书 书 书犐犆犛 ６５ ． １４０ 犅 ４７ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ２４３１３ — ２００９ 蜂蜡中石蜡的测定 气相色谱  质谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狅犾犲犳犻狀犻狀犫犲犲狊狑犪狓 — 犌犪狊犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺犻犮犿犪狊狊狊狆犲犮狋狉狌犿犿犲狋犺狅犱 ２００９  ０９  ３０ 发布 ２００９  １２  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准的附录 Ａ 、 附录 Ｂ 、 附录 Ｃ 和附录 Ｄ 为资料性附录 。 本标准由中华全国供销合作总社提出 。 本标准由全国蜂产品标准化工作组归口 。 本标准起草单位 ： 中国农业科学院蜜蜂研究所 、 农业部蜂产品质量监督检验测试中心 （ 北京 ）。 本标准主要起草人 ： 陈芳 、 赵静 、 陈兰珍 、 薛晓峰 、 李熠 、 吴黎明 、 周金慧 、 张金振 、 王鹏 、 黄京平 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ２４３１３ — ２００９ 蜂蜡中石蜡的测定 气相色谱  质谱法 １ 　 范围 本标准规定了蜂蜡中石蜡烃类物质的气相色谱  质谱 （ ＧＣＭＳ ） 测定方法 。 本标准适用于中华蜜蜂 （ 犃狆犻狊犮犲狉犪狀犪 ） 蜂蜡 （ 以下简称中蜂蜡 ）、 意大利蜜蜂 （ 犃狆犻狊犿犲犾犾犻犳犲狉犪犾犻犵狌狊 狋犻犮犪 ） 蜂蜡 （ 以下简称意蜂蜡 ） 中石蜡烃类物质的测定 。 本标准对蜂蜡中石蜡烃类物质的判别限为 １０％ 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。 凡是注日期的引用文件 ， 其随后所有 的修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本标准 ， 然而 ， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本标准 。 ＧＢ ／ Ｔ６３７９．１ 　 测量方法与结果的准确度 （ 正确度与精密度 ） 　 第 １ 部分 ： 总则与定义 （ ＧＢ ／ Ｔ６３７９．１ — ２００４ ， ＩＳＯ５７２５１ ： １９９４ ， ＩＤＴ ） ＧＢ ／ Ｔ６３７９．２ 　 测量方法与结果的准确度 （ 正确度与精密度 ） 　 第 ２ 部分 ： 确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法 （ ＧＢ ／ Ｔ６３７９．２ — ２００４ ， ＩＳＯ５７２５２ ： １９９４ ， ＩＤＴ ） ３ 　 原理 试样用石油醚提取 ， 气相色谱  质谱仪检测 ， 内标法定量 ， 用统计学方法进行判别 。 ４ 　 试剂和材料 ４ ． １ 　 石油醚 ： 分析纯 。 ４ ． ２ 　 异三十烷 ： 标准品 ， 纯度 ＞ ９９％ 。 ４ ． ３ 　 中蜂蜡 ： 取中华蜜蜂的赘脾蜡 ， 以 １０００ｍＬ 水 １００ｇ 蜂蜡的比例加水煮沸 ， 粗过滤去除大块杂质 ， 待冷却后用刀片切除底部杂质 ， 重复提纯一次 。 ４ ． ４ 　 意蜂蜡 ： 取意大利蜜蜂的赘脾蜡 ， 制备方法同 ４．３ 。 ４ ． ５ 　 石蜡 ： 市售纯石蜡 。 ４ ． ６ 　 添加不同比例石蜡的蜂蜡标准品制备 ： 按石蜡与蜂蜡的质量比为 １∶９ ； ２∶８ ； ３∶７ ； ４∶６ ； ５∶５ ； ６∶４ ； ７∶３ ； ８∶２ 和 ９∶１ 逐一称取所需的石蜡 （ ４．５ ） 和蜂蜡 （ ４．３ 、 ４．４ ） 标准品共 １８ 份 ， 每份样品以 １０００ｍＬ 水 １００ｇ 蜂蜡的比例加水煮沸 ， 使蜂蜡和石蜡充分熔融并搅匀 ， 冷却后取出风干 。 获得的样品 中添加石蜡的比例为 １０％ 、 ２０％ 、 ３０％ 、 ４０％ 、 ５０％ 、 ６０％ 、 ７０％ 、 ８０％ 、 ９０％ 。 ４ ． ７ 　 异三十烷烃标准工作液 （ １０００ｍｇ ／ Ｌ ）： 准确称取 ５０．０ｍｇ 异三十烷烃标准品 （ ４．２ ） 于 ５０ｍＬ 容量 瓶 ， 用石油醚溶解并定容 。 －１８℃ 冰箱中保存 。 ５ 　 仪器 ５ ． １ 　 气相色谱  质谱仪 。 ５ ． ２ 　 分析天平 ： 感量 ０．１ｇ 和 ０．０００１ｇ 。 ５ ． ３ 　 超声波仪 。 １ 犌犅 ／ 犜 ２４３１３ — ２００９ ５ ． ４ 　 涡旋混合器 。 ５ ． ５ 　 粉碎机 。 ５ ． ６ 　 电炉 。 ５ ． ７ 　 移液器 ： ２００ μ Ｌ ， １ｍＬ ， ５ｍＬ 。 ５ ． ８ 　 安瓿瓶 ： １ｍＬ 。 ５ ． ９ 　 烧杯 ： １Ｌ 。 ５ ． １０ 　 容量瓶 ： １０ｍＬ 。 ５ ． １１ 　 统计软件 （ ＭａｔＬａｂ ）： 具有判别分析功能 。 ６ 　 试样制备与保存 ６ ． １ 　 试样的制备 样品经冷冻后破碎至中等块状 ， 粉碎机粉碎 ， 混匀 。 ６ ． ２ 　 试样的保存 于 ４℃ 冰箱中保存 。 ７ 　 测定步骤 ７ ． １ 　 提取 称取冷冻粉碎样品及各种标准品 ５０．０ｍｇ ， 置于 １０ｍＬ 容量瓶中 ， 用石油醚溶解并定容至刻度 。 分 取 １ｍＬ 于安瓿瓶 （ ５．８ ） 中 ， 添加 ５０ μ Ｌ 浓度为 １０００ｍｇ ／ Ｌ 的异三十烷烃标准工作液 ， 用涡旋混合器混 匀 ， 供气相色谱  质谱测定 。 ７ ． ２ 　 气相色谱  质谱测定 ７ ． ２ ． １ 　 气相色谱条件 色谱柱 ： ＨＰ５ｍｓ ， ３０ｍ×０．２５ｍｍ×０．２５ μ ｍ ， 或相当者 。 进样口温度 ： ２８０℃ 。 升温程序 ： 初始炉温为 ５０℃ ， 持续 １ｍｉｎ ； 以 ２０℃ ／ ｍｉｎ 升温至 １８０℃ 持续 １ｍｉｎ ； 以 １５℃ ／ ｍｉｎ 升温至 ２８０℃ 持续 ２０ｍｉｎ 。 进样体积 ： １ μ Ｌ ， 不分流进样 。 载气 ： 高纯氦 （ ９９．９９９％ ）， 流量为 １ｍＬ ／ ｍｉｎ 。 ７ ． ２ ． ２ 　 质谱条件 传输管温度 ： ２８０℃ 。 离子源温度 ： ２５０℃ 。 四极管温度 ： １５０℃ 。 扫描模式 ： 全扫描 。 扫描范围 ： ５０ ～ ５５０ 。 ７ ． ２ ． ３ 　 定性测定 在相同实验条件下进行样品测定时 ， 如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致 ， 并且在扣除 背景后的样品质谱图中 ， 所选择的离子均出现 ， 而且所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比相一 致 （ 相对丰度 ＞ ５０％ ， 允许 ±２０％ 偏差 ； ２０％ ＜ 相对丰度 ≤ ５０％ ， 允许 ±２５％ 偏差 ； １０％ ＜ 相对丰度 ≤ ２０％ ， 允许 ±３０％ 偏差 ； 相对丰度 ≤ １０％ ， 允许 ±５０％ 偏差 ）， 则可判断样品中存在同一烃类或相关化 学物质 。 ７ ． ２ ． ４ 　 定量测定 本标准中气相色谱  质谱采用内标法定量测定 。 保证所测样品中烃类物质及相关化学物质的响应 ２ 犌犅 ／ 犜 ２４３１３ — ２００９ 值均在仪器的线性范围内 。 纯蜂蜡 、 石蜡标准品及样品色谱图参见附录 Ａ 。 ７ ． ３ 　 平行试验 按以上步骤对同一试样进行平行试验 。 ８ 　 结果计算 蜂蜡中正构烷烃含量采用内标法定量 ， 各组分含量按式 （ １ ） 计算 ： 犡 犻 ＝ 犿 ｓ × 犃 犻 犃 ｓ …………………………（ １ ） 　　 式中 ： 犡 犻 ——— 试样中被测组分含量 ， 单位为毫克每升 （ ｍｇ ／ Ｌ ）； 犿 ｓ ——— 加入内标物的浓度 ， 单位为毫克每升 （ ｍｇ ／ Ｌ ）； 犃 犻 ——— 组分 犻 的峰面积 ； 犃 ｓ ——— 内标物的峰面积 。 　　 注 ： 测定结果用平行测定的算术平均值表示 ， 保留三位有效数字 。 ９ 　 结果判定 通过质谱分析确定了 １７ 个主要的组分 ， 组分表参见附录 Ｂ 。 用统计软件对样品及添加不同比例石 蜡的蜂蜡标准品的各组分进行判别分析 ， 判别分析图参见附录 Ｃ 。 当试样的结果最接近某一标准品时 ， 即可以判定该物质与此类标准品为一类物质 。 １０ 　 精密度 本标准精密度数据是按照 ＧＢ ／ Ｔ６３７９．１ 和 ＧＢ ／ Ｔ６３７９．２ 的规定确定的 ， 获得重复性和再现性的 值是以 ９５％ 的可信度来计算的 。 结果参见附录 Ｄ 。 ３ 犌犅 ／ 犜 ２４３１３ — ２００９ 附 　 录 　 犃 （ 资料性附录 ） 中蜂蜡 、 意蜂蜡及石蜡标准气相色谱  质谱图 　　 蜂蜡及石蜡图谱资料见图 Ａ．１ 、 图 Ａ．２ 、 图 Ａ．３ 。 图 犃 ． １ 　 中蜂蜡气相色谱  质谱图 图 犃 ． ２ 　 意蜂蜡气相色谱  质谱图 图 犃 ． ３ 　 石蜡气相色谱  质谱图 ４ 犌犅 ／ 犜 ２４３１３ — ２００９ 附 　 录 　 犅 （ 资料性附录 ） 中蜂蜡 、 意蜂蜡及石蜡中烷烃组分质谱确认表 　　 蜡样各烷烃质谱确认资料见表 Ｂ．１ 。 表 犅 ． １ 　 蜂蜡样品各组分质谱确认表 保留时间 ／ ｍｉｎ 名称 分子式 匹配度 分子离子定性离子 １ 定性离子 ２ 定量离子 １１．７８８ 十九烷 Ｃ １９ Ｈ ４０ ９５ ２６８ １０９ ７９ ７２ １２．４９６ 二十烷 Ｃ ２０ Ｈ ４２ ９７ ２８２ １０５ ８５ ７８ １３．１６６ 二十一烷 Ｃ ２１ Ｈ ４４ ９９ ２９６ １４４ ９２ ８０ １３．７９８ 二十二烷 Ｃ ２２ Ｈ ４６ ９９ ３１０ １４１ ９９ ８０ １４．３９９ 二十三烷 Ｃ ２３ Ｈ ４８ ９８ ３２４ １２８ ７０ ７９ １４．９７０ 二十四烷 Ｃ ２４ Ｈ ５０ ９９ ３３８ １５３ ７５ ８１ １５．