(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211083107.8 (22)申请日 2022.09.06 (71)申请人 中华人民共和国大连海关 地址 116007 辽宁省大连市中山区长江东 路60号 (72)发明人 杨爱馥　万超　张高华　姜丽　 梁冰　 (74)专利代理 机构 北京盛凡佳华专利代理事务 所(普通合伙) 11947 专利代理师 李冲 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 用于豌豆源性 成分实时荧光PCR检测的成套 试剂及检测方法 (57)摘要 本发明公开了用于豌豆源性成分实时荧光 PCR检测的成套试剂及检测方法， 所述成套试剂 包括引物对及探针， 所述引物对的上游引物为： 5’ ‑CTGGACGAGTCGCGTACTAGATC ‑3’， 所述引物对 的 下 游 引 物 为 ： 5 ’ ‑ TATAGGCACTTGGGTGTACTTTTAC ‑3’， 所述探针为： 5’ ‑ATGCAATGCAGT CGGGTTTCGACGA  CATCTT‑3’， 其 中在探针的3 ’端连接有一个荧光淬灭基团 TAMRA， 在探针的5 ’端连接有一个荧光报告基团 FAM； 所述成套试剂用于检测待测样品中是否含 有豌豆成分； 本发明所述 成套试剂用于豌豆源性 成分的检测， 具有特异性强、 灵敏度高的优点， 同 时具有较好的重复性与稳定性。 权利要求书1页 说明书4页 附图2页 CN 115369185 A 2022.11.22 CN 115369185 A 1.用于豌豆源性成分实时荧光PCR检测的成套试剂， 其特征在于， 所述成套试剂包括引 物对及探针， 所述引物对的上游引物为： 5 ’ ‑CTGGACGAGTCGCGTACTAGATC ‑3’， 所述引物对的 下游引物为： 5 ’ ‑TATAGGCACTTGGGTGTACTTTTAC ‑3’， 所述探针为： 5 ’ ‑ATGCAATGCAGTCGGGT   TTCGACGACATCTT ‑3’， 其中在探针的3 ’端连接有一个荧光淬灭基团TAMRA， 在探针的5 ’端连 接有一个荧 光报告基团FAM 。 2.根据权利要求1所述的用于豌豆源性成分实时荧光PCR检测 的成套试剂， 其特征在 于， 所述成套试剂用于检测待测样品中是否含有豌豆源性成分。 3.一种用于豌豆源性成分实时荧光PCR检测的检测方法， 其特征在于： 所述检测方法以 待测样品的基因组DNA为模板， 采用权利要求1所述成套试剂进行实时荧光PCR并检测荧光 信号， 如结果显示阳性扩增曲线， 则待测样品含有或疑似含有豌豆源性成分； 如结果不显示 阳性扩增曲线， 则待测样品不含有或疑似不含有豌豆源性成分。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115369185 A 2用于豌豆源性成分实时荧光PCR检测的成套试剂及检测方 法 技术领域 [0001]本发明涉及生物技术领域， 具体是指用于豌豆源性成分实时荧光PCR检测的成套 试剂及检测方法。 背景技术 [0002]随着人们对于健康的重视， 以植物基肉制品为代表的新一代的食品因具有健康、 可持续的内涵， 将成为未来全球食品行业 发展的主要 方向之一。 植物基食品不含胆固醇， 又 能满足人体对蛋白质的需求， 尤其适用于乳糖不耐受人群和消 化障碍人群。 因为植物基食 品强调的是蛋白质的替代， 所以蛋白质含量高的豆类是植物基食品良好的蛋白质来源。 在 传统的植物蛋白消费中， 大豆蛋白独占鳌头， 随着对植物基新原料的不断开拓， 豌豆蛋白的 优势逐渐凸显， 成为 植物基原料新宠； [0003]首先， 豌豆蛋白氨基酸配比均衡， 不仅含有成人所必需的全部8种氨基酸， 还含有 儿童所额外需要一种组氨酸， 尤其是人体第一限制性氨基酸——赖氨酸含量也很高， 营养 价值高， 吸收率能达到98％以上。 此外， 大豆蛋白容易导致人体的过敏反应， 而豌豆蛋白不 含致敏源， 不含乳糖、 谷蛋白和麸质， 无抗生素残留， 不含转基因成分， 安全性更高， 因此， 豌 豆蛋白是替代动物蛋白的首选植物蛋白； [0004]但是目前尚无豌豆源性成分检测标准和检测方法， 市场上销售的豌豆蛋白及 其制 品鱼龙混杂、 真假难辨， 因此急 需开发快速、 灵敏、 精 准的豌豆源性成分检测方法， 以保护消 费者的权益， 并为豌豆蛋白的进出口监管提供技 术支撑。 发明内容 [0005]本发明要解决的技术问题是克服上述技术的缺陷， 提供用于豌豆源性成分实时荧 光PCR检测的成套试剂及检测方法。 [0006]为解决上述技术问题， 本发明提供的技术方案为用于豌豆源性成分实时荧光PCR 检测的成套试剂， 所述成套试剂包括引物对及探针， 所述引物对的上游引物为： 5 ’ ‑ C T G G A C G A G T C G C G T A C T A G A T C ‑3’， 所 述 引 物 对 的 下 游 引 物 为 ： 5 ’‑ TATAGGCACTTGGGTGTACTTTTAC ‑3’， 所述探针为： 5 ’ ‑ATGCAATGCAGTCGGGTTTCGACGACATCTT ‑ 3’， 其中在探针的3 ’端连接有一个荧光淬灭基团TAMRA， 在探针的5 ’端连接有一个荧光报告 基团FAM。 [0007]进一步地， 所述成套试剂用于检测待测样品中是否含有豌豆源性成分。 [0008]本发明还提供一种用于豌豆源性成分实时荧光PCR检测的检测方法， 所述检测方 法以待测样品的基因组DNA为模板， 采用所述成套试剂进行实时荧光PCR并检测荧光信号， 如结果显示阳性扩增曲线， 则待测样品含有或疑似含有豌豆源性成分； 如结果不显示阳性 扩增曲线， 则待测样品不含有或疑似不含有豌豆源性成分。 [0009]本发明与现有技 术相比的优点在于： [0010]1)特异性强： 以豌豆lectin基因为检测靶标， 建立了豌豆 成分实时荧光PC R检测方说　明　书 1/4 页 3 CN 115369185 A 3