(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211175973.X (22)申请日 2022.09.26 (71)申请人 北京农学院 地址 102200 北京市昌平区回龙观镇北农 路7号 (72)发明人 侯晓林　赵振华　刘凤华　王蕾　 周双海　李焕荣　 (74)专利代理 机构 东莞市卓易专利代理事务所 (普通合伙) 44777 专利代理师 谢昭君 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12Q 1/6837(2018.01)C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 用于鉴别诊断猪肠道冠状病毒引起腹泻性 病原基因引物组合物及应用 (57)摘要 本发明公开了一种用于鉴别诊断猪冠状病 毒性腹泻病原的引物组和物及其应用， 属于生物 技术领域。 包括以下引物： 外引物F3和B3， 内引物 FIP和BIP， 环引物LF和LB。 本发明可用于鉴别诊 断引起猪腹泻的冠状病毒病原 基因， 还能区分是 哪种冠状病毒。 本发明提供的引物组合物检测引 起猪腹泻的冠状病毒基因具有灵敏度好、 特异性 高、 用时短、 稳定性高等特点。 权利要求书2页 说明书7页 附图5页 CN 115369187 A 2022.11.22 CN 115369187 A 1.一种用于检测引起猪腹泻的肠道冠状病毒基因的引物组合物， 所述的引物组合物用 于检测猪流行性腹泻病毒M基因、 猪传染性胃肠炎病毒N基因、 猪德尔塔冠状病毒N基因、 猪 急性腹泻综合症冠状病毒NS3基因、 猪 轮状病毒VP7基因的引物； 所述用于检测猪流行性腹泻病毒M基因的引物组合物， 其特 征在于， 包括以下引物： F3引物为SEQ  ID No.1所示的核苷酸序列； B3引物为SEQ  ID No.2所示的核苷酸序列； FIP引物为SEQ  ID No.3所示的核苷酸序列； BIP引物为SEQ  ID No.4所示的核苷酸序列； LF引物为SEQ  ID No.5所示的核苷酸序列； LB引物为SEQ  ID No.6所示的核苷酸序列； 所述用于检测猪传染性胃肠炎病毒N基因的引物组合物， 包括以下引物： F3引物为SEQ  ID No.7所示的核苷酸序列； B3引物为SEQ  ID No.8所示的核苷酸序列； FIP引物为SEQ  ID No.9所示的核苷酸序列； BIP引物为SEQ  ID No.10所示的核苷酸序列； LF引物为SEQ  ID No.11所示的核苷酸序列； LB引物为SEQ  ID No.12所示的核苷酸序列； 所述用于检测猪德尔塔冠状病毒N基因的引物组合物， 包括以下引物： F3引物为SEQ  ID No.13所示的核苷酸序列； B3引物为SEQ  ID No.14所示的核苷酸序列； FIP引物为SEQ  ID No.15所示的核苷酸序列； BIP引物为SEQ  ID No.16所示的核苷酸序列； 所述用于检测猪急性腹泻综合症冠状病毒NS3基因引物组合物， 包括以下引物： F3引物为SEQ  ID No.17所示的核苷酸序列； B3引物为SEQ  ID No.18所示的核苷酸序列； FIP引物为SEQ  ID No.19所示的核苷酸序列； BIP引物为SEQ  ID No.20所示的核苷酸序列； LF引物为SEQ  ID No.21所示的核苷酸序列； LB引物为SEQ  ID No.22所示的核苷酸序列； 所述用于检测猪 轮状病毒VP7基因的引物组合物， 包括以下引物： F3引物为SEQ  ID No.23所示的核苷酸序列； B3引物为SEQ  ID No.24所示的核苷酸序列； FIP引物为SEQ  ID No.25所示的核苷酸序列； BIP引物为SEQ  ID No.26所示的核苷酸序列； LF引物为SEQ  ID No.27所示的核苷酸序列； LB引物为SEQ  ID No.28所示的核苷酸序列。 2.根据权利要求1所述的一种用于检测引起猪腹泻的肠道冠状病毒基因的引物组合 物， 其特征在于， 所述的组合物包括将F3、 B3、 FIP、 BIP、 LF和LB引物序列经过一个或几个核 苷酸的取代和/或缺失和/或添加后具有与所描述核苷酸序列具有相同功能的DNA分子 。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115369187 A 23.根据权利要求2所述的一种用于检测引起猪腹泻的肠道冠状病毒基因的引物组合 物， 其特征在于， 在环介导等温扩增方法中用以检测猪流行性腹泻病毒M基因、 猪传染性胃 肠炎病毒N基因、 猪德尔塔冠状病毒N基因、 猪急性腹泻综合症冠状病毒NS3基因、 猪轮状病 毒VP7基因。 4.根据权利要求3所述的一种用于检测引起猪腹泻的肠道冠状病毒基因的引物组合 物， 其特征在于， 所述的引物组合物在环介导等温扩增方法中， 引物组合物F3、 B3、 FIP、 BIP、 LF和LB的摩尔浓度比为1： 1： 4 ‑16： 4‑16： 2‑8： 2‑8。 5.根据权利要求3所述的一种用于检测引起猪腹泻的肠道冠状病毒基因的引物组合 物， 其特征在于， 所述的环介导 等温扩增反应条件为6 0‑65℃恒温6 0min。 6.根据权利要求1所述的一种用于检测引起猪腹泻的肠道冠状病毒基因的引物组合 物， 其特征在于， 在制备检测 猪流行性腹泻病毒M基因、 猪传染性胃肠炎病毒N基因、 猪德尔 塔冠状病毒N基因、 猪急性腹泻综合症冠状病毒NS3基因、 猪轮状病毒VP7基因试剂盒和基因 芯片中的应用。 7.一种权利要求1所述的引物 组合物的应用， 其特征在于， 在用于引起猪腹泻的肠道冠 状病毒基因检测的试剂盒 或芯片中的应用。 8.根据权利要求7 所述的应用， 其特 征在于， 所述的试剂盒和芯片的检测步骤 包括： 1)提取待测病毒或其 他类型待检样品中基因 组RNA； 2)以步骤(1)提取的基因为模版， 采用 上述引物组合物进行对猪流行性腹泻病毒M基 因、 猪传染性 胃肠炎病毒N基因、 猪德尔塔冠状病毒N基因、 猪急性腹泻综合症冠状病毒NS3 基因、 猪轮状病毒VP7基因RNA反转录和环介导 等温扩增。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115369187 A 3