(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211232839.9 (22)申请日 2022.10.10 (71)申请人 黑龙江省科 学院自然与生态研究所 地址 150000 黑龙江省哈尔滨市香坊区哈 平路103号 (72)发明人 沈光　杨轶华　张玉　张文天　 周琳　陈菲　付俊生　 (74)专利代理 机构 哈尔滨市哈科专利事务所有 限责任公司 23101 专利代理师 孟策 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 用于橡胶草种子真实性检测的毛细管电泳 和SSR荧光标记引物组及检测方法 (57)摘要 本发明公开了一种用于橡胶草种子真实性 检测的毛细管电泳和SSR荧光标记引物组及检测 方法。 利用23条多态性好、 重复性高的引物对待 测种子和标准种子的基因组DNA进行PCR扩增和 毛细管凝胶电泳分离， 比较所得出的扩增图谱来 判断种子的真伪。 该方法兼具SSR荧光标记和毛 细管凝胶电泳两种技术的特色和优点， 检测灵敏 度高， 提高试验效率， 减少人为误差， 具有快速、 准确、 操作方便等优点， 使试验结果更精确， 并且 鉴定过程和结果 不受自然环境的影响。 权利要求书3页 说明书8页 附图3页 CN 115386653 A 2022.11.25 CN 115386653 A 1.一种基于毛细管电泳和SSR标记的橡胶草种子真实性引物组， 其特征在于， 选择如下 全部的23对引物组： 引物名称： TKS  01， 正向： 5'‑CTGACTTTGACTGGGGCACT‑3' 反向： 5'‑CCTCGGTTTCTGGGGTATCT‑3'； 引物名称： TKS  02， 正向： 5'‑AAAGCCAAACCTATACTTCTCCG‑3' 反向： 5'‑CTAACATACGCTGAT TGGCTACC‑3'； 引物名称： TKS  03， 正向： 5'‑GATGGGCTCCTTCAACTAAC‑3' 反向： 5'‑TCCACGCTGATGTATGCTAC ‑3'； 引物名称： TKS  04， 正向： 5'‑GCATCCAGAGGAGGAGCAGT‑3' 反向： 5'‑GCCGTCAAAGGAACCAACAT‑3'； 引物名称： TKS  05， 正向： 5'‑TCTGTCTCTCACACTCTAT TTCTTTCA‑3' 反向： 5'‑AATGCGATCT TCAAAGTCTTCAA‑3'； 引物名称： TKS  06， 正向： 5'‑TTGAGTGATATG GATAAGGGGTG‑3' 反向： 5'‑TTTCATCTTGACTCAAACCGTCT‑3'； 引物名称： TKS  07， 正向： 5'‑AGAAGAAGGAAACTTTGCTCGAT ‑3' 反向： 5'‑TGTTTCGTGATCT TCTCCTTGAT‑3'； 引物名称： TKS  08， 正向： 5'‑GATGCTGA AGAAGATGATGATGA ‑3' 反向： 5'‑AAGTAACACACAGC CAAAAGAGC‑3'； 引物名称： TKS  09， 正向： 5'‑CTCAAACCCGTCACCCAAAC‑3' 反向： 5'‑GCGTCATCATCGTCTC CACC‑3'； 引物名称： TKS  10， 正向： 5'‑CGCCTCAGATCTCTGA ACTTATC‑3' 反向： 5'‑AACATATTGTGTTGCAGCGAT TT‑3'； 引物名称： TKS  11， 正向： 5'‑AACCACCACCTCCTTCTTCT‑3' 反向： 5'‑TCCGTACATC CTCACTTTCC‑3'； 引物名称： TKS  12， 正向： 5'‑TTTCCCTTTTCATCTTCTCG‑3' 反向： 5'‑GTAAACCTGACCTTCCTTGC‑3'； 引物名称： TKS  13，权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 115386653 A 2正向： 5'‑CAAATTGACATTGCTGCTCA AC‑3' 反向： 5'‑CAAAAATCCACAACACAAAACCT‑3'； 引物名称： TKS  14， 正向： 5'‑CTTACATCAAATCCCCTGTCCTA‑3' 反向： 5'‑CACAGAATTGGTCCCAAGAATAG‑3'； 引物名称： TKS  15， 正向： 5'‑AGCTTGATCTTCAATCGAGTTCT‑3' 反向： 5'‑AGTTTTGAGCTCCCCATATTGAC‑3'； 引物名称： TKS  16， 正向： 5'‑TATCACCCATTCAGAACCTC‑3' 反向： 5'‑ATCCTCCTCTAAATCATACTCG ‑3'； 引物名称： TKS  17， 正向： 5'‑TATCACTG GGCTTAGAAATGGTG‑3' 反向： 5'‑TGCATCATCACTCACT TCACTTC‑3'； 引物名称： TKS  18， 正向： 5'‑TTCCGGTAAACAAAATTGATACG‑3' 反向： 5'‑TGATTTTACAAGACAACAGAGCG ‑3'； 引物名称： TKS  19， 正向： 5'‑AACATTCTAAAAACTGGCACGAA‑3' 反向： 5'‑GTCTTCAAACAGAAAGCCAAAAA‑3'； 引物名称： TKS  20， 正向： 5'‑TCGAATCGCTGGTTAATTTATTG‑3' 反向： 5'‑GTTTGGAAGAGTTTTCTTGGAGA‑3'； 引物名称： TKS  21， 正向： 5'‑TTTGATGCGGAGGAGTAAGA‑3' 反向： 5'‑CGAGCGAAGAAAACAGAAGA‑3'； 引物名称： TKS  22， 正向： 5'‑TGTACTCCTGTACTC CCACCAAT‑3' 反向： 5'‑CATATACACTCGA AGGCGGATAC‑3'； 引物名称： TKS  23， 正向： 5'‑TGGAGGTAGGGAGTATTGCG‑3' 反向： 5'‑TGGGCTCTTCTGATGGTTGA‑3'。 2.一种基于毛细管电泳和SSR标记的橡胶草种子真实性检测方法， 包括以下步骤： 用权 利要求1所述的引物组作为引物， 以橡胶草基因组总DNA为模板， 分别进行荧光PCR扩增， 将 所得PCR产物进行毛细管电泳， 得到待测种子的电泳图谱， 读出所得谱带大小数值； 如果待 测种子与标准种子的谱带相同， 则证明该待测种子与标准种子为同一品种， 得出待测种子 的真实性。 3.根据权利要求2所述的一种基于毛细管电泳和SSR标记的橡胶草种子真实性检测方 法， 其特征在于： 所述的PCR扩增的PCR反应体系为： 20μL， 各组分包括： 含有Mg2+的2×Taq 权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 115386653 A 3