(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210832154.1 (22)申请日 2022.07.15 (71)申请人 纳昂达 （南京） 生物科技有限公司 地址 210031 江苏省南京市江北新区华康 路142号南京生物医药谷加速器三期 A01栋南侧3 -4层 (72)发明人 胡玉刚　曲燕　章明晔　蒋才　 汪彪　吴强　 (74)专利代理 机构 北京康信知识产权代理有限 责任公司 1 1240 专利代理师 金田蕴 (51)Int.Cl. C12Q 1/6806(2018.01) C12Q 1/6869(2018.01) C40B 50/06(2006.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 质控双端唯一标签接头合成串扰的方法及 装置 (57)摘要 本发明公开了一种质控双端唯一标签接头 合成串扰的方法及装置。 该方法包括： 包Lane测 序： 等量的超声打断基因组DNA构建文库， 等比例 混合N个文库后进行包lane测序， 测序后分析正 常双端标签组合和异常双端标签组合占比； 和/ 或跨平台混合测序： 等量的超声打断基因组DNA 用第一测序平台的双端唯一标签接头构建文库， 等比例混合N个文库再用第二测序平台的双端唯 一标签接头建库； 在第二测序平台进行测序获得 测序数据； 按照标签序列拆分后的测序数据进行 第一测序平台的正常双端标签组合和异常双端 标签组合占比分析。 通过建立质控方法和标准， 控制合成环节的串扰水平， 实现双端唯一标签在 后续应用过程中去除串扰的发生实现精准检测 的目的。 权利要求书1页 说明书8页 附图6页 CN 115197999 A 2022.10.18 CN 115197999 A 1.一种质控双端唯一标签接 头合成串扰的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 包Lane测序： 等量的超声打断基因组DNA用双端唯一标签接头构建文库， 等比例混合N 个文库后进行包lane测序， 测序后分析正常双端标签组合和异常双端标签组合占比； 和/或 跨平台混合测序： 等量的超声打断基因组DNA用第一测序平台的双端唯一标签接头构 建文库， 等比例混合N个文库再用第二测序 平台的双端唯一标签接头 建库； 在所述第二测序 平台进行测序获得测序数据； 按照标签序列拆分后的测序数据进 行所述第一测序 平台的正 常双端标签组合和异常双端标签组合占比分析。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述第 一测序平台为MGI测序平台， 所述第 二测序平台为Illumina测序平台； 或所述第一测序平台为Illumina测序平台， 所述第二测 序平台为MGI测序平台。 3.根据权利 要求1所述的方法， 其特征在于， 所述N个文库 为8m， 其中， m为正数； 优选N个 文库为24个文库或48个文库。 4.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 当大于96组双端唯一标签时， 采用所述包 Lane测序的方法进行； 当小于96组双端唯一标签时， 采用所述 跨平台混合测序的方法进行。 5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法， 其特征在于， 当所述正常双端标签组合的 占比大于等于98.5％， 异常双 端标签组合单独一项不高于0.3％， 且标签碱基缺 失小于等于 2.5％时， 判断所述双端唯一标签接 头合格。 6.一种质控双端唯一标签接 头合成串扰的装置， 其特 征在于， 包括： 包Lane测序单元： 配置为等量的超声打断基因组DNA用双端唯一标签接头构建文库， 等 比例混合N个文库后进行包lane测序， 测序后分析正常双端标签组合和异常双端标签组合 占比； 和/或 跨平台混合测序单元： 配置为等量的超声打断基因组DNA用第一测序平台的双端唯一 标签接头构建文库， 等比例混合N个文库再用第二测序 平台的双端唯一标签接头 建库； 在所 述第二测序平台进行测序获得测序数据； 拆分后的测序数据进行所述第一测序平台的正常 双端标签组合和异常双端标签组合占比分析。 