ICS 65.120 B 46 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB13/T 1384.8—2011 饲料中氯羟吡啶的测定 液相色谱－串联质谱法 Determination of copidol in feed LC-MS/MS method 2011 - 05 - 10 发布 河北省质量技术监督局 2011 - 05 - 20 实施 发 布 DB13/T 1384.8—2011 前 言 本标准按照GB/T 1.1－2009给出的规则起草。 本标准由河北省质量技术监督局提出。 本标准起草单位：河北省食品质量监督检验研究院、河北医科大学、石家庄市疾病预防控制中心、 北京出入境检验检疫局技术中心、河北省饲料产品质量监督检验站。 本标准主要起草人：张岩、杨立学、李挥、张宏、丛斌、卢晓宇、吕品、贾茜、李强、李志平、马 春玲、米振杰、沈磊、高振同、武英利。 I DB13/T 1384.8—2011 饲料中氯羟吡啶的测定 液相色谱－串联质谱法 1 范围 本标准规定了饲料中氯羟吡啶的液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于饲料中氯羟吡啶的测定。 本标准的方法检出限为20 μg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法（GB/T 6682－1992，neq ISO 3696：1987〉 3 原理 试样中氯羟吡啶经甲醇提取，用中性氧化铝柱净化分离，浓缩后用甲醇溶解，液相色谱-串联质谱 定性定量测定。. 4 试剂和溶液 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 4.1 甲醇。 4.2 中性氧化铝萃取柱：1 g，6 mL。 4.3 氯羟吡啶标准品：纯度均应大于 95%。 4.4 氯羟吡啶标准贮备液：分别准确称取己知纯度的氯羟吡啶标准品 10 mg（精确至 0.000 l g）， 置于 100 mL 棕色容量瓶中，加甲醇超声使之完全溶解，定容至刻度，摇匀。该溶液中氯羟吡啶浓度为 100 g/mL，于 4℃保存可使用 6 个月。 4.5 氯羟吡啶标准工作液：准确移取氯羟吡啶标准储备液 5 mL，置于 50 mL 棕色容量瓶中，用甲醇 定容至刻度，该溶液中氯羟吡啶浓度均为 10 g/mL，于 4℃保存可使用 1 个月。 4.6 正己烷。 4.7 氨水。 5 仪器和设备 除实验室常用仪器和设备外，还包括以下仪器和设备。 5.1 液相色谱-串联四极杆质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 5.2 电子天平：感量为 0.l mg 和 1 mg。 1 DB13/T 1384.8—2011 5.3 5.4 5.5 5.6 6 旋涡混匀器。 滤膜：孔径 0.45 μm，有机相。 高速离心机。 中性氧化铝固相萃取柱：500 mg，6 mL，或相当者。 试样的制备 6.1 提取 准确称取样品5 g（精确至0.00l g）于50 mL离心管中，加入甲醇10 mL，旋涡混合，于振荡器振荡 30 min，5 000 r/min离心5 min，取上清液再加入10 mL水、500 μL氨水、10 mL正己烷，涡旋30 s，8 000 r/min离心5 min，取下层清液待净化。 6.2 净化 将上清液移入中性氧化铝柱中，用 20 mL 甲醇洗脱，将过柱液及洗脱液全部接收于 50 mL 离心管 中，氮吹至干，用 l mL 甲醇溶解残渣，过 0.45 μm 微孔滤膜，待测。 7 分析步骤 7.1 测定 7.1.1 液相色谱条件 色谱柱：C18，5 μm，150 mm × 2.l mm（内径）或相当者。 水（A）+甲醇（B）。 流速：0.25 mL/min。 梯度：0～4.0 min 10％～90％B；4.0 min～8.0 min 90％B，8.1 min～10.0 min 10％B。 柱温：25℃。 进样量：25 μL。 7.1.2 串联质谱条件 离子源：电喷雾离子源（ESI），正离子监测。 扫描方式：选择离子检测（MRM）。 雾化气、鞘气为高纯氮气，碰撞气为高纯氦气。 电喷雾电压、碰撞电压等自动优化至最佳值。 定性离子对(m/z)：192.2/174.2，192.2/101.0。 定量离子对定量离子对(m/z)：192.2/101.0。 7.2 定性、定量 氯羟吡啶标准工作溶液在液相色谱-串联质谱设定条件下分别进样，以样品峰面积为纵坐标，工作 溶液浓度（ng/mL）为横坐标，绘制 6 点标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中 泰乐菌素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。氯羟吡啶标准物质质谱图参见附录 A。 7.3 空白试验 2 DB13/T 1384.8—2011 除不称取试样外，均按上述步骤进行。 8 结果计算 结果用色谱数据处理机或按式(1)计算，计算结果需扣除空白值： X = c• V ....................................... (1) m 式中： X——试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（μg/kg）。 c——从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）。 V——样品溶液定容体积，单位为毫升(mL)。 m——样品溶液所代表试样的质量，单位为克(g)。 9 重复性 同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差不大于 15％。 3 DB13/T 1384.8—2011 AA 附 录 A （资料性附录） 氯羟吡啶标准质谱图 表A.1 氯羟吡啶标准物质质谱图 _________________________________ 4