(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210573570.4 (22)申请日 2022.05.25 (71)申请人 广西壮族自治区兽医研究所 地址 530004 广西壮 族自治区南宁市友爱 北路51号 (72)发明人 谢芝勋　王盛　万丽军　任红玉　 谢丽基　谢志勤　邓显文　范晴　 罗思思　张艳芳　黄娇玲　曾婷婷　 张民秀　 (74)专利代理 机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 专利代理师 白艳 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6851(2018.01)C12N 15/11(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 禽呼肠孤病毒TaqMan MGB探针实时荧光定 量PCR检测试剂盒及其应用 (57)摘要 本发明公开了禽呼肠孤病毒TaqMan  MGB探 针实时荧光定量PCR检测试剂盒及其应用。 本发 明提供了引物探针组， 由引物1、 引物2和探针组 成； 所述引物1的核苷酸序列为序列1； 所述引物2 的核苷酸序列为序列2； 所述探针的核苷酸序列 为序列3。 本发明利用TaqMan  MGB探针技术， 建立 一种特异性检测ARV病毒的实时荧光定量PCR技 术， 成功运用于ARV的快速 检测诊断。 权利要求书2页 说明书6页 序列表2页 附图2页 CN 114807446 A 2022.07.29 CN 114807446 A 1.引物探针组， 由引物1、 引物 2和探针组成； 所述引物1的核苷酸序列为序列1或序列1中至少一个经过一个或几个核苷酸的取代 和/或缺失和/或添加后所 得的与原序列功能相同的序列； 所述引物2的核苷酸序列为序列2或序列2中至少一个经过一个或几个核苷酸的取代 和/或缺失和/或添加后所 得的与原序列功能相同的序列； 所述探针的核苷酸序列为序列3或序列3 中至少一个经过一个或几个核苷酸的取代和/ 或缺失和/或添加后所 得的与原序列功能相同的序列。 2.根据权利要求1所述的引物探针组， 其特 征在于： 所述探针的5 ’端和3’端分别标记FAM基团和MGB基团。 3.根据权利要求1或2所述的引物探针组， 其特 征在于： 所述引物1、 所述引物 2和所述探针的摩尔比为1： 1： 1。 4.含有权利要求1 ‑3中任一所述引物探针组的PCR试剂。 5.根据权利要求 4所述的PCR试剂， 其特 征在于： 所述引物1、 引物 2和探针在PCR试剂中的浓度均为0.5 μmo l/L。 6.权利要求1 ‑3中任一所述引物探针组或权利要求4或5所述的PCR试剂在制备试剂盒 中的应用； 所述试剂盒的用途为如下(d1)或(d2)或(d3)： (d1)鉴别或辅助鉴别禽呼肠孤病毒； (d2)鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为 禽呼肠孤病毒； (d3)鉴定或辅助鉴定待测样本是否感染禽呼肠孤病毒。 7.一种试剂盒， 其包括权利要求1 ‑3中任一所述引物探针组或权利 要求4或5所述的PCR 试剂； 所述试剂盒的用途为如下(d1)或(d2)或(d3)： (d1)鉴别或辅助鉴别禽呼肠孤病毒； (d2)鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为 禽呼肠孤病毒； (d3)鉴定或辅助鉴定待测样本是否感染禽呼肠孤病毒。 8.权利要求7所述试剂 盒的制备方法， 包括将权利要求1 ‑3中任一所述引物探针组中各 物质单独包 装的步骤。 9.一种鉴别或辅助鉴别、 鉴定或辅助鉴定待测病毒为禽呼肠孤病毒的方法， 包括如下 步骤： (1)提取待测病毒的核酸； (2)以所述核酸为模板， 采用权利要求4或5所述的PCR试剂进行RT ‑PCR扩增， 检测扩增 产物； 若所述扩增产物呈S曲线， 则待测病毒为或候选为禽呼肠孤病毒； 反之， 则不为或候选 不为； 或， 一种鉴定或辅助鉴定待测样本是否感染禽呼肠孤病毒的方法， 包括如下步骤： (1)提取待测病毒的核酸； (2)以所述核酸为模板， 采用权利要求4或5所述的PCR试剂进行RT ‑PCR扩增， 检测扩增 产物； 若所述扩增产物呈S曲线， 则待测样本感染或候选感染禽呼肠孤病毒； 反之， 则不感染权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114807446 A 2或候选不感染。 10.权利要求1 ‑3中任一所述引物探针组或权利要求4或5所述的PCR试剂或权利要求7 所述的试剂盒在 如下任一中的应用： 1)鉴别或辅助鉴别禽呼肠孤病毒； 2)鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为 禽呼肠孤病毒； 3)鉴定或辅助鉴定待 待测样本是否感染禽呼肠孤病毒。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114807446 A 3