(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210669862.8 (22)申请日 2022.06.14 (71)申请人 山东安珀生物科技有限公司 地址 250000 山东省济南市天桥区舜兴 路 988号济南新材料产业园3号楼 2楼 (72)发明人 陈旭　 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 用于荧光定量PCR检测幽门螺杆菌点突变的 桥联引物探 针组合、 试剂盒和检测方法 (57)摘要 本发明公开了一种用于荧光定量PCR检测幽 门螺杆菌点突变的桥联引物探针组合、 试剂盒和 检测方法， 本发明提供的检测方法简化了多重 PCR体系的优化过程， 克服了传统的细菌耐药性 的E‑Test实验研究方法分离和培养菌株的周期 长、 培养难度大的缺陷， 本发明提供的方法检测 时间两个小时左右， 大大提升了检测 效率； 与普 通多重PCR相比有较高的敏感性， 灵敏度可测达 到500copies/ml； 特异性强， 降低了引 物的非特 异性扩增。 权利要求书2页 说明书5页 序列表1页 附图2页 CN 114836555 A 2022.08.02 CN 114836555 A 1.一种用于荧光定量PCR检测幽门螺杆菌点突变的桥联引物探针组合， 其特征在于， 包 括： 如SEQ ID No.1所示的上游引物HP ‑A2142G‑DPOF的碱基序列GA之间插入I碱基， 其碱基 序列为： CTAC CCGCGGCAAGACGGG(I)nAAGACCC； 如SEQ ID No.2所示的下游引物HP ‑A2142G‑DPOR的碱基序列A G之间插入I碱基， 其碱基 序列为:TACT TCAA(I)nAGCCTCCCACCTAT； 如SEQ ID No.3所示探针HP ‑A2142G‑DPOP； 其中， I表示次黄嘌呤， n 为次黄嘌呤 的数量， 选自数量 为3‑8个。 2.根据权利要求1所述的一种用于荧光定量PCR检测幽门螺杆菌点突变的桥联引物探 针组合， 其特 征在于， 所述上游引物和下游引物中分别插 入5个或6个I碱基。 3.根据权利要求1或2任一项所述的一种用于荧光定量PCR检测幽门螺杆菌点突变的桥 联引物探针组合在检测幽门螺杆菌点 突变中的应用。 4.一种用于荧光定量PCR检测幽门螺杆菌点突变的试剂 盒， 其特征在于， 包括根据权利 要求1所述的用于荧 光定量PCR检测幽门螺杆菌点 突变的桥联引物探针组合。 5.根据权利要求4所述的一种用于荧光定量PCR检测幽门螺杆菌点突变的试剂 盒， 其特 征在于， 所述试剂盒还包括反应液、 酶混合液、 阳性对照、 阴性对照； 所述反应液包括dNTPs、 Mg2+、 Tris‑HCl， 所述酶混合液包括反转录酶、 Taq  DNA聚合酶。 6.根据权利要求4或5任一项所述的一种用于荧光定量PCR检测幽门螺杆菌点突变的试 剂盒在检测幽门螺杆菌点 突变中的应用。 7.一种幽门螺杆菌23S  rRNA基因点 突变A2142G检测方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 步骤(1)， 提取待测样品中的核酸； 步骤(2)， 以步骤(1)中提取的核酸 为模板， 进行荧 光定量PCR扩增反应； 步骤(3)， 根据FAM通道扩增曲线和CT值进行 结果分析。 8.根据权利要求7所述的一种幽门螺杆菌23S  rRNA基因点突变A2142G检测方法， 其特 征在于， 步骤(2)中PCR反应 体系以25 μl计为： 9.根据权利要求8所述的一种幽门螺杆菌23S  rRNA基因点突变A2142G检测方法， 其特 征在于， 步骤(2)中荧光定量PCR反应条件为： 94℃5分钟； 94℃15秒， 60℃30秒， 采集FAM通道 荧光， 共40个 循环。 10.根据权利 要求9所述的一种幽门螺杆菌23S  rRNA基因点突变A2142G检测方法， 其特 征在于， 步骤(3)中， 检测结果的判断标准为： CT值≤38且具有S型扩增曲线， 则为幽门螺杆权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114836555 A 2菌23S rRNA基因A2142G点突变阳性， CT值＞38或无CT值则为幽门螺杆菌23S  rRNA基因 A2142G点突变阴性。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114836555 A 3