(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210748983.1 (22)申请日 2022.06.28 (71)申请人 黔南布依族苗族自治州检验检测院 地址 558000 贵州省黔 南布依族苗族自治 州都匀市匀东 镇长安路9号 (72)发明人 任永超　宋云　潘鸿广　李炎琪　 陈贵　许倩　卿云光　任永奇　 (74)专利代理 机构 北京市中伦律师事务所 11410 专利代理师 信建 (51)Int.Cl. C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) (54)发明名称 用于鉴定夜寒苏的引物探针组合产品及其 应用 (57)摘要 本发明涉及植物的分子生物学鉴定技术领 域， 具体而言， 涉及用于鉴定夜寒苏的引物探针 组合产品及其应用。 本发明通过分析苗药夜寒苏 ITS2基因， 设立刺夜寒苏特异性引物探针， 拟建 立一种准确、 快速、 简便可检测苗药夜寒苏植物 的实时荧光PCR检测方法， 可为苗药夜寒苏种质 资源鉴定及质量标准的制定供一定依据。 权利要求书1页 说明书8页 序列表1页 附图2页 CN 115074359 A 2022.09.20 CN 115074359 A 1.引物探针组合产品， 包括核苷酸序列为SEQ  ID NO： 1～2所示的引物对和SEQ  ID NO： 3所示的探针。 2.根据权利要求1所述的组合产品， 所述探针标记有信号物质。 3.根据权利要求2所述的组合产品， 所述探针为自身淬灭探针。 4.根据权利要求3所述的组合产品， 所述探针的荧光发射基团独立地选自AMCA、 Pacific Blue、 Atto  425、 BODIPY  FL、 FAM、 Alexa  Fluor 488、 TET、 JOE、 Yakima  Yellow、 VIC、 HEX、 Quasar  570、 Cy3、 NED、 TAMRA、 ROX、 Aqua  Phluor593、 Texas  Red、 Atto  590、 Cy5、 Quasar 670、 Cy5.5以及Cy5.5中的任一种。 5.根据权利要求4所述的组合产品， 所述探针的淬灭基团选自BHQ1、 BHQ2、 BHQ3、 Dabcyl、 E clipse以及MGB中的任一种。 6.含有权利要求1～5任一项所述组合产品的试剂盒。 7.根据权利要求6所述的试剂盒， 其还包含DNA提取试剂、 扩增缓冲液、 dNTP、 Mg2+、 DNA聚 合酶、 阳性质控品、 阴性质控品、 防腐剂以及水中的至少一种。 8.鉴定夜寒苏源性成分的方法， 包括： 获取怀疑含有夜寒苏源性成分的待检测样品中的DNA； 以所述DNA为模板， 使用权利 要求1～5任一项所述组合产品， 或权利要求6或7所述的试 剂盒进行扩增， 若发生特异性扩增， 则表明含有夜寒苏源性成分。 9.根据权利要求8所述的方法， 所述待检测样品是 经处理的植物样品。 10.根据权利要求9所述的方法， 所述待检测样品是保健品、 草药、 植物提取物或植物粉 末。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115074359 A 2用于鉴定夜寒苏的引物探针组合产品及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及植物的分子生物学鉴定技术领域， 具体而言， 涉及用于鉴定夜寒苏的 引物探针组合产品及其应用。 背景技术 [0002]姜花属(姜科)又被称为野姜花， 约有87个种类， 主要 分布在中国、 印度、 和南亚。 姜 花属植物因其在造纸业、 观赏植物、 香水、 化妆品、 医药和食品方面的普遍使用而被广泛栽 培。 目前姜花属植物 也被作为一种传统中药材用于治疗胃病、 流行性感冒、 支气管炎、 腹泻、 哮喘、 恶心呕吐、 毒蛇咬伤和利什曼病。 它富含的挥发油成分也被表明含有抗菌、 抗氧化、 抗 细胞毒性、 抗乙酰胆碱酯酶、 抗炎性、 治疗糖尿病 、 镇痛、 保肝和杀 虫等多种生物活性。 [0003]夜寒苏(Rhizoma  hedychii)取自姜花属植物 姜花(Hedychium  coronarium Koen) 和黄姜花(Hedychium  flavum Roxb.)根茎的多来源药物， 常见于我国西南地区， 在贵州黔 东南、 黔南、 贵阳、 遵义等地区均有分布。 夜寒苏性温、 味微苦辛、 无毒， 具有补肾虚、 祛风除 湿、 温中散寒、 解表发汗的功效， 贵州苗族民间早于20世纪70年代 就将该药多用于治疗消化 不良、 胃气虚弱、 体弱自汗、 风湿筋骨疼痛、 头痛身痛、 感冒、 寒湿白带、 跌打损伤等症状。 现 有研究表明夜寒苏挥发油的研究表明其主要含α －蒎烯、 β －蒎烯、 二羟丙茶碱E、 E ‑橙花叔 醇1， 8－桉油素、 芳樟醇等物质， 这些物质是具有抗菌、 抗炎、 抗肿瘤等的重要生物活性物 质。 尽管夜寒苏已作为传统苗药应用于各种疾病治疗， 然而目前尚未被 《中 国药典》 《地方标 准》 所收录， 没有明确的质量控制标准。 夜寒苏外形酷似食用生姜， 对夜寒苏 的生物性鉴别 主要集中在性状鉴别、 显微鉴别及挥发油等化学成分鉴别中， 然而传统鉴别 分析方法都存 在一定局限性。 因此， 找到一种 快速高效的鉴别分析方法在夜寒苏 的种质资源鉴别中仍然 具有很大的潜力。 [0004]随着分子生物学的快速发展， 分子生物分析技术因其灵敏度高、 快速、 准确的优 势， 在植物育种、 生物分类学研究、 种质资源保护、 种群遗传图谱构建和系统发育分析方面 发挥了重要作用。 但现有技 术中还未有行之有效的鉴别夜寒苏的方法。 [0005]有鉴于此， 特提出本发明。 发明内容 [0006]本发明涉及一种引物探针组合产品， 包括核苷酸序列为SEQ  ID NO： 1～2所示的引 物对和SEQ  ID NO： 3所示的探针。 [0007]本发明还涉及一种含有如上 所述组合产品的试剂盒。 [0008]本发明还涉及一种鉴定夜寒苏源性成分的方法， 包括： [0009]获取怀疑含有夜寒苏源性成分的待检测样品中的DNA； [0010]以所述DNA为模板， 使用如上所述组合产品， 或如上所述的试剂盒进行扩增， 若发 生特异性扩增， 则表明含有夜寒苏源性成分。 [0011]本发明通过分析苗药夜寒苏ITS2基因， 设立刺夜寒苏特异性引物探针， 拟建立一说　明　书 1/8 页 3 CN 115074359 A 3