(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210612875.1 (22)申请日 2022.06.01 (71)申请人 昆明理工大 学 地址 650093 云南省昆明市五华区学府路 253号 (72)发明人 冯悦　张押香　刘丽　夏雪山　 (74)专利代理 机构 昆明同聚专利代理有限公司 53214 专利代理师 苏芸芸 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01)C12R 1/93(2006.01) C12R 1/145(2006.01) C12R 1/66(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 用于检测消化道感染性疾病病原体的检测 试剂 (57)摘要 本发明公开了一种用于检测消化道感染性 疾病病原 体的检测试剂， 其包括检测轮状病毒、 1 型诺如病毒、 2型诺如病毒、 肠道病毒、 艰难梭状 芽孢杆菌、 幽门螺旋杆菌低毒株、 曲霉菌、 溶 组织 内阿米巴的特异性引物和TaqMan探针； 本发明方 法可以同时检测上述4种病毒、 2种细菌、 1种真菌 和1种寄生虫； 且灵敏度高， 特异性强， 操作 简单、 时间短、 成本低廉， 对消化道感染患者临床早期 诊断具有重要意 义。 权利要求书1页 说明书8页 序列表6页 附图7页 CN 114908194 A 2022.08.16 CN 114908194 A 1.一种用于检测消化道感染性疾病病原体的检测试剂， 其特征在于： 包括检测轮状病 毒、 1型诺如病毒、 2型诺如病毒、 肠道病毒、 艰难梭状芽孢杆菌、 幽门螺旋杆菌低毒株、 曲霉 菌、 溶组织内阿米巴的特异性引物和TaqMan探针； 所述特异性引物为针对轮状病毒的SEQ  ID NO:1和 SEQ ID NO:2、 针对1型诺如病毒的 SEQ ID NO:4和 SEQ ID NO:5、 针对2型诺如病毒的SEQ  ID NO:7和 SEQ ID NO:8、 针对肠 道 病毒SEQ ID NO:10和 SEQ ID NO:11、 针对艰难梭状芽孢杆菌SEQ  ID NO:13和 SEQ ID NO: 14、 针对幽门螺旋杆菌低毒株SEQ  ID NO:16和 SEQ ID NO:17、 针对曲霉菌SEQ  ID NO:19和  SEQ ID NO:20、 针对溶组织内阿米巴的SEQ  ID NO:22和 SEQ ID NO:23； 所述TaqMan探针为针对轮状病毒的SEQ  ID NO:3、 针对 1型诺如病毒的SEQ  ID NO:6、 针 对2型诺如病毒的SEQ  ID NO:9、 针对肠道病毒SEQ  ID NO:12、 针对艰难梭状芽孢杆菌SEQ   ID NO:15、 针对幽门螺旋杆菌低毒株SEQ  ID NO:18、 针对曲霉菌SEQ  ID NO:21、 针对溶组织 内阿米巴的SEQ  ID NO:24。 2.根据权利要求1所述的用于检测消化道感染性疾病病原体的检测试剂， 其特征在于： TaqMan探针进行标记的荧光基团包括但不限于FAM、 ROX、 TAMRA、 CY5； 淬灭荧光基团的标记 包括但不限于BHQ1、 BHQ2、 DABC YL。 3.根据权利要求2所述的用于检测消化道感染性疾病病原体的检测试剂， 其特征在于： 轮状病毒、 1型诺如病毒、 2型诺如病毒和肠道病毒 （通用型） 的特异 性引物和探针同时使用； 艰难梭状芽孢杆菌、 幽门螺旋杆菌低毒株、 曲霉菌、 溶组织内 阿米巴的特异 性引物和探针同 时使用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114908194 A 2用于检测消化道感染性疾病病原体的检测试剂 技术领域 [0001]本发明属于基因检测技术领域， 具体涉及一种同时检测8种消化道感染性疾病病 原体的引物和TaqMan探针。 