(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210569114.2 (22)申请日 2022.05.24 (71)申请人 华中农业大 学 地址 430070 湖北省武汉市洪山区狮子山 街1号 (72)发明人 王卫民　沈宇东　郭安静　 (74)专利代理 机构 武汉开元知识产权代理有限 公司 42104 专利代理师 冯超 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 用于鉴别彭泽鲫自交子代与鳡诱导异源四 倍体鲫鲤 雌核发育 子代的分子标记及其试剂盒 (57)摘要 本发明公开了一种用于鉴别彭泽鲫自交子 代与鳡诱导异源四倍体鲫鲤雌核发育子代的分 子标记及其试剂盒， 本发明基于基因组、 转录组 数据的比较研究， 通过序列相似性， 同源基因组 比较， 鉴定开发出了具有鳡与兴国红鲤的分子标 记和特异性引物， 可有效用于彭泽鲫自交子代和 鳡诱导异源四倍体鲫鲤雌核发育子代的鉴别； 该 试剂盒具有操作简便， 实验步骤少 、 成本低， 且对 鱼体伤害最小的特点， 能广泛应用在生产实践 中， 该试剂盒能有效鉴别彭泽鲫自交子代和鳡诱 导异源四倍体鲫鲤 雌核发育 子代。 权利要求书2页 说明书7页 序列表2页 附图1页 CN 114921566 A 2022.08.19 CN 114921566 A 1.一种用于鉴别彭泽鲫自交子代与鳡诱导异源四倍体鲫鲤雌核发育子代的分子标记 OG‑10， 其特征在于： 所述分子标记O G‑10的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示。 2.一种鳡与鲤共有的DNA片段， 其特 征在于： 其核苷酸序列如SEQ  ID NO:4所示。 3.一种用于鉴别 彭泽鲫自交子代和鳡诱导异源四倍体鲫鲤雌核发育子代的引物对， 其 特征在于： 所述引物对为： 正向引物F： 5 ’ ‑ACAGTAATCAACAGGACCAATGGA‑3’； 反向引物R： 5 ’ ‑TTCTTTGTTTTCTGGTCCAAGCTC‑3’。 4.一种用于彭泽鲫自交子代和鳡诱导异源四倍体鲫鲤雌核发育子代的试剂盒， 其特征 在于： 所述试剂盒包括权利要求1所述的引物对。 5.根据权利要求3所述试剂盒， 其特征在于： 所述试剂盒还包括细胞裂解液、 蛋白酶K、 7.5M醋酸铵、 异丙醇、 70％乙醇、 无 水乙醇、 2 ×Premix Taq、 ddH2O。 6.根据权利要求4所述试剂盒， 其特征在于： 所述细胞裂解液的成分为： Tris ‑HCL  100mM， pH 8.0； EDTA 50mM， pH 8.0； SDS 1％， pH 8.0； NaCl 125mM。 7.一种利用权利要求3所述试剂 盒鉴别彭泽鲫自交子代和鳡诱导异源四倍体鲫鲤雌核 发育子代的方法， 其特 征在于： 包括以下步骤： 1)待检测样品提取DNA 2)以提取DNA为模板， 采用引物对进行PCR； 得到PCR产物； 3)PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测： 若电泳条带中含有327bp的条带时， 该待检测样品为鳡诱导异源四倍体鲫鲤雌核发育 子代； 若电泳条 带中无条带时， 该待检测样品为彭泽鲫自交子代。 8.根据权利要求6所述的方法， 其特 征在于： 所述 步骤1)中， DNA提取 方法如下： 取0.02g脱酒精后的待检测样品 的组织， 置于2mL  EP管中， 加入600 μL组织裂解液， 将样 品剪碎处理并加入15 μL  10mg/mL的蛋 白酶K混匀， 65℃水浴2 ‑4h， 定时摇匀， 置于冰上冷却 至室温， 每管加200 μL醋酸铵混匀， 冰上放置5min， 4℃  12000r/m离心10min后， 取上清至EP 管中， 重复该过程一次， 加入600 μL异丙醇， 冰上静置1 ‑2min， 4℃  12000r/m离心10min， 弃上 清， 加入1mL  70％乙醇洗涤DNA， 4℃  12000r/m离心2min， 弃上清， 加入1mL无水乙醇洗涤 DNA， 4℃ 12000r/m离心 2min， 弃上清； 自然干燥15mi n， 加入适 量TE溶解DNA沉淀 。 9.根据权利要求6所述的方法， 其特征在于： 包括以下步骤： 所述步骤2)中， PCR扩增体 系为： PCR扩增程序为： 94℃持续3min； 94℃持续45s， 56℃持续35s， 72℃持续30s， 30个循环；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114921566 A 272℃持续10mi n； 冷却至4℃。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114921566 A 3