书 书 书犐犆犛 ６５ ． １２０ 犅 ４６ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ２３１８６ — ２００９ 水产饲料安全性评价 慢性毒性试验规程 犘狉犻狀犮犻狆犾犲狅犳犪狇狌犪犳犲犲犱狊犪犳犲狋狔犲狏犪犾狌犪狋犻狅狀 — 犆犺狉狅狀犻犮狋狅狓犻犮犻狋狔狋犲狊狋 　　 ２００９  ０３  ２８ 发布 ２００９  ０９  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准是在参照了 ＧＢ１５１９３．１３ — ２００３ 《 ３０ 天和 ９０ 天喂养试验 》、 ＧＢ１５１９３．１７ — ２００３ 《 慢性毒性 和致癌试验 》 的基础上 ， 根据我国技术发展水平研究制定的 。 本标准的附录 Ａ 为资料性附录 。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会 （ ＳＡＣ ／ ＴＣ７６ ） 提出并归口 。 本标准起草单位 ： 中国农业科学院饲料研究所 、 国家水产饲料安全评价基地 。 本标准主要起草人 ： 刘海燕 、 薛敏 、 吴秀峰 、 郑银桦 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ２３１８６ — ２００９ 水产饲料安全性评价 慢性毒性试验规程 １ 　 范围 本标准规定了水产饲料安全性评价慢性毒性试验规程的基本技术要求 。 本标准适用于水产动物使用的配合饲料 、 单一饲料及饲料添加剂的安全性评价 ， 不包括饲料药物添 加剂 。 注 ： 本标准推荐试验动物为鱼类 ， 不排除使用其他水产动物 ， 但应对试验条件及观察指标作相应的改变 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。 凡是注日期的引用文件 ， 其随后所有 的修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本标准 ， 然而 ， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本标准 。 ＧＢ ／ Ｔ５９１７．１ 　 饲料粉碎粒度测定 　 两层筛筛分法 ＧＢ１１６０７ 　 渔业水质标准 ＧＢ１３０７８ 　 饲料卫生标准 ＧＢ ／ Ｔ２２４８７ 　 水产饲料安全性评价 　 急性毒性试验规程 ＧＢ ／ Ｔ２３３８８ 　 水产饲料安全性评价 　 残留和蓄积试验规程 ＧＢ ／ Ｔ２３３８９ 　 水产饲料安全性评价 　 繁殖试验规程 ＮＹ５０７２ 　 无公害食品 　 渔用配合饲料安全限量 ３ 　 术语 、 定义和缩略语 下列术语 、 定义和缩略语适用于本标准 。 ３ ． １ 最大未观察到有害作用剂量 　 狀狅狅犫狊犲狉狏犲犱犪犱狏犲狉狊犲犲犳犳犲犮狋犾犲狏犲犾 ； 犖犗犃犈犔 通过动物试验 ， 以现有的技术手段和检测指标未观察到与受试物有关的毒性作用的最大剂量 。 ３ ． ２ 最大允许致毒作用浓度 　 犿犪狓犻犿狌犿犪犮犮犲狆狋犪犫犾犲狋狅狓犻犮犻狋狔犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀 ； 犕犃犜犆 对试验动物无统计显著性有害效应的最高浓度与邻近的对试验动物有统计显著性有害效应的最低 浓度之间的假定阈浓度 。 ３ ． ３ 靶器官 　 狋犪狉犵犲狋狅狉犵犪狀 试验动物出现由受试物引起的明显毒性作用的任何器官 。 ３ ． ４ 　 慢性毒性 　 犮犺狉狅狀犻犮狋狅狓犻犮犻狋狔 试验动物较长时间连续接触受试物出现的受毒害作用 。 ３ ． ５ 流水养殖系统 　 犳犾狅狑狋犺狉狅狌犵犺狊狔狊狋犲犿 来自系统外的养殖用水连续或间歇地流经养殖容器的养殖系统 。 １ 犌犅 ／ 犜 ２３１８６ — ２００９ ３ ． ６ 　 循环水养殖系统 　 狉犲犮犻狉犮狌犾犪狋犻狅狀狊狔狊狋犲犿 养殖用水在系统内经过净化处理后循环使用的养殖系统 。 ３ ． ７ 水产养殖周期 　 犪狇狌犪犮狌犾狋狌狉犲狆犲狉犻狅犱 某一批水产动物种苗在水体中养成上市所耗费的时间 。 ３ ． ８ 　 初始体重 　 犻狀犻狋犻犪犾犫狅犱狔狑犲犻犵犺狋 ； 犐犅犠 试验开始时试验动物的平均重量 。 ３ ． ９ 终末体重 　 犳犻狀犪犾犫狅犱狔狑犲犻犵犺狋 ； 犉犅犠 试验结束时试验动物的平均重量 。 ３ ． １０ 摄食率 　 犳犲犲犱犻狀犵狉犪狋犲 ； 犉犚 试验期间 ， 试验水产动物平均体重的日摄食量百分数 ， 计算公式见式 （ １ ）。 摄食率 ＝ 犚 １ ／［（ 犠 ０ ＋ 犠 ｔ ）／ ２ ］／ 狋 × １００％ …………………………（ １ ） 　　 式中 ： 犚 １ ， 狋 ， 犠 ０ 与 犠 ｔ ——— 分别为摄食量 ， 试验天数 ， 初始总体重与终末总体重 。 ３ ． １１ 饲料转化比 （ 饲料系数 ） 　 犳犲犲犱犮狅狀狏犲狉狊犻狅狀狉犪狋犻狅 ； 犉犆犚 试验期间 ， 试验水产动物单位增重所消耗的饲料量 ， 计算公式见式 （ ２ ）。 饲料转化比 ＝ 犚 １ ／（ 犠 ｔ ＋ 犠 ｄ － 犠 ０ ）…………………………（ ２ ） 　　 式中 ： 犚 １ ， 犠 ｔ ， 犠 ｄ 与 犠 ０ ——— 分别为摄食量 ， 终末总体重 ， 死亡试验动物体重与初始总体重 。 ３ ． １２ 增重率 　 狑犲犻犵犺狋犵犪犻狀 ； 犠犌 试验水产动物在试验期间的增重相对于初始体重的百分率 ， 计算公式见式 （ ３ ）。 增重率 ＝ （ ＦＢＷ－ＩＢＷ ）／ ＩＢＷ × １００％ ………………………（ ３ ） 　　 式中 ： ＦＢＷ 与 ＩＢＷ ——— 分别为终末体重与初始体重 。 ３ ． １３ 特定生长率 　 狊狆犲犮犻犳犻犮犵狉狅狑狋犺狉犪狋犲 ； 犛犌犚 试验水产动物在试验期间的日增重速率 ， 计算公式见式 （ ４ ）。 特定生长率 ＝ ［ ｌｎ （ ＦＢＷ ） －ｌｎ （ ＩＢＷ ）］／ 狋 × １００％ ……………………（ ４ ） 　　 式中 ： ＦＢＷ ， ＩＢＷ 与 狋 ——— 分别为终末体重 ， 初始体重与试验天数 。 ３ ． １４ 存活率 　 狊狌狉狏犻狏犪犾 试验期间 ， 试验水产动物的存活数占初始数的百分率 ， 计算公式见式 （ ５ ）。 