(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210711048.8 (22)申请日 2022.06.22 (71)申请人 闽江学院 地址 350108 福建省福州市闽侯县上街 镇 溪源宫路200号 申请人 福建省烟草专卖局烟草科 学研究所 (72)发明人 梁廷敏　唐唯其　李文卿　曲梦宇　 陈松彪　郭金平　陆建军　柯玉琴　 王月敏　叶蓉蓉　迟文超　李春英　 高静娟　谢榕榕　朱晨宇　李波　 钟永健　 (74)专利代理 机构 福州元创专利商标代理有限 公司 35100 专利代理师 林文弘　蔡学俊(51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 用于烟草缺镁营养诊断的基因标志物集及 其应用 (57)摘要 本发明公开了用于烟草缺镁营养诊断的基 因标志物集及其应用， 属于生物技术领域。 所述 基因标志物集由Nitab4.5_0002838g0120、 Nitab4 .5_0014007g0010、 Nitab4 .5_ 0025073g0010组成， 其在烟草应答缺镁胁迫中特 异性显著上调表达。 通过所述基因标志物集以及 检测该基因标志物集的试剂， 可以诊断烟草缺镁 胁迫。 因此， 本发明为建立基于基因标志的烟草 缺镁快速诊断方法奠定了基础， 具有良好的推广 价值。 权利要求书1页 说明书6页 序列表2页 附图2页 CN 114934132 A 2022.08.23 CN 114934132 A 1.一种用于烟草缺镁营养诊断的基因标志物集， 其特征在于： 所述基因标志物集由 Nitab4.5_0002838g0120、 Nit ab4.5_0014007g0010、 Nitab4.5_0025073g0010组成； 其中， Nitab4.5_0002838g0120的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示， Nitab4.5_0014007g0010的核 苷酸序列如SEQ  ID NO:2所示， N itab4.5_0 025073g0010的核苷酸序列如SEQ  ID NO:3所示。 2.如权利要求1所述的基因标志 物集在烟草缺镁营养诊断中的应用。 3.一种烟草缺镁营养诊断试剂盒， 其特征在于： 所述试剂盒包括通过RT ‑qPCR技术检测 权利要求1所述的基因标志 物集的试剂。 4.根据权利要求3所述的烟草缺镁营养诊断试剂盒， 其特征在于： 所述试剂盒包括 Nitab4.5_0002838g0120、 Nitab4.5_0014007g0010、 Nit ab4.5_0025073g0010的特异性引 物。 5.根据权利要求4所述的烟草缺镁营养诊断试剂盒， 其特征在于： 所述的Nitab4.5_ 0002838g0120、 Nitab4.5_0014007g0010、 Nitab4.5_0025073g0010的特异性引物的核苷酸 序列如下： Nitab4.5_0 002838g0120的特异性引物： RT‑02838‑F: 5ʹ‑AAGCCTGAAATGATTGGA‑3ʹ， RT‑02838‑R: 5ʹ‑AACCTTGACGAGTGAGTA ‑3ʹ； Nitab4.5_0 014007g0010的特异性引物： RT‑14007‑F: 5ʹ‑TTGGATCACAATGAGAAG‑3ʹ， RT‑14007‑R: 5ʹ‑GTAAGGCAAGTAAGAGTC‑3ʹ； Nitab4.5_0 025073g0010的特异性引物： RT‑25073‑F: 5ʹ‑CAGTGCTATA ATGAGTGTA ‑3ʹ， RT‑25073‑R: 5ʹ‑AATGATGTAG GTGGATTC‑3ʹ。 6.如权利要求3所述的烟草 缺镁营养诊断试剂盒在 烟草缺镁营养诊断中的应用。 7.一种烟草 缺镁营养诊断的方法， 其特 征在于： 包括如下步骤： 1） 采集待测烟草叶片， 提取总RNA， 反转录成cDNA； 2） 以反转录得到的cDNA为模板， 利用 权利要求5中所述的特异性引物进行RT ‑qPCR检 测， 根据基因是否上调表达判断待测烟草是否受缺镁胁迫。 8.根据权利要求7所述的烟草缺镁营养诊断的方法， 其特征在于： 若待测烟草中 Nitab4.5_0002838g0120、 Nitab4.5_0014007g0010、 Nitab4.5_00250 73g0010的表达较正 常 烟草显著上调， 则该待测烟草处于缺镁胁迫状态。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114934132 A 2用于烟草缺镁营养诊断的基因标志物集 及其应用 技术领域 [0001]本发明属于生物技术领域， 具体涉及一种用于烟草缺镁营养诊断的基因标志物集 及其应用。 背景技术 [0002]烟草 （Nicotiana  tabacum L.） 原产于南美洲， 是一种经济价值较高的作物， 在全 世界范围内广泛种植。 在我国， 烟草种植可以为农民带来可观收入。 烟草为一年生或有限多 年生茄科烟草属植物， 其生长发育过程中需要多种营养元素， 如氮、 磷、 钾、 镁、 钙、 硫、 硼等。 营养元素缺乏会严重影响烟叶产量和品质。 [0003]镁 （Mg2+） 是烟草生长所的需重 营养元素。 镁元素与植物叶绿素的合成相关， 可以促 进植物光合系统光能的转化， 提高光合速率。 缺镁会影响烟草叶绿素合成， 导致叶片叶绿素 光吸收能力下降。 缺镁还会影响烟草碳水化合物的转运和蛋白质的合成， 影响根系活力、 质 膜透性和液泡离 子通道调控等多种生理代谢 过程。 [0004]基因组学策略的应用可以更加高效地挖掘和筛选烟草应答缺镁胁迫的分子生物 标志物， 从而为建立基于生物标志的营养诊断方法提供更加有效的手段， 为构建烟草绿色 种植体系奠定基础。 基于此， 本发明开发了一种用于烟草 缺镁营养诊断的基因标志 物集及其应用。 发明内容 [0005]有鉴于此， 本发明的目的在于提供一种用于烟草缺镁营养诊断的基因标志物集及 其应用。 [0006]为实现上述目的， 本发明提供了如下 方案： 本发明首先提供了一种用于烟草缺镁营养诊断的基 因标志物集， 所述基 因标志物 集由Nitab4.5_0002838g0120、 Nitab4.5_0014007g0010、 Nitab4.5_0025073g0010组成； 其 中， Nitab4.5_0002838g0120的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示， Nitab4.5_0014007g0010的 核苷酸序列如SEQ  ID NO:2所示， Nitab4.5_0025073g0010的核苷酸序列如SEQ  ID NO:3所 示。 [0007]本发明还提供了上述 一种基因标志 物集在烟草缺镁营养诊断中的应用。 [0008]本发明还提供了一种烟草缺镁营养诊断试剂盒， 所述试剂盒包括通过RT ‑qPCR技 术检测上述的基因标志 物集的试剂。 [0009]进一步的， 上述一种烟草缺镁营养诊断试剂盒包括Nitab4.5_0002838g0120、 Nitab4.5_0 014007g0010、 Nitab4.5_0 025073g0010的特异性引物。 [0010]进一步的， 上述的Nitab4.5_0002838g0120、 Nitab4.5_0014007g0010、 Nitab4.5_ 0025073g0010的特异性引物的核苷酸序列如下： Nitab4.5_0 002838g0120的特异性引物： RT‑02838‑F: 5ʹ‑AAGCCTGAAATGATTGGA‑3ʹ，说　明　书 1/6 页 3 CN 114934132 A 3