(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210772807.1 (22)申请日 2022.06.30 (71)申请人 首都医科 大学附属北京胸科医院 地址 101149 北京市通州区北关大街9号院 申请人 北京市结核病胸部肿瘤研究所 (72)发明人 时广利　陈燕　张鑫桐　 (74)专利代理 机构 北京超凡宏宇专利代理事务 所(特殊普通 合伙) 11463 专利代理师 王焕 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 非小细胞肺癌miRNA标志 物及其应用 (57)摘要 本发明提供了非小细胞肺癌miRNA标志物及 其应用， 涉及生物医学技术领域。 所述标志物至 少包括miR‑3149； 优选地， 所述 miRNA标志物包 括 miR‑3149和miR ‑6803‑5p的组合。 本发明提供的 miRNA标志物在非小细胞肺癌人群与健康人群中 的表达量存在显著差异， miR ‑3149可单独或与 miR‑6803‑5p组合作为标志物用于临床非小细胞 肺癌的检测或辅助诊断。 权利要求书1页 说明书5页 序列表1页 附图2页 CN 114959018 A 2022.08.30 CN 114959018 A 1.非小细 胞肺癌miRNA标志物， 其特征在于， 所述miRNA标志物至少包括miR ‑3149； 优选 地， 所述miRNA标志 物包括miR ‑3149和miR ‑6803‑5p的组合。 2.根据权利要求1所述的非小细胞肺癌miRNA标志物在制备用于检测和/或诊断非小细 胞肺癌的试剂盒中的应用。 3.检测权利要求1所述的miRNA标志物的产品在制备用于检测和/或诊断非小细胞肺癌 的试剂盒中的应用。 4.根据权利 要求3所述的应用， 其特征在于， 检测所述miRNA标志物的产品包括PCR扩增 引物、 探针、 基因芯片中的一种或多种。 5.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于， 检测所述miRNA标志物的产品为对所述 miRNA的表达量进行定量的试剂。 6.根据权利要求5所述的应用， 其特征在于， 所述试剂包含用于miR ‑3149/或miR ‑6803‑ 5p扩增的引物和/或探针。 7.一种非小细胞肺癌检测试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒含有用于miR ‑3149和/或 miR‑6803‑5p扩增的引物和/或探针。 8.根据权利要求7所述的试剂盒， 其特征在于， miR ‑3149的探针序列如SEQ  ID No.1所 示， miR‑6803‑5p的探针序列如SEQ  ID No.2所示。 9.根据权利要求7所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒还包含内参基因 的扩增引物 和/或探针； 优选地， 所述内参基因选自U6、 GAP DH及β‑actin中的至少一种。 10.根据权利要求7 ‑9任一项所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂盒还包含RNA提取缓 冲液、 RNA反转录反应液和qPCR反应液中的至少一种。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114959018 A 2非小细胞肺癌miRNA标志物及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物医学技 术领域， 尤其是 涉及非小细胞肺癌miRNA标志 物及其应用。 背景技术 [0002]在我国， 肺癌发病率居恶性肿瘤的首位， 大多数肺癌患者发现时已经为晚期， 失去 了手术治疗机会， 其5年存活率仅为15 ‑20％， 而早期肺癌患者的5年生存率达40％左右。 因 此， 早期发现和早期治疗对于提高肺癌患者的生存率至关重要。 由于缺 乏有效的早期诊断 方法， 在过去的几十年中， NSCLC患者的存活率没有显著提高。 [0003]目前， 肺癌检测和筛查的手段主要是通过X胸片、 核磁共振成像和低剂量螺旋CT等 影像学诊断筛查， 然 而， 这2种筛查手段的特异性和准确性并不太理想 。 [0004]微小RNA(microRNA， miRNA)是一类内源性高度保守的长度为18 ‑25个核苷酸的非 编码单链小分子RNA， 主要通过转录后机制调控靶基因的翻译或表达， 从而在肿瘤的发生、 发展中有致癌和抑癌miRNA的不同作用。 miRNA非常稳定地存在于人类血浆和血清中， 并且 能够抵抗RNA内切酶的降解， 可作为诊断肺癌的新的血清标志 物指标。 [0005]鉴于此， 特提出本发明。 发明内容 [0006]本发明的目的在于提供非小细胞肺癌miRNA标志物及其应用， 为非小细胞肺癌的 特异性检测或辅助诊断提供新的途径和方法。 [0007]本发明提供的技 术方案如下： [0008]在一个方面， 本发明提供了非小细胞肺癌miRNA标志物， 所述miRNA标志物至少包 括miR‑3149； 优选地， 所述 miRNA标志物包括miR ‑3149和miR ‑6803‑5p的组合。 在一个实施方 案中， 所述miRNA标志 物由miR‑3149和miR ‑6803‑5p组成。 [0009]本发明所述miRNA(miR ‑3149和/或miR ‑6803‑5p)的序列为已知序列， 在数据库 miRBase中可获得其相应的序列。 [0010]本发明发现外周血mi RNA标志物(miR ‑3149和/或miR ‑6803‑5p)在诊断为非小细胞 肺癌患者的外周血中的表达与在对照样本中的表达相比显著上调； 首次提出诊断标志物 miR‑3149可用于人群中非小细胞肺癌的检测或诊断的标志物， 其不仅在非小细胞肺癌人群 与健康人群中的表达量存在显著差异， 而且在非小细胞肺癌中的敏感性可达到79.5％， 可 靠性高。 [0011]在一个优选的实施方案中， 所述miRNA标志 物为血清miRNA标志 物。 [0012]在另一个方面， 本发明提供了所述非小细胞肺癌miRNA标志物在用于制备检测和/ 或诊断非小细胞肺癌的试剂盒中的应用。 miR ‑3149可单独或与miR ‑6803‑5p组合作为标志 物用于临床非小细胞肺癌的检测或辅助诊断， 因此， 其可用于制备检测和/或诊断非小细胞 肺癌的试剂盒。 [0013]在另一个方面， 本发明提供了检测所述miRNA 标志物的产品在制备用于检测和/或说　明　书 1/5 页 3 CN 114959018 A 3