书 书 书犐犆犛 ６５ ． １２０ 犅 ４６ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ２３３８８ — ２００９ 水产饲料安全性评价 残留和蓄积试验规程 犘狉犻狀犮犻狆犾犲狅犳犪狇狌犪犳犲犲犱狊犪犳犲狋狔犲狏犪犾狌犪狋犻狅狀 — 犚犲狊犻犱狌犲犪狀犱犮狌犿狌犾犪狋犻狅狀狋犲狊狋 ２００９  ０３  ２６ 发布 ２００９  ０７  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准的附录 Ａ 为资料性附录 。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会 （ ＳＡＣ ／ ＴＣ７６ ） 提出并归口 。 本标准起草单位 ： 中国农业科学院饲料研究所 、 国家水产饲料安全评价基地 。 本标准主要起草人 ： 刘海燕 、 薛敏 、 吴秀峰 、 郑银桦 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ２３３８８ — ２００９ 水产饲料安全性评价 残留和蓄积试验规程 １ 　 范围 本标准规定了水产饲料安全性评价残留和蓄积试验规程的基本技术要求 。 本标准适用于水产动物使用的配合饲料 、 单一饲料及饲料添加剂的安全性评价 ， 不包括饲料药物添 加剂 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。 凡是注日期的引用文件 ， 其随后所有 的修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本标准 ， 然而 ， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本标准 。 ＧＢ ／ Ｔ５９１７．１ 　 饲料粉碎粒度测定 　 两层筛筛分法 ＧＢ１１６０７ 　 渔业水质标准 ＧＢ１３０７８ 　 饲料卫生标准 ＧＢ ／ Ｔ２２４８７ 　 水产饲料安全性评价 　 急性毒性试验规程 ＧＢ ／ Ｔ２２４８８ 　 水产饲料安全性评价 　 亚急性毒性试验规程 ＧＢ ／ Ｔ２３１８６ 　 水产饲料安全性评价 　 慢性毒性试验规程 ＮＹ５０７２ 　 无公害食品 　 渔用配合饲料安全限量 ３ 　 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准 。 ３ ． １ 靶器官 　 狋犪狉犵犲狋狅狉犵犪狀 试验动物出现由受试物引起的明显毒性作用的任何器官 。 ３ ． ２ 残留 　 狉犲狊犻犱狌犲 动物接触受试物后 ， 残存于动物体内的受试物及其在性质上和数量上有毒理学意义的代谢 （ 或降 解 、 转化 ） 产物 。 ３ ． ３ 蓄积 　 犮狌犿狌犾犪狋犻狅狀 低于一次中毒剂量的受试物 ， 反复与动物接触一段时间后致使机体出现的中毒反应 。 在本规程中 是指动物反复多次从饲料中摄取 、 吸收 、 排出受试物的过程 。 当摄入大于排出时 ， 受试物及其代谢产物 就可能在机体内逐渐增加并蓄积 ， 即蓄积生效 ； 当摄入等于排出时 ， 受试物及其代谢产物积累达到平衡 ； 当摄入小于排出时 ， 受试物及其代谢产物在动物体内减少并清除 。 ３ ． ４ 蓄积系数 　 犫犻狅犪犮犮狌犿狌犾犪狋犻狅狀犳犪犮狋狅狉 犅犆犉 动物从饲料中吸收受试物并在靶器官中积累毒物浓度达到动态平衡 ， 生物体内的毒物浓度与饲料 １ 犌犅 ／ 犜 ２３３８８ — ２００９ 中该毒物浓度的比值 。 ＢＣＦ ＝ 犮 ｂ 犮 ｆ …………………………（ １ ） 　　 式中 ： 犮 ｂ ——— 稳态平衡时毒物浓度 （ 高峰浓度 ）； 犮 ｆ ——— 饲料中该毒物浓度 。 ３ ． ５ 吸收相 　 犪犫狊狅狉狆狋犻狅狀犱狌狉犪狋犻狅狀 从开始摄入到受试物和 （ 或 ） 有毒代谢物在试验动物蓄积靶器官中蓄积生效的时间过程 。 ３ ． ６ 平衡相 　 犮狅狌狀狋犲狉犫犪犾犪狀犮犲犱狌狉犪狋犻狅狀 受试物和 （ 或 ） 有毒代谢物在试验动物蓄积靶器官中蓄积达到稳态平衡浓度 （ 高峰浓度 ）， 并持续一 定时间 。 ３ ． ７ 消除相 　 犲犾犻犿犻狀犪狋犻狅狀犱狌狉犪狋犻狅狀 停喂期中 ， 受试物和 （ 或 ） 有毒代谢物在试验动物蓄积靶器官中从稳态平衡浓度 （ 高峰浓度 ） 逐步消 除至国际及国内相关标准规定的最高残留限量 （ ｍａｘｉｍｕｍｒｅｓｉｄｕｌｅｌｅｖｅｌ ， ＭＲＬｓ ） 所需要的时间 。 如受 试物和 （ 或 ） 有毒代谢物尚无相关 ＭＲＬｓ 值 ， 则以消除至高峰浓度的 １ ／ １０ ～ １ ／ ２０ 所需要的时间为准 。 ３ ． ８ 时间  浓度曲线 　 狋犻犿犲犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀犮狌狉狏犲 犆狋 受试物在试验动物体内是不断地吸收 、 分布 、 转化和排泄的 ， 受试物和 （ 或 ） 有毒代谢物在试验动物 蓄积靶器官中可能存在残留和蓄积作用 。 其浓度随着时间的推移也不断发生着变化 ， 这种变化以蓄积 浓度 （ Ｃ ） 为纵坐标 ， 以时间 （ ｔ ） 为横坐标绘出曲线图 ， 称为时间  浓度曲线 。 包括吸收相 、 平衡相和消 除相 。 ３ ． ９ 剂量  浓度曲线 　 犱狅狊犲犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀犮狌狉狏犲 犆犱 受试物和 （ 或 ） 有毒代谢物在试验动物蓄积靶器官中蓄积浓度随着饲喂剂量变化的规律 ， 以蓄积浓 度 （ Ｃ ） 为纵坐标 ， 以剂量为横坐标绘出曲线图 ， 称为剂量  浓度曲线 。 ３ ． １０ 半衰期 　 犺犪犾犳犾犻犳犲 １ ２ 狋 通常是指消除半衰期 。 即指受试物在试验动物蓄积靶器官中从高峰浓度下降一半所需的时间 。 ３ ． １１ 流水养殖系统 　 犳犾狅狑狋犺狉狅狌犵犺狊狔狊狋犲犿 来自系统外的养殖用水连续或间歇地流经养殖容器的养殖系统 。 ４ 　 原理 若受试物和 （ 或 ） 有毒代谢物 （ 包括中间代谢产物 、 降解产物和其他结合物 ） 在水产动物机体中产生 残留或蓄积 ， 并对水产动物 、 环境和人类食用安全造成潜在毒性 ， 则应对试验水产动物肌肉 、 代谢器官 （ 肝脏和肾脏 ） 和其他蓄积靶器官中来源于受试物的有毒有害成分的残留物进行检测 ， 揭示受试物和 ２ 犌犅 ／ 犜 ２３３８８ — ２００９ （ 或 ） 有毒代谢物在试验水产动物中的代谢和消解规律 ， 为受试物的安全限量及停喂期的确定提供参考 依据 。 ５ 　 试验动物 选择依据 ＧＢ ／ Ｔ２２４８７ 所筛选的对受试物敏感的水产动物作为试验动物 ， 试验动物选用种属来源 明确 、 健康 、 规格整齐的同批苗种 。 原则要同 ＧＢ ／ Ｔ２２４８８ 和 ＧＢ ／ Ｔ２３１８６ 一致 。 正式试验前应有 ２ 周 的驯养期 ， 驯养期内如果动物死亡率高于 １０％ ， 则淘汰该批苗种 。 驯养期结束后应淘汰由于驯养造成 的质量差异的个体 ， 保留健康活泼的水产动物继续作为试验动物 。 ６ 　 剂量与分组 ６ ． １ 　 剂量设计参考的原则 ６ ． １ ． １ 　 原则上高剂量组的动物在饲喂受试物期间应当出现明显中毒反应 ， 低剂量组不出现中毒反应 。 在此二剂量间再设 ２ 个及 ２ 个以上剂量组 ， 以期获得比较明确的剂量  反应关系 。 对能或不能求出经口 或注射 ＬＤ ５０ 的受试物分别进行规定 。 ６ ． １ ． ２ 　 能求出经口或注射 ＬＤ ５０ 的受试物 ： 以经口服或注射 ＬＤ ５０ 的 １０％ ～ ２５％ 作为残留和蓄积毒性试 验的最高剂量组 ， 此 ＬＤ ５０ 百分比的选择主要参考 ＬＤ ５０ 剂量反应曲线的斜率 。 然后在此剂量下设几个剂 量组 ， 最低剂量组至少是试验水产动物可能摄入量的 ３ 倍 。 ６ ． １ ． ３ 　 对于不能求出经口或注射 ＬＤ ５０ 的受试物 ： 残留和蓄积毒性试验应尽可能涵盖试验水产动物可 能摄入量 １００ 倍的剂量组 。 对于试验水产动物摄入量较大的受试物 ， 高剂量可以按在饲料中的最大掺 入量进行设计 。 ６ ． ２ 　 分组 至少应设 ４ 个剂量组和一个对照组 。 受试物如果为配合饲料 ， 首先明确目标毒性物质 ， 直接饲喂 ， 不设剂量组 ， 需要另外设计对照组 。 每组不少于 ６ 个重复 ， 每个重复的试验水产动物个体数量需依据吸 收相 、 平衡相及消除相的预试验结果估算 ， 但不能少于 ５０ 个个体 。 ７ 　 操作步骤 ７ ． １ 　 受试物的处理 将受试物粉碎至所要求的粒度 （ 全部通过筛孔 ０．２８ｍｍ 分样筛或更高细度 ）， 粒度的测定方法符合 ＧＢ ／ Ｔ５９１７．１ 。 根据受试物试验剂量的设计 ， 把受试物添加到试验水产动物的配合饲料中 ， 液体受试物 按照试验剂量直接添加到其他原料的混合物中 。 充分混合 ， 适当加工 ， 制成营养组成 、 适口性 、 水稳定 性 、 粒径等特性都符合试验目的和试验水产动物要求的试验饲料 ， 减少受试物以外的因素对试验动物的 影响 。 受试配合饲料直接饲喂 。 对某一种受试物进行评价时 ， 要考虑到饲料配方中是否存在其他拮抗 或协同作用的成分 。 在确定配方前分析相关原料常规营养成分 ， 并分析其卫生指标 ， 结果应符合 ＧＢ１３０７８ 和 ＮＹ５０７２ 标准 。 ７ ． ２ 　 受试物的给予 ７ ． ２ ． １ 　 途径 用含有受试物的试验饲料或受试饲料喂养试验水产动物 （ 应注意受试物在饲料中的稳定性 ）。 当受 试物添加到饲料中时 ， 需将受试物剂量按每 １００ｇ 试验水产动物体重的摄入量折算为饲料的量 （ ｍｇ ／ ｋｇ ）。 ７ ． ２ ． ２ 　 试验动物空腹处理 试验水产动物在开始 、 中间取样及结束前应空腹 ２４ｈ 。 ７ ． ３ 　 试验周期 根据受试物在试验水产动物机体内吸收相 、 平衡相和消除相的时间确定 。 规定试验周期最长不超 ３ 犌犅 ／ 犜 ２３３８