7.根据权利要求6所述的装置， 其特征在于， 所述第 一测序平台为MGI测序平台， 所述第 二测序平台为Illumina测序平台； 或所述第一测序平台为Illumina测序平台， 所述第二测 序平台为MGI测序平台。 8.根据权利 要求6所述的装置， 其特征在于， 所述N个文库 为8m， 其中， m为正数； 优选N个 文库为24个文库或48个文库。 9.根据权利要求6所述的装置， 其特征在于， 当大于96组双端唯一标签时， 采用所述包 Lane测序单 元； 当小于96组双端唯一标签时， 采用所述 跨平台混合测序单 元。 10.根据权利要求6至9中任一项所述的装置， 其特征在于， 当所述正常双端标签组合的 占比大于等于98.5％， 异常双 端标签组合单独一项不高于0.3％， 且标签碱基缺 失小于等于 2.5％时， 判断所述双端唯一标签接 头合格。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115197999 A 2质控双端唯一标签接头合成串扰的方 法及装置 技术领域 [0001]本发明涉及高通测序技术领域， 具体而言， 涉及一种质控双端唯一标签接头合成 串扰的方法及装置 。 背景技术 [0002]高通量测序是目前比较重要的获取 医学诊断和科研信息的手段， 其准确性非常重 要。 由于高通量测序产生的数据很多， 仅一次测序就会产生大量的测序数据， 例如， MGISeq ‑ T7和Illumina  NovaSeq6000单次测序就可以产生6Tb的测序数据。 因为同一次测序要混合 很多样本测序， 由于混合操作和测序过程中样本之间会有一定的串扰， 目前通常用双端标 签建库接头方式消除样本 之间的干扰， 例如， 专利CN111910258B公开了针对MGI测序平台解 决串扰的双端 标签的建库接头和CN113999893A公开了兼容双测序平台MGI和Illumina的双 端标签建库接头。 通过双 端标签可以降低100倍的样本 之间相互干扰， 这样可以使医学检测 的低频检测更准确， 科 学研究更严谨和可信。 [0003]在医学检测过程中， 由于肿瘤样的占比和异质性， 重要的靶向突变位点的频率在 0‑50％不等， 或者检测的是病人样本的cfDNA(血液游离DNA)， 检测到很低频率对被检测者 都会很有意义， 所以需要保证检测的准确性。 在科学研究 的过程中同样要求检测的准确性， 比如在研 究植物的miRNA过程中， 由于一些miRNA的表达丰度很高， 如果不同物种研 究的小 分子RNA测序混合在一次测序过程， 如果是单标签测序， 由于标签串扰导致的 “重大科研发 现”也会发生， 导致这种现象的出现是 因为不了解高通测序单端 标签会导致测序串扰， 会产 生张冠李戴的结果。 [0004]虽然双端标签建库接头可以解决样本串扰问题， 但是要在接头合成质量和产品生 产时进行严格的质控， 避免由于接头合成和纯化过程中已经导致的污染失去双端标签去除 污染的效果。 [0005]本发明就是在生产过程中严格质控合成质控， 保证双端标签能够有效去除串扰干 扰。 发明内容 [0006]本发明旨在 提供一种质控双端唯一标签接头合成串扰的方法及装置， 以避免在合 成过程中导致的污染使双端 唯一标签接头失去去除样本之间混合测序串扰功 能的技术问 题。 [0007]为了实现上述目的， 根据本发明的一个方面， 提供了一种质控双端唯一标签接头 合成串扰的方法。 该方法包括以下步骤： 包Lane测序： 等量的超声打断基因组DNA用双端唯 一标签接头构建文库， 等比例混合N个文库后进行包lane测序， 测序后分析正常双 端标签组 合和异常双端标签组合占比； 和 /或跨平台混合测序： 等量的超声打断基因组DNA用第一测 序平台的双端唯一标签接头构建文库， 等比例混合N个文库再用第二测序平台的双端 唯一 标签接头建库； 在第二测序平台进行测序获得测序数据； 按照标签序列拆分后的测序数据说　明　书 1/8 页 3 CN 115197999 A 3