书 书 书犐犆犛 ６５ ． １２０ 犅 ４６ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ２３１８０ — ２００８ 饲料添加剂 　 ２ ％犱 生物素 犉犲犲犱犪犱犱犻狋犻狏犲 — ２ ％犱犅犻狅狋犻狀 ２００８  １２  ３１ 发布 ２００９  ０５  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会 （ ＳＡＣ ／ ＴＣ７６ ） 提出并归口 。 本标准起草单位 ： 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 、 国家饲料质量监督检验中心 （ 北京 ）、 浙江医药股份有限公司新昌制药厂 、 浙江医药股份有限公司维生素厂 。 本标准主要起草人 ： 赵小阳 、 李兰 、 虞哲高 、 王彤 、 梅娜 、 杨志刚 、 王春琴 、 李永才 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ２３１８０ — ２００８ 饲料添加剂 　 ２ ％犱 生物素 １ 　 范围 本标准规定了饲料添加剂 ２％ｄ 生物素产品的要求 、 试验方法 、 检验规则以及标签 、 包装 、 运输和贮 存等要求 。 本标准适用于以淀粉 、 糊精或乳糖等为载体 ， 用喷雾法和稀释法工艺制得的含有 ２％ｄ 生物素的饲 料添加剂 。 分子式 ： Ｃ １０ Ｈ １６ Ｎ ２ Ｏ ３ Ｓ 。 相对分子质量 ： ２４４．３１ （ ２００５ 年国际相对原子质量 ）。 结构式 ：  Ｏ Ｃ ＨＮ  ＨＣ Ｈ ２  Ｃ Ｓ  　 ＮＨ  ＣＨ ＣＨ （ ＣＨ ２ ） ４  ＣＯＯＨ ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。 凡是注日期的引用文件 ， 其随后所有 的修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本标准 ， 然而 ， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本标准 。 ＧＢ ／ Ｔ６０２ 　 化学试剂 　 杂质测定用标准溶液的制备 （ ＧＢ ／ Ｔ６０２ — ２００２ ， ＩＳＯ６３５３１ ： １９８２ ， ＮＥＱ ） ＧＢ ／ Ｔ６０３ 　 化学试剂 　 试验方法中所用制剂及制品的制备 （ ＧＢ ／ Ｔ６０３ — ２００２ ， ＩＳＯ６３５３１ ： １９８２ ， ＮＥＱ ） ＧＢ ／ Ｔ６４３５ 　 饲料中水分和其他挥发性物质含量的测定 （ ＧＢ ／ Ｔ６４３５ — ２００６ ， ＩＳＯ６４９６ ： １９９９ ， ＩＤＴ ） ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 　 分析实验室用水规格和试验方法 （ ＧＢ ／ Ｔ６６８２ — ２００８ ， ＩＳＯ３６９６ ： １９８７ ， ＭＯＤ ） ＧＢ１０６４８ 　 饲料标签 《 中华人民共和国药典 》（ ２００５ 年版二部 ） ３ 　 要求 ３ ． １ 　 性状 本品为白色或微黄色的流动性粉末 。 ３ ． ２ 　 技术指标 技术指标应符合表 １ 规定 。 １ 犌犅 ／ 犜 ２３１８０ — ２００８ 表 １ 　 技术指标 指 　 标 　 名 　 称 指 　　　 标 含量 （ 以 Ｃ １０ Ｈ １６ Ｎ ２ Ｏ ３ Ｓ 计 ）／ ％ ≥ ２．００ 干燥失重 ／ ％ ≤ ８．０ 砷 ／（ ｍｇ ／ ｋｇ ） ≤ ３．０ 重金属 （ 以 Ｐｂ 计 ）／（ ｍｇ ／ ｋｇ ） ≤ １０．０ 粒度 ９５％ 通过孔径为 ０．１８ｍｍ （ ８０ 目 ） 分析筛 ４ 　 试验方法 除特殊说明外 ， 所用试剂均为分析纯 ， 水为蒸馏水 ， 色谱用水符合 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 中一级用水规定 ， 标 准溶液和杂质溶液的制备应符合 ＧＢ ／ Ｔ６０２ 和 ＧＢ ／ Ｔ６０３ 的规定 。 ４ ． １ 　 试剂和溶液 ４ ． １ ． １ 　 乙腈 ： 色谱纯 。 ４ ． １ ． ２ 　 三氟乙酸 。 ４ ． １ ． ３ 　 盐酸溶液 ： 犮 （ ＨＣｌ ） ＝３．０ｍｏｌ ／ Ｌ ， 量取 ２５０ｍＬ 盐酸于 １０００ｍＬ 容量瓶中 ， 用水稀释定容至 刻度 。 ４ ． １ ． ４ 　 ０．０５％ 三氟乙酸溶液 ： 浓度为 ０．０５％ （ 体积分数 ）， 移取 ０．５０ｍＬ 三氟乙酸于 １０００ｍＬ 容量瓶 中 ， 用超纯水定容至刻度 。 ４ ． １ ． ５ 　 提取剂 ： 三氟乙酸溶液 （ ４．１．４ ） ＋ 乙腈 （ ４．１．１ ） ＝７５＋２５ 。 ４ ． １ ． ６ 　 ｄ 生物素对照品 ： ｄ 生物素含量 ≥ ９９．０％ 。 ４ ． １ ． ７ 　 ｄ 生物素标准储备溶液 ： 称取约 １００ｍｇ （ 精确至 ０．００００１ｇ ） 生物素对照品 （ ４．１．６ ）， 置于 ５０ｍＬ 的容量瓶中 ， 用提取剂 （ ４．１．５ ） 溶解 ， 并稀释定容至刻度 ， 摇匀 。 该标准储备液每毫升含生物素 ２．０ｍｇ 。 ４ ． １ ． ８ 　 ｄ 生物素标准工作液 ： 准确吸取 ｄ 生物素标准储备液 （ ４．１．７ ） １．００ｍＬ 于 １０ｍＬ 容量瓶中 ， 用 提取剂 （ ４．１．５ ） 稀释定容至刻度 ， 摇匀 。 该标准工作液每毫升含生物素 ２００ μ ｇ 。 ４ ． ２ 　 仪器和设备 实验室常用设备和 ： ４ ． ２ ． １ 　 超声波水浴 。 ４ ． ２ ． ２ 　 超纯水装置 。 ４ ． ２ ． ３ 　 高效液相色谱仪 ， 带紫外可调波长检测器 （ 或二极管矩阵检测器 ）。 ４ ． ３ 　 鉴别试验 取试样溶液用高效液相色谱测定 ， 样品溶液主峰的相对保留时间与对照溶液主峰的相对保留时间 一致 。 ４ ． ３ ． １ 　 试液的制备 称取试样约 ０．５ｇ （ 精确至 ０．０００２ｇ ）， 置于 ５０ｍＬ 容量瓶中 ， 加约 ４０ｍＬ 提取剂 （ ４．１．５ ）， 在超声 波水浴中超声提取 １５ｍｉｎ ， 冷却至室温 ， 用提取剂 （ ４．１．５ ） 定容至刻度 ， 混匀 ， 过滤 ， 滤液过 ０．４５ μ ｍ 滤 膜 ， 供高效液相色谱仪分析 。 ４ ． ３ ． ２ 　 色谱条件 固定相 ： Ｃ １８ 柱 ， 内径 ４．６ｍｍ ， 长 ２５０ｍｍ ， 粒度 ３ μ ｍ 。 流动相 ： 三氟乙酸溶液 （ ４．１．４ ） ＋ 乙腈 （ ４．１．１ ） ＝７５＋２５ 。 流速 ： １．