ICS 11.220 B 41 备案号：34651-2012 DB44 广东省地方标准 DB44/T1018—2012 鱼类血液非特异性免疫指标检测技术 Technigues fornon-specific immuneindexes analysisoffishblood 地方标准信息服务平台 2012-06-04发布 2012-09-15实施 广东省质量技术监督局 发布 DB44/T1018—2012 前言 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。 本标准由广东省海洋与渔业局提出。 本标准由广东省水产标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：中国水产科学研究院南海水产研究所、咸阳师范学院、武汉工业学院、西北农 林科技大学、中国人民解放军第八一医院、陕西科技大学。 本标准主要起草人：王文博、李明、凌飞、鲍炜、赵敏婷。 地方标准信息服务平台 DB44/T1018—2012 鱼类血液非特异性免疫指标检测技术 1范围 本标准规定了鱼类血样的采集、血液非特异性免疫指标的检测项目和检测方法的要求。 本标准适用于鱼体的血液非特异性免疫指标检测，其他水产养成品可参照执行。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SC/T7014水生动物检疫实验技术规范 SC/T7201.1鱼类细菌病检疫技术规程 3血样的采集 3.1随机取一定数量的活体或刚死不久的材料鱼，对采样的数量和个体要求按SC/T7014的规定执行。 3.2将鱼迅速捞入浓度为200mg/L的间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐（MS-222）中做0.5min～1min 的快速深度麻醉，之后用无菌注射器于尾静脉抽血。 3.3每份血样分为两份，一份以肝素抗凝，另一份以3000r/min转速在4℃下离心10min，获得血 清，置4℃冰箱备用，尽早检测，放置时间不超过一周。 4检测项目 血液溶菌酶活性、血液杀菌活性、血液白细胞吞噬活性、血液白细胞压积、血液红细胞压积、血 地方标 液淋巴细胞计数。 5检测方法 对检测中用到的试剂和器械设备按SC/T7201.1中第1部分通用技术规定准备。 5.1血液溶菌酶活性检测 按分光光度计法进行，测定波长为540nm。用0.5%Na.C1溶液配制浓度为0.2mg/mL的溶壁微球菌 （Microcococcuslysodeikticus）菌液。取5μL血清加入3mL菌液中，反应o.5min后记录吸光值ODi， 4.5min后记录吸光值0D2，以1min内吸光值下降0.001为1个活性单位（U），按公式（1）计算。 ）·……000（000）（0-00=（0） 5.2血液杀菌活性检测 在无菌条件下，用0.5%NaC1溶液将河弧菌（Vibrofluvialis）配成10°个/mL的菌悬液。50血清 加入到等量菌悬液中，22℃孵育5h后，将混合液做10倍、100倍、1000倍稀释，不同稀释度各取10μ 加于平板上，28℃孵育过夜，计算平板菌落数（ColonyFormingUnits，CFUs）。用50μLNaC溶液代 替50μ血清加入等量菌悬液作为阳性对照。结果用杀菌百分率表示，按公式（2）计算。 1