(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210583909.9 (22)申请日 2022.05.26 (71)申请人 中国疾病预防控制中心 职业卫生与 中毒控制所 地址 100050 北京市西城区南纬路2 9号 (72)发明人 张驭涛　郎楠　蒋绍锋　李海蛟　 章轶哲　程博文　何仟　张宏顺　 尹萸　袁媛　周静　马沛滨　 (74)专利代理 机构 北京红福盈知识产权代理事 务所(普通 合伙) 11525 专利代理师 陈月福 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 用于检测毒芹的核酸试剂、 试剂盒及检测方 法 (57)摘要 本公开涉及生物技术领域， 具体地， 涉及一 种用于检测毒芹的核酸试剂、 试剂盒及检测方 法。 其中， 所述核酸试剂是针对毒芹的ITS1基因 设计得到的， 包括SEQ  ID NO.1‑2所示的引 物和 SEQ ID NO.3所示的探针。 利用本公开提供的核 酸试剂、 试剂盒或者方法， 能够快速、 准确地实现 待测样本中毒芹的检测或鉴别， 具有良好的灵敏 性和特异性。 权利要求书1页 说明书6页 序列表1页 附图2页 CN 115058530 A 2022.09.16 CN 115058530 A 1.一种用于检测毒芹的核酸试剂， 其特征在于， 所述核酸试剂是针对毒芹的ITS1基因 设计得到的。 2.根据权利要求1所述的核酸试剂， 其特征在于， 所述核酸试剂包括SEQ  ID NO.1‑2所 示的引物和SEQ  ID NO.3所示的探针。 3.根据权利要求2所述的核酸试剂， 其特征在于， 所述探针的5'端标记有荧光报告基 团， 所述探针的3'端标记有荧 光淬灭基团。 4.根据权利要求3所述的核酸试剂， 其特征在于， 所述荧光报告基团选自FAM基团、 VIC 基团、 JOE基团和HEX基团， 所述荧光淬灭基团选自TAMAR基团、 BHQ1基团、 BHQ2基团和MGB基 团； 可选的， 所述 荧光报告基团为FAM基团， 所述 荧光淬灭基团为MGB基团。 5.一种用于检测毒芹的试剂盒， 其特征在于， 该试剂盒含有权利要求1～4中任意一项 所述的核酸试剂。 6.根据权利要求5所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒还包括空白对照品、 阴性对 照品和阳性对照品。 7.权利要求1～4中任意 一项所述的核酸试剂在制备用于检测毒芹的试剂盒中的用途。 8.权利要求1～4中任意一项所述的核酸试剂或者权利要求5或6中所述的试剂盒在检 测毒芹或者样品中毒芹成分中的用途。 9.一种用于检测毒芹的方法， 其特 征在于， 该 方法包括： 提取样品中的核酸， 获得样品DNA； 利用权利要求1～4中任意 一项所述的核酸试剂对所述样品DNA进行实时荧 光PCR反应。 10.根据权利要求9所述的方法， 其特 征在于， 所述方法还 包括： 分别利用权利要求1～4中任意一项所述的核酸试剂对空白对照品、 阴性对照品和阳性 对照品进行实时荧 光PCR反应， 并进行如下的判别： 若空白对照品、 阴性对照品和阳性对照品的检测结果成立， 则所述样品DNA的检测结果 有效； 若所述样品DNA的荧光通道检测到的扩增曲线呈S型， 且Ct值≥40， 则判定检测结果为 阴性； 若所述样品DNA的荧光通道检测到的扩增曲线呈S型， 且Ct值≤36， 则判定检测结果为 阳性； 若荧光通道检测到的扩增曲线呈S型， 且36＜Ct值＜40， 则重新提取样品DNA并复检， 若 复检得到的扩增曲线呈S型， 且Ct值＜40， 则判定检测结果 为阳性， 否则为阴性。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115058530 A 2用于检测毒芹的核酸试剂、 试剂盒及检测方 法 技术领域 [0001]本公开涉及生物技术领域， 具体地， 涉及一种用于检测毒芹的核酸试剂、 试剂盒及 检测方法。 背景技术 [0002]毒芹属植物(学名： Cicuta  virosa L.)为伞形科多年生草本植物， 约有20个品种， 我国现有毒芹原变种和宽叶毒芹两种。 毒芹属植物的植株高可达70～100厘米， 生于海拔 400‑2900米的杂木林下、 湿地或水沟边。 毒芹属植物干草和鲜草均有毒， 全株有毒， 其中以 根茎最毒， 早春和晚秋期间毒性更大。 因其外形与芹菜十分类似， 常被误认为山芹、 水芹等 植物被采食而导致采食者中毒。 毒芹的毒性成分为毒芹素(Cincutoxin)和毒芹碱 (Cicutin)， 中毒发作极快， 主要导致中枢神经系统兴奋， 有显著的致痉 挛作用， 中毒后可表 现为恶心、 腹胀、 瞳孔扩大， 严重者昏迷、 痉挛， 甚至因窒息而死 亡。 [0003]目前， 毒芹的鉴别多为形态学鉴别或利用色谱法进行毒性成分检测， 然而， 形态学 鉴别非专业人士难以掌握， 色谱法较为复杂且耗时较长 。 发明内容 [0004]本公开的目的是提供一种特异性和灵敏度高的、 快速、 准确检测毒芹的核酸试剂、 试剂盒及检测方法。 [0005]为了实现上述目的， 本公开提供一种用于检测毒芹的核酸试剂， 所述核酸试剂是 针对毒芹的ITS1基因设计得到的。 [0006]可选的， 所述核酸试剂包括SEQ  ID NO.1‑2所示的引物和SEQ  ID NO.3所示的探 针。 [0007]可选的， SEQ  ID NO.1所示的引物可以为上游引物CV ‑F： TACGAAATCGGGCGCGGAAA； SEQ ID NO.2所示的引物可以为下游引物CV ‑R： CCGTTGCCGAGAGTCGTTTGTG； SEQ  ID NO.3所 示的探针可以为： 5' ‑TTGCACGTGC CTTCCCGTACGCG GGAAG‑3'。 [0008]可选的， 所述探针的5'端标记有荧光报告基团， 所述探针的3'端标记有荧光淬灭 基团。 [0009]可选的， 所述荧光报告基团选自FAM基团、 VIC基团、 JOE基团和HEX基团， 所述荧光 淬灭基团选自TAMAR基团、 BHQ1基团、 BHQ2基团和MGB基团； [0010]可选的， 所述 荧光报告基团为FAM基团， 所述 荧光淬灭基团为MGB基团。 [0011]本公开还提供了一种用于检测毒芹的试剂盒， 该试剂盒含有上述任意一项所述的 核酸试剂。 [0012]可选的， 所述试剂盒还 包括空白对照品、 阴性对照品和阳性对照品。 [0013]可选的， 空白对照品可以为ddH2O， 阴性对照品可以为非毒芹成分基因组DNA， 阳性 对照品可以为含毒芹成分基因 组DNA。 [0014]本公开还提供了上述任意一项所述的核酸试剂在制备用于检测毒芹的试剂盒中说　明　书 1/6 页 3 CN 115058530 A 3