背景技术 [0002]消化道感染是临床儿科最常见的一种疾病， 仅次于呼吸道感染， 且发病率仍在逐 年增高， 消 化道疾病已成为当今全球性公共卫生问题之一。 导致消 化道传染病的病原体主 要是病毒、 细菌、 真菌和寄生虫。 其中， 诺如病毒 （1 ‑2） 、 轮状病毒、 肠道病毒等 感染引起病毒 性腹泻； 艰难梭状芽胞杆菌、 伤寒沙门氏菌、 金黄色葡萄球菌等感染引起细菌性腹泻。 据报 道， 在很多低收入国家， 每年由轮 状病毒感染导 致的死亡人数超过20万人。 [0003]引起腹泻或肠道疾病的病原体很多， 且临床症状难以区分。 因此对病原体进行鉴 别分析， 对医生或患者早期及时制 定合理的医疗方案具有重要意义。 临床检测消 化道病原 体的方法有很多， 如传统的镜检法， 病原体分离培养等， 目前分离培养法仍作为鉴定病原体 的金标准， 但是该方法耗时长， 检出率低， 需要 经验丰富的检测人员。 近年来， 随着分子生物 学的发展， 一代测序、 环介导等 温扩增、 基因芯片技术、 数字PCR技术、 NGS测序技术及实时荧 光定量PCR技术得到发展。 这些技术 都有灵敏度高、 特异性 强的优点， 但是如LAPM技术、 基因 芯片、 数字PCR技 术等均易产生 假阳， 基因芯片虽然通 量高， 但是价格昂贵、 重复性差 。 发明内容 [0004]针对现有技术的缺陷， 本发明提供了一种用于检测消化道感染性疾病病原体的检 测试剂， 其包括检测轮状病毒、 1型诺如病毒、 2型诺如病毒、 肠道病毒 （通用型） 、 艰 难梭状芽 孢杆菌、 幽门螺旋杆菌低毒株、 曲霉菌、 溶组织内阿米巴的特异性引物和TaqMan探针， 以及 用于多重qP CR的常规检测试剂， 本发明对医生 或患者早期及时制定合理的医疗方案具有重 要意义。 [0005]所述特异性引物为针对轮状病毒的SEQ  ID NO:1和 SEQ ID NO:2、 针对1型诺如病 毒的SEQ ID NO:4和 SEQ ID NO:5、 针对2型诺如病毒的SEQ  ID NO:7和 SEQ ID NO:8、 针对 肠道病毒 （通用型） SEQ  ID NO:10和 SEQ ID NO:11、 针对艰难梭状芽孢杆菌SEQ  ID NO:13 和 SEQ ID NO:14、 针对幽门螺旋杆菌低毒株SEQ  ID NO:16和 SEQ ID NO:17、 针对曲霉菌 SEQ ID NO:19和 SEQ ID NO:20、 针对溶组织内阿米巴的SEQ  ID NO:22和 SEQ ID NO:23； 所述TaqMan探针为针对轮状病毒的S EQ ID NO:3、 针对1型诺如病毒的S EQ ID NO: 6、 针对2型诺如病毒的SEQ  ID NO:9、 针对肠道病毒SEQ  ID NO:12、 针对艰难梭状芽孢杆菌 SEQ ID NO:15、 针对幽门螺旋杆菌低毒株SEQ  ID NO:18、 针对曲霉菌SEQ  ID NO:21、 针对溶 组织内阿米巴的SEQ  ID NO:24。 [0006]TaqMan探针进行标记的荧光基团包括但不限于FAM、 ROX、 TAMRA、 CY5； 淬灭荧光基 团的标记包括但不限于BHQ1、 BHQ2、 DABC YL。 [0007]本发明中轮状病毒探针的5 ’端标记有FAM发光基团， 3 ’端标记有淬灭基团B HQ‑1； 1说　明　书 1/8 页 3 CN 114908194 A 3