盒对待测样 本进行检测， 将LAMP引物组、 LAMP预混液、 荧光染料和 待测样本混合， 得到LAMP反应体系； 将LAMP反应体系进行孵育， 孵育过程检测孵育液的荧光 值， 若孵育液的荧光值较孵育前有变化且变化幅度超过20％， 则待测样本中有乙型流感病 毒。 7.如权利要求6所述的方法， 其特征在于， 所述孵育的温度为60～65℃、 时间为30～ 60min。 8.如权利要求6或7所述的方法， 其特征在于， 所述LAMP反应体系由12.5μL  2×LAMP预 混液、 2.5 μL  10×Primer Mix、 3.0 μL待测样本、 1.0 μL荧光染料和9.0 μL去离子水H2O组成； 所述10×Primer Mix含有16 μM上游内部引物FIP、 16 μM 下游内部引物BIP、 2 μM上游外部引物 F3、 2 μM下游外 部引物B3、 4 μM环状引物L oop F和4 μM环状引物L oop B。 9.如权利要求8所述的方法， 其特征在于， 所述10 ×Primer Mix的配置方法为： 将上游 内部引物FIP、 下游内部引物BIP、 上游外部引物F3、 下游外部引物B3、 环状引物Loop  F和环 状引物Loop B添加至无菌水中。 10.权利要求1或2所述的LAMP引物 组或权利 要求3～5任一项所述的LAMP检测试剂盒或 权利要求6～ 9任一项所述的方法在乙型流感病毒定性检测中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115058417 A 2用于乙型流感病毒检测的LAMP引物组 技术领域 [0001]本发明涉及用于乙型流感病毒检测的LAMP引物组， 属于分子生物学技 术领域。 背景技术 [0002]流感病毒属于正黏病毒科， 分为甲、 乙、 丙、 丁四种类别， 其中乙型流感病毒是人类 流感疾病的主要病原体， 且几乎专门感染人类， 约占人类总感染数的三分之一。 乙型流 感病 毒会引起急性呼吸道疾病， 其所致疾病的临床表现为发病快、 发热、 畏寒、 头痛、 乏力、 干咳 和腹泻等， 严重时可导致死亡。 乙型流感病毒传播迅速、 波及范围广、 发病率和死亡率较高， 严重威胁人类健康。 [0003]乙型流感病毒检测方法对于乙型流感病毒早期快速诊断十分关键。 而乙型流感病 毒早期快速诊断对于其治疗和防控起到至关重要的作用。 目前， 临床应用的乙型流感病毒 检测方法有免疫荧光法、 酶免疫测定法、 免疫色谱法、 逆转录 ‑聚合酶链反应(RT ‑PCR)和实 时荧光定量P CR技术等。 这些方法或检测时间较长， 或步骤繁琐， 或 需要特殊的仪器， 难以广 泛应用。 免疫层析法是近年来发展的一种 快速诊断技术， 该技术应用免疫胶体金或免疫酶 染色可使特定区域显示 一定的颜色， 从而实现特异性的快速免疫 诊断， 但灵敏度不高。 [0004]以LAMP为代表的等温扩增技术是一种能在体外恒温条件下高效、 快速且经济地扩 增核酸的检测技术。 该技术方法能够在60～65℃恒温条件 下， 30min内实现核酸靶 标分子的 高特异性和高灵敏度扩增， 具有 快速、 高效、 特异 性强、 结果易判断、 无需特殊仪器且不依赖 变温的优点。 目前， 等温扩增技术已经被广泛应用于新型冠状病毒、 中东呼吸综合征冠状病 毒、 埃博拉病毒， 寨卡病毒等一系列病原微生物的快速检测。 因此， 若能开发基于等温扩增 的乙型流感病毒检测方法， 对解决现有乙型流感病毒检测方法所存在的问题十分重要。 发明内容 [0005]为解决上述问题， 本发明提供了用于乙型流感病毒检测的LAMP引物组， 所述LAMP 引物组靶向HA基因， 包括核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示的上游内部引物FIP、 核苷酸序列 如SEQ ID NO.2所示的上游外部引物F3、 核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示的下游内部引物 BIP、 核苷酸序列如SEQ  ID NO.4所示的下游外部引物B3、 核苷酸序列如SEQ  ID NO.5所示的 环状引物L oop F和核苷酸序列如SEQ  ID NO.6所示的环状引物L oop B。 [0006]在本发明的一种实施方式 中， 所述HA基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.7所示。 [0007]本发明还提供了用于乙型流感病毒检测的LAMP检测试剂盒， 所述LAMP检测试剂盒 包括上述 LAMP引物组。 [0008]在本发明的一种实施方式中， 所述LAMP检测试剂盒还包括荧光染料和LAMP预混 液。 [0009]在本发明的一种实施 方式中， 所述荧光染料为SYTO  9荧光染料、 SYT O 12荧光染料 或SYTO 16荧光染料中的至少一种。 [0010]本发明还提供了一种定性检测乙型流感病毒的方法， 其特征在于， 所述方法为： 使说　明　书 1/4 页 3 CN 115058417 A 3