０ｍＬ ／ ｍｉｎ 。 检测器 ： 紫外可调波长检测器 （ 或二极管矩阵检测器 ）， 检测波长 ２１０ｎｍ 。 进样量 ： ２０ μ Ｌ 。 ２ 犌犅 ／ 犜 ２３１８０ — ２００８ ４ ． ４ 　 犱 生物素含量的测定 ４ ． ４ ． １ 　 原理 试样中的 ｄ 生物素用溶剂提取后 ， 注入反相色谱柱上 ， 用流动相洗脱分离 ， 紫外可调波长检测器 （ 或二极管矩阵检测器 ） 测定 ， 外标法计算 ｄ 生物素的含量 。 ４ ． ４ ． ２ 　 分析步骤 ４ ． ４ ． ２ ． １ 　 试液的制备 取试样溶液 （ ４．３．１ ） 供高效液相色谱仪分析 。 ４ ． ４ ． ２ ． ２ 　 测定步骤 ４ ． ４ ． ２ ． ２ ． １ 　 色谱条件 同 ４．３．２ 。 ４ ． ４ ． ２ ． ２ ． ２ 　 定量测定 按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数 ， 向色谱柱中注入 ｄ 生物素标准工作液 （ ４．１．８ ） 及试 样溶液 （ ４．３．１ ）， 得到色谱峰面积响应值 ， 用外标法定量 。 ４ ． ４ ． ２ ． ３ 　 结果计算 ４ ． ４ ． ２ ． ３ ． １ 　 试样中 ｄ 生物素 （ Ｃ １０ Ｈ １６ Ｎ ２ Ｏ ３ Ｓ ） 含量 犡 以质量分数 （ ％ ） 表示 ， 按式 （ １ ） 计算 。 犡 ＝ 犘 ｉ × 犮 × ５０ 犘 ｓｔ × 犿 × １０ － ６ × １００ …………………………（ １ ） 　　 式中 ： 犘 ｉ ——— 试液 （ ４．３．１ ） 峰面积 ； 犮 ——— ｄ 生物素标准工作液 （ ４．１．８ ） 浓度 ， 单位为微克每毫升 （ μ ｇ ／ ｍＬ ）； ５０ ——— 试液 （ ４．３．１ ） 稀释倍数 ； 犘 ｓｔ ——— ｄ 生物素标准工作液 （ ４．１．８ ） 峰面积 ； 犿 ——— 试样质量 ， 单位为克 （ ｇ ）。 ４ ． ４ ． ２ ． ３ ． ２ 　 平行测定结果用算术平均值表示 ， 保留三位有效数字 。 ４ ． ４ ． ２ ． ４ 　 重复性 同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差应不大于 ５．０％ 。 ４ ． ５ 　 干燥失重的测定 按 ＧＢ ／ Ｔ６４３５ 测定 。 ４ ． ６ 　 砷的测定 ４ ． ６ ． １ 　 称取试样 １ｇ （ 精确到 ０．０００１ｇ ） 于 ３０．０ｍＬ 瓷坩埚中 ， 加入 ５ｍＬ１５０ｇ ／ Ｌ 硝酸镁溶液 ， 混匀 ， 于低温或沸水浴中蒸干 ， 低温炭化至无烟后 ， 转入高温炉于 ５５０℃ 恒温灰化 ３．５ｈ ～ ４．０ｈ ， 取出冷却 ， 缓 慢加入 １０．０ｍＬ 盐酸溶液 （ ４．１．３ ）， 待激烈反应过后 ， 煮沸并转移到发生器中 ， 补加 ８．０ｍＬ 盐酸 ， 加水 至 ４０．０ｍＬ 左右 。 准确吸取 ３ｍＬ１．０ μ ｇ ／ ｍＬ 砷标准工作溶液于发生瓶中 ， 加 １０ｍＬ 盐酸 ， 加水稀释至 ４０ｍＬ ， 加入 碘化钾溶液 。 ４ ． ６ ． ２ 　 以下按 《 中华人民共和国药典 》（ ２００５ 年版二部 ） 砷盐检查法第一法 （ 古蔡氏法 ） 测定 。 ４ ． ７ 　 重金属的测定 ４ ． ７ ． １ 　 称取试样 １ｇ （ 精确