ICS DB51 四川省地方标准 DB51/T 613—2006 柑桔黄龙病检验鉴定技术规程 Rule of Detection Method for C itrus Huanglongbing Disease 2006 - 08 - 04 发布 2006 - 08-15 实施 四川省质量技术监督局 发布 DB51/T 613 —2006 I 目 次 前 言............................................................................... II 1 范围............................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 术语和定义 ......................................................................... 1 4 原理............................................................................... 1 5 田间调查 ........................................................................... 1 6 样品采集 ........................................................................... 2 7 柑桔黄龙病菌分子鉴定(PCR) .......................................................... 2 8 结果判定 ........................................................................... 4 9 检测后样品的处理 ................................................................... 5 附录A （资料性附录） 柑桔黄龙病症状特征 .............................................. 6 附录B （资料性附录） 柑桔木虱形态特征 ................................................ 7 DB51/T 613 —2006 II 前 言 本标准的附录A和附录B是资料性附录。 本标准由四川省农业厅提出并归口。 本标准由四川省农业厅植物检疫站负责起草，重庆大学参加起草。 本标准主要起草人：赵兰鸰、宁红、王中康、陈素清、李刚、帅波、夏雨先、袁青。 DB51/T 613 —2006 1 柑桔黄龙病检验鉴定技术规程 1 范围 本标准规定了柑桔黄龙病的田间症状调查、实验室分子检验技术要求。 本标准适用于对芸香科植物感染柑桔黄龙病植株以及柑桔黄龙病菌传播媒介的检验、检测和鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的 修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是 否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB 5040-2003 《柑桔苗木产地检疫规程》 DB51/T 447-2004 《柑桔溃疡病检验鉴定标准》 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准 3.1 柑桔黄龙病 Citrus H uanglongbing 由Candidatus Liberibacter asiaticus引起、主要由柑桔木虱 Diaphorina citri 传播的一种危害 柑桔属、金柑属和枳属植物叶片、枝条和果实的检疫性病害。 4 原理 柑桔黄龙病的田间症状复杂多样，该病菌属难培养菌，目前尚无法进行人工培养，因此，在鉴定时 除了进行田间识别外，主要采取病原菌DNA体外 扩增的方式进行检测。用根据柑桔黄龙病菌核糖体基因 序列设计的一对特异性引物与模板DNA(即待检样品中病原菌DNA)进行聚合酶链式反应(PCR)，引物与模 板DNA结合后，在DNA多聚酶的作用下 ，使样品所带的微量柑桔黄龙病菌DNA分子多次成倍扩增，最终通 过凝胶电泳分离检测出382bp的柑桔黄龙病特异性DNA谱带， 根据该谱带的有无确定样品是否带有柑桔黄 龙病菌。 5 田间调查 5.1 症状调查 用目测方法检查叶片、果实、枝条，症状特征参见附录A。发现疑似症状样本送实验室检验。 5.2 柑桔木虱调查