存活率 ＝ 存活尾数 ／ 初始尾数 × １００％ ……………………………（ ５ ） ４ 　 原理 通过饲喂受试物或饲喂添加受试物的饲料 ， 观察试验动物在摄食后的大部分养殖周期内所产生的 ２ 犌犅 ／ 犜 ２３１８６ — ２００９ 各种摄食 、 生长及生理生化反应 ， 阐明受试物的毒性表现 ， 确定最大未观察到有害作用剂量 （ ＮＯＡＥＬ ）、 受试物的最大允许致毒作用浓度 （ ＭＡＴＣ ）， 作为最终评定受试物在水产饲料中应用的安全性并确定其 安全限量的参考依据 。 ５ 　 试验动物 试验动物应选择依据 ＧＢ ／ Ｔ２２４８７ 所筛选的对受试物敏感的水产动物进行试验 ， 试验动物选用种 属和来源明确 、 健康 、 规格整齐的同批苗种 。 正式试验前应有 ２ 周的驯养期 。 驯养期内如果动物死亡率 高于 １０％ ， 则淘汰该批苗种 。 驯养期结束后应淘汰由于驯养造成的质量差异的个体 ， 保留健康活泼的 水产动物继续作为试验动物 。 ６ 　 剂量与分组 ６ ． １ 　 剂量设计参考的原则 ６ ． １ ． １ 　 原则上高剂量组的动物在饲喂受试物期间应当出现明显中毒反应 ， 低剂量组不出现中毒反应 。 在高剂量组和低剂量组之间再设 ２ 个及 ２ 个以上剂量组 ， 以期获得比较明确的剂量  反应关系 。 对能或 不能求出经口或注射 ＬＤ ５０ 的受试物分别进行规定 。 ６ ． １ ． ２ 　 能求出经口或注射 ＬＤ ５０ 的受试物 ： 以经口服或注射 ＬＤ ５０ 的 １０％ ～ ２５％ 作为慢性毒性试验的最 高剂量组 ， 此 ＬＤ ５０ 百分比的选择主要参考 ＬＤ ５０ 剂量反应曲线的斜率 。 然后在此剂量下设几个剂量组 ， 最低剂量组至少是试验水产动物可能摄入量的 ３ 倍 。 ６ ． １ ． ３ 　 不能求出经口或注射 ＬＤ ５０ 的受试物 ： 慢性毒性试验应尽可能涵盖试验水产动物可能摄入量 １００ 倍的剂量组 。 对于试验水产动物摄入量较大的受试物 ， 高剂量可以按在饲料中的最大掺入量进 行设计 。 ６ ． ２ 　 分组 至少应设 ４ 个剂量组和 １ 个对照组 。 受试物如果为配合饲料 ， 直接饲喂 ， 不设剂量组 。 需要另外设 计对照组 。 每组不少于 ６ 个重复 ， 每个重复至少 ３０ 个个体 。 ７ 　 操作步骤 ７ ． １ 　 受试物的处理 将受试物粉碎至所要求的粒度 （ 全部通过筛孔 ０．２８ｍｍ 分样筛或更高细度 ）， 粒度的测定方法符合 ＧＢ ／ Ｔ５９１７．１ 。 根据受试物试验剂量的设计 ， 把受试物添加到试验动物的配合饲料中 ， 液体受试物按照 试验剂量直接添加到其他原料的混合物中 。 充分混合 ， 适当加工 ， 制成营养组成 、 适口性 、 水中稳定性 、 粒径等特性都符合试验目的和试验动物要求的试验饲料 ， 减少受试物以外的因素对试验动物的影响 。 受试配合饲料直接饲喂 。 对某一种受试物进行评价时 ， 要考虑到饲料配方中是否存在其他拮抗或协同 作用的成分 。 在确定配方前分析相关原料常规营养成分 ， 并分析其卫生指标 ， 结果应符合 ＧＢ１３０７８ 和 ＮＹ５０７２ 的要求 。 ７ ． ２ 　 受试物的给予 ７ ． ２ ． １ 　 途径 用含有受试物的试验饲料或受试饲料喂养试验水产动物 （ 应注意受试物在饲料中的稳定性 ）。 当受 试物添加到饲料中时 ， 需将受试物剂量按每 １００ｇ 试验水产动物体重的摄入量折算为饲料的量 （ ｍｇ ／ ｋｇ ）。 ７ ． ２ ． ２ 　 试验动物空腹处理 试验水产动物在开始及结束前应空腹 ２４ｈ