(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221072382 2.7 (22)申请日 2022.06.23 (71)申请人 新疆农业大 学 地址 830052 新疆维吾尔自治区乌鲁 木齐 市沙依巴克区南昌路42号 (72)发明人 刘玲玲　刘武军　方超　曹行　 马海玉　陈斌　何海迎　 (74)专利代理 机构 西安鼎迈知识产权代理事务 所(普通合伙) 6126 3 专利代理师 刘喜保 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒及其应 用 (57)摘要 本发明公开了用于筛选新疆驴泌乳性状的 试剂盒及其应用， 通过选用新疆驴NUMB基因特定 SNP位点作为分子标记物， 匹配特异性引物及相 适应的扩增体系， 制备获得用于筛选新疆驴泌乳 性状的试剂盒， 通过检测能够准确筛选获得产奶 量、 以及驴乳中乳脂率、 总固体含量和尿素氮相 对较高的个体， 根据相对应的基因型进行新疆驴 优良产奶形状个体的选育， 从而加快其育种进 程， 促进驴产业的进一 步发展。 权利要求书1页 说明书6页 附图1页 CN 114990232 A 2022.09.02 CN 114990232 A 1.用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒， 其特征在于， 所述用于检测NUMB基因的SNP位点 为g.46709 914。 2.如权利要求1所述的用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒， 其特征在于， NUMB基因的 SNP位点g.46709 914等位基型因包括G G、 GT和TT。 3.如权利要求1所述的用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂 盒， 其特征在于， 所述的试剂 盒 通过以下共建体系建成获得： (1)根据新疆驴NUMB基因的SNP位 点g.46709 914， 自行 人工设计特异性引物； (2)PCR反应试剂： 2 ×KASP Mix、 上下游引物、 DNA模板和水。 4.如权利要求2所述用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂 盒， 其特征在于， 所述的特异性引 物序列如下 所示： 上游引物1： 5' ‑GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCACCTCAAGGTGTCTAATCCATAG‑3'； 上游引物 2： 5'‑GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCAC CTCAAGGTGTCTAATCCATAT‑3'； 下游引物1： 5' ‑TGAGGAAGTGATAT TTGAGTAGAGC ‑3'。 5.如权利要求1所述的用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂 盒的应用， 其特征在于， 所述试 剂盒的应用中， 通过检测方法体现， 具体包括如下步骤： (1)利用装有枸橼酸钠抗凝剂的采血管， 活体采集新疆驴颈静脉血5ml， ‑20℃保存； 提 取基因组DNA，‑20℃保存待用； (2)采用步骤(1)总共提取获得的新疆驴基因组DNA进行， NUMB基因PCR扩增， 根据设计 的引物， 利用权利要求 1或2任意一项提供的试剂盒特异性扩增NUMB基因； PCR反应体系为， 2 ×KASP Mix 5 μL， 100 μM 上游引物10.015 μL， 100 μM 上游引物2 0.015 μL， 100 μM下游引物 0.04 μ L上下游引物各0.07μL， 基因组DNA2 μL， ddH2O补充至10 μL； 反应条件为， 94℃起始步骤， 1个 循环10mi n； 94℃10个 循环20s； 61℃45s； 94℃3 5个循环20s； 55℃20s； (3)基于步骤(2)中扩增获得的产物进行KASP 分型： 基于引物末端碱基的特异匹配来对 SNP分型， 利用Douglas平台， 对SNP进行双等 位基因判断， 从而 进行基因分型。 6.如权利要求2或5任意一项所述的用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒在产奶量高的 新疆驴的选 育中的应用。 7.如权利要求2或5任意一项所述的用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂 盒在乳脂率、 总固 体含量和尿素氮相对较高的新疆驴的选 育中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114990232 A 2用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒及其应用 技术领域 [0001]发明涉及动物遗传选育 的鉴定方法， 具体 的， 本发明涉及用于筛选新疆驴泌乳性 状的试剂盒及其应用的技 术领域。 背景技术 [0002]驴奶是一种低脂肪、 低胆固醇、 高钙、 富硒、 美容、 抗衰老的天然乳品， 驴奶中各营 养成分的比例最为接近人乳， 被称为最接近母乳的乳中珍品， 其脂肪含量比牛奶略低， 胆固 醇的含量仅为牛奶的15％， 维生素C的含量高， 为牛奶的4.75倍， 驴奶中含氨基酸齐全， 其中 必须氨基酸含量高， 占蛋白质总量的46.7％， 远高于牛奶42.2％和人乳38.1％的含量， 此 外， 驴奶中微量元素含量充足， 钙含量丰富， 尤其是硒的含量较高， 为牛奶的5.2倍， 与我国 目前 《富硒食品含硒量标准》 相比， 属于富硒食品， 所以驴奶具有强身健体、 延年益寿、 治疗 疾病等众多功效。 [0003]但是， 目前未有乳用驴的专门化品种， 且生产用母驴的个体乳产量较低， 远低于牛 奶产量， 甚至低于驴奶产量， 无法满足人们对驴奶的乳制品的需要。 新疆驴是一种 具有肉、 皮、 药、 乳、 役等多种 经济用途的畜种。 选育具有高产奶性能的乳用驴既可弥补驴奶的市场 空缺， 又可显著提升新疆驴的饲用价 值及经济价 值， 是促进驴产业发展的重要工作。 发明内容 [0004]针对现有技术中未见报道关于新疆驴泌乳性能筛选准确有效的分子标记以及未 见专门针对NUMB基因在新疆驴泌乳性状筛选中的SNP标记研究的技术现状， 本发明旨在提 供了含NUMB基因用于提高新疆驴泌乳性状的检测试剂盒， 利用新疆驴血液样本作为测试材 料， 利用本发明检测试剂盒通过检测， 用于选育提高新疆驴泌乳性状为提高驴产奶量的选 育中， 期望 选择与产奶 性状密切相关的DNA标记， 从而加快育种进程。 [0005]本发明提供用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒， 所述试剂盒中含有用于检测NUMB 基因的SNP位 点为g.46709 914。 [0006]本发明提供用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒， 所述试剂盒中NUMB基因的SNP位 点g.46709 914等位基型因包括G G、 GT和TT。 [0007]本发明提供用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒， 所述的试剂盒通过以下共建体系 建成获得： [0008](1)根据新疆驴NUMB基因的SNP位 点g.46709 914， 自行 人工设计特异性引物； [0009](2)PCR反应试剂： 2 ×KASP Mix、 上下游引物、 DNA模板和水。 [0010]所述的特异性引物序列如下 所示： [0011]上游引物1： 5' ‑GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCACCTCAAGGTGTCTAATCCATAG‑3'； [0012]上游引物 2： 5'‑GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCAC CTCAAGGTGTCTAATCCATAT‑3'； [0013]下游引物1： 5' ‑TGAGGAAGTGATAT TTGAGTAGAGC ‑3'。 [0014]本发明还提供用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒的应用， 所述试剂盒的应用中，说　明　书 1/6 页 3 CN 114990232 A 3