(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221072469 2.9 (22)申请日 2022.06.24 (71)申请人 广西壮族自治区兽医研究所 地址 530001 广西壮 族自治区南宁市西乡 塘区友爱北路51号 (72)发明人 谢芝勋　武晓倩　罗思思　韦悠　 邓显文　李小凤　万丽军　曾婷婷　 谢丽基　任红玉　 (74)专利代理 机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 专利代理师 董函竹 (51)Int.Cl. C07K 14/075(2006.01) C12N 15/34(2006.01) C12N 15/70(2006.01)C12N 1/21(2006.01) G01N 33/569(2006.01) G01N 33/58(2006.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/19(2006.01) (54)发明名称 用于检测血清4型禽腺病毒的重组蛋白、 试 剂盒及EL ISA检测方法 (57)摘要 本发明公开了用于检测血清 4型禽腺病毒的 重组蛋白、 试剂盒及ELISA 检测方法。 具体地公开 了氨基酸序列是SEQ  ID No.1的重组蛋白100K (672‑1053)、 及其作为检测抗原在制备用于检测 血清4型禽腺病毒的产品中的应用。 本发明还公 开了FAdV ‑4抗体检测试剂盒及ELISA检测方法。 本发明的重组蛋白与FAdV ‑4阳性血清特异性结 合， 具有良好的反应原性， 利用该重组蛋白建立 的检测试剂盒与方法特异性强， 无交叉反应， 灵 敏度高， 重复性好， 同时可区分灭活苗免疫和自 然感染产生抗体的动物， 能够鉴别FAdV ‑4感染， 为FAdV‑4的净化提供技术支持， 为HHS疫病的防 控提供可靠、 有效的手段。 权利要求书2页 说明书18页 序列表3页 附图5页 CN 115109127 A 2022.09.27 CN 115109127 A 1.重组蛋白， 其特 征在于， 所述重组蛋白为下述任一种： A1)氨基酸序列是SEQ  ID No.1的蛋白质； A2)将SEQ  ID No.1所示的氨基酸序列经过氨基酸残基 的取代和/或缺失和/或添加得 到的与A1)所示的蛋白质具有80％以上的同一 性且具有相同功能的蛋白质； A3)在A1)或A 2)的N端和/或C端连接标签或信号肽得到的具有相同功能的融合蛋白质。 2.核酸分子， 其特 征在于， 所述核酸分子为下述任一种： B1)编码权利要求1所述重组蛋白的核酸分子； B2)编码序列是SEQ  ID No.2所示的DNA分子； B3)核苷酸序列是SEQ  ID No.2所示的DNA分子 。 3.生物材 料， 其特征在于， 所述 生物材料为下述C1)至 C4)中的任一种： C1)含有权利要求2所述核酸分子的表达盒； C2)含有权利要求2所述核酸分子的重组载体、 或含有C1)所述表达盒的重组载体； C3)含有权利 要求2所述核酸分子的重组微生物、 或含有C1)所述表达盒的重组微生物、 或含有C2)所述重组载体的重组微 生物； C4)含有权利 要求2所述核酸分子的重组细胞、 或含有C1)所述表达盒的重组细 胞、 或含 有C2)所述重组载体的重组细胞。 4.权利要求1所述的重组蛋白， 和/或， 权利要求2所述的核酸分子， 和/或， 权利要求3所 述的生物材 料的下述任一种应用： D1)在检测血清4型禽腺病毒或制备用于检测血清4型禽腺病毒的产品中的应用； D2)在诊断或辅助诊断血清4型禽腺病毒感染所引起的疾病或制备用于诊断或辅助诊 断血清4型禽腺病毒感染所引起的疾病的产品中的应用； D3)在筛查或辅助筛查血清4型禽腺病毒感染所引起的疾病或制备用于筛查或辅助筛 查血清4型禽腺病毒感染所引起的疾病的产品中的应用； D4)在鉴别血清4型禽腺病毒自然感染动物和灭活疫苗免疫动物或制备用于鉴别血清4 型禽腺病毒自然感染动物和灭活疫苗免疫动物的产品中的应用； D5)在制备用于检测血清4型禽腺病毒的检测抗原中的应用； D6)在制备 血清4型禽腺病毒抗体中的应用； D7)在血清4型禽腺病毒感染所引起疾病的防控中的应用。 5.一种用于检测血清4型禽腺病毒的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括权利要求1 所述的重组蛋白。 6.制备权利要求5所述试剂盒的方法， 其特征在于， 所述方法包括将权利要求1所述的 重组蛋白制成6 μg/mL的溶 液包被固相载体得到包被抗原的固相载体的步骤。 7.根据权利要求6所述的方法， 其特征在于， 所述包被固相载体的条件是37℃放置2h后 4℃放置14h 。 8.用于扩增权利要求1所述重组蛋白的基因的引物对， 其特征在于， 所述引物对由引物 100K(672 ‑1053)‑F和引物100K(672 ‑1053)‑R组成， 所述引物100K(672 ‑1053)‑F为SEQ ID  No.3所示的单链DNA分子； 所述引物10 0K(672‑1053)‑R为SEQ ID No.4所示的单链DNA分子 。 9.一种用于检测血清4型禽腺病毒抗体的方法， 其特征在于， 所述方法是以权利要求1 所述重组蛋白作为 抗原， 采用EL ISA间接法检测待测样品中的血清4型禽腺病毒抗体。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115109127 A 210.根据权利要求9所述的方法， 其特 征在于， 所述方法包括如下步骤： E1)向权利要求5 ‑7中任一所述的试剂盒中加入待测样品； E2)加入待测样品后孵 育30min； E3)加入酶标二 抗孵育30min， 所述酶标二 抗为HRP标记山羊抗鸡IgG抗体； E4)加入酶的反应底 物显色。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115109127 A 3