ICS 67.040 CCS X60 QB 中华人民共和国轻工行业标准 QB/T XXXXXXXX 凝结魏茨曼氏菌计数方法 Counting method of Weizmannia coagulans （报批稿） XXXX - XX - XX 发布 XXXX - XX - XX 实施 发布 中华人民共和国工业和信息化部 QB/T XXXX-XXXX 凝结魏茨曼氏菌计数方法 1范围 本文件描述了凝结魏茨曼氏菌的计数方法，包括设备和材料、培养基和试剂、计数程序、试样制备、 操作步骤、结果与报告。 本文件适用于食品用菌种制剂及食品中凝结魏茨曼氏菌的计数。 2规范性引用文件 2 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 术语和定义 3 下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 凝结魏茨曼氏菌Weizmanniacoagulans 凝结芽孢杆菌Bacilluscoagulans 菌落圆形，表面光滑，白色而有光泽，属于芽孢杆菌科、魏茨曼氏菌属，革兰氏阳性兼性厌氧杆菌， 芽孢中生到次端生，孢子椭圆或柱状，孢囊膨大或不明显膨大，产L(+)-乳酸的细菌。 [来源:QB/TXXXX-2023,3.1] 设备和材料 4 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 4.1天平：感量0.01g。 4.2pH计：精确度0.1。 4.3拍击式均质器及无菌均质袋。 4.4涡旋混合器。 4.5恒温水浴锅：（80±1）℃。 4.6恒温培养箱：（40土2）℃。 4.7容量瓶：100mL、1000mL。 4.8烧杯：1000mL。 4.9量筒：250mL、1000mL。 4.10无菌锥形瓶：250mL、500mL。 4.11无菌试管：18mm×180mm，15mm×150mm。 2 QB/T XXXX-XXXX 4.12微量移液器及无菌吸头：1000μL。 4.13无菌培养皿：直径90mm。 5培养基和试剂 本方法中所用的水，在未注明其他要求时，应符合GB/T6682中水的规格。所用试剂，在未注明其 他规格时，均指分析纯（AR），在没有注明其他要求时，均按GB/T603的规定制备。 5.1生理盐水（9.0g/L） 称取9.0g氯化钠，蒸馏水充分溶解后，定容至1000mL，分装后121C高压灭菌15min~20min。用 于试样制备溶解样品时应按比例添加0.5%吐温-80。 5.2蛋白陈水溶液（1.0g/L） 称取1.0g胰蛋白陈，5.0g吐温-80，蒸馏水充分溶解后，定容至1000mL，分装后121C高压灭菌15 min~20min。用于试样制备溶解样品时应按比例添加0.5%吐温-80。 5.3氢氧化钠溶液（2mol/L） 称取8.0g氢氧化钠，蒸馏水充分溶解后，定容至100mL，分装后121℃C高压灭菌15min~20min。 5.4乳酸溶液（2mol/L） 称取21.2g质量分数为85%的L-乳酸，蒸馏水充分溶解后，定容至100mL，分装后121℃C高压灭菌 15 min~20 min。 5.5凝结魏茨曼氏菌计数（Weizmanniacoagulanscount，WCC）培养基 葡萄糖5.0g、蛋白陈10.0g、酵母粉5.0g、牛肉膏5.0g、氯化钠0.25g、无水氯化钙0.15g、一水合 硫酸锰0.1g、L-半胱氨酸盐酸盐0.5g、琼脂粉15.0g，加入1000mL蒸馏水，用氢氧化钠溶液（5.3）或 6计数程序 凝结魏茨曼氏菌按图1所示程序进行计数。 菌种制剂：样品1g+99mL无菌生理盐水或无菌蛋白陈水溶液 个 样品均质 10倍梯度稀释 选择2~3个适宜稀释度，将对应稀释度的试管置于 80°℃恒温水浴锅中，热激10min 个 每个试管分别吸取1.0mL样品匀液于无菌平血内，每个稀释度做 两个平血，每个平血加入15mL琼脂培养基 需氧：（40±2）°℃ 培弄（48±2）1 凝结魏茨曼氏菌计数 报告 图1凝结魏茨曼氏菌计数程序