书 书 书犐犆犛 ６７ ． ０４０ 犡 ０４ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ５５２２ — ２００８ 代替 ＧＢ ／ Ｔ５５２２ — １９８５ 粮油检验 粮食 、 油料的过氧化氢酶活动度的测定 犐狀狊狆犲犮狋犻狅狀狅犳犵狉犪犻狀狊犪狀犱狅犻犾狊 — 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犺狔犱狉狅犵犲狀狆犲狉狅狓犻犱犪狊犲犪犮狋犻狏犻狋狔狅犳犵狉犪犻狀犪狀犱狅犻犾狊犲犲犱狊 ２００８  １１  ０４ 发布 ２００９  ０１  ２０ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准代替 ＧＢ ／ Ｔ５５２２ — １９８５ 《 粮食 、 油料检验 　 过氧化氢酶活动度测定法 》。 本标准与 ＧＢ ／ Ｔ５５２２ — １９８５ 相比主要变化如下 ： ——— 增加了术语和定义 ； ——— 修改了高锰酸钾标准溶液的浓度和过氧化氢溶液的浓度 ； ——— 统一了反应温度和时间 ； ——— 增加了检测结果的重复性要求 。 本标准由国家粮食局提出 。 本标准由全国粮油标准化技术委员会归口 。 本标准起草单位 ： 安徽省粮油产品质量监督检测站 、 河南工业大学 、 国家粮食局成都粮食储藏科学 研究所 、 天津市粮油检测站 。 本标准主要起草人 ： 季一顺 、 周红梅 、 张浩 、 李雪琴 、 程建华 、 赵淑媛 、 汪桃花 、 吴云 、 王静 。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为 ： ——— ＧＢ ／ Ｔ５５２２ — １９８５ 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ５５２２ — ２００８ 粮油检验 粮食 、 油料的过氧化氢酶活动度的测定 １ 　 范围 本标准规定了粮食 、 油料中过氧化氢酶活动度测定的术语和定义 、 原理 、 试剂和材料 、 仪器与用具 、 试样制备 、 操作步骤 、 结果计算及重复性 。 本标准适用于粮食 、 油料中过氧化氢酶活动度的测定 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。 凡是注日期的引用文件 ， 其随后所有 的修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本标准 ， 然而 ， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本标准 。 ＧＢ ／ Ｔ６０１ 　 化学试剂 　 标准滴定溶液的制备 ＧＢ５４９１ 　 粮食 、 油料检验 　 扦样 、 分样法 ＧＢ ／ Ｔ５４９７ 　 粮食 、 油料检验 　 水分测定法 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 　 分析实验室用水规格和试验方法 （ ＧＢ ／ Ｔ６６８２ — ２００８ ， ＩＳＯ３６９６ ： １９８７ ： ＭＯＤ ） ３ 　 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准 。 ３ ． １ 过氧化氢酶活动度 　 犺狔犱狉狅犵犲狀狆犲狉狅狓犻犱犪狊犲犪犮狋犻狏犻狋狔 ； 犎犘犃 规定条件下 ， 一定量试样中的过氧化氢酶与过氧化氢作用所消耗的过氧化氢量 ， 用每克试样 （ 干基 ） 所消耗的过氧化氢毫克数表示 。 ４ 　 原理 在 ｐＨ７．７ 条件下 ， 从样品中提取过氧化氢酶 ， 在提取液中加入一定量的过氧化氢 ， 使过氧化氢在过 氧化氢酶作用下分解 ， 再用高锰酸钾溶液滴定过量的过氧化氢 。 根据高锰酸钾溶液的消耗量计算出试 样中过氧化氢酶活动度 。 ５ 　 试剂和材料 以下试剂均为分析纯试剂 。 ５ ． １ 　 水 ： 符合 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 实验室用水三级要求 。 ５ ． ２ 　 ２％ 过氧化氢溶液 ： 取 ３０％ 过氧化氢溶液 ２ｍＬ ， 加水稀释至 ３０ｍＬ 。 ５ ． ３ 　 １０％ 硫酸溶液 ： １０ｍＬ 浓硫酸加入 ９０ｍＬ 水中 。 ５ ． ４ 　 高锰酸钾标准溶液 ： 犮 （ １ ／ ５ＫＭｎＯ ４ ） ＝０．２ｍｏｌ ／ Ｌ ， 按 ＧＢ ／ Ｔ６０１ 配制和标定 。 ５ ． ５ 　 ｐＨ７．７ 索伦逊磷酸盐缓冲液 ： Ａ 液 ： 称取磷酸氢二钠 １１．８７６ｇ ， 溶于 １Ｌ 水中 。 Ｂ 液 ： 称取磷酸二氢钾 ９．０７８ｇ ， 溶于 １Ｌ 水中 。 临用时 ， Ａ 液 、 Ｂ 液按 ９∶１ 混合 。 １ 犌犅 ／ 犜 ５５２２ — ２００８ ５ ． ６ 　 石英砂 。 ６ 　 仪器与用具 ６ ． １ 　 恒温水浴锅 （ 或恒温培养箱 ）。 ６ ． ２ 　 电炉 。 ６ ． ３ 　 具塞锥形瓶 ： ２５０ｍＬ 。 ６ ． ４ 　 量筒 ： １０ｍＬ ， ２５ｍＬ ， １００ｍＬ 。 ６ ． ５ 　 移液管 ： ５ｍＬ ， ２０ｍＬ 。 ６ ． ６ 　 研钵 。 ６ ． ７ 　 酸式滴定管 ： ２５ｍＬ 。 ６ ． ８ 　 电热恒温干燥箱 。 ６ ． ９ 　 天平 ： 分度值 ０．００１ｇ 。 ６ ． １０ 　 锥形瓶 ： １５０ｍＬ 。 ６ ． １１ 　 漏斗 。 ６ ． １２ 　 比色管 ： ５０ｍＬ 。 ７ 　 试样制备 按 ＧＢ５４９１ 进行分样 。 对大颗粒样品 （ 如大豆 、 玉米 、 花生 ）， 要预先破碎 ； 对带壳样品 ， 要预先 脱壳 。 ８ 　 操作步骤 ８ ． １ 　 样品水分测定按 ＧＢ ／ Ｔ５４９７ 执行 。 ８ ． ２ 　 过氧化氢酶的提取 ： 称取试样约 １ｇ （ 犿 ）， 精确至 ０．０１ｇ ， 倒入研钵 （ ６．６ ） 中 。 加少量石英砂 （ ５．６ ）， 粗磨至无整粒样后 ， 量取缓冲液 （ ５．５ ） ５０ｍＬ ， 先加入少量以润湿样品 ， 细磨至糊状后 ， 小心转移至锥形 瓶 （ ６．３ ） 中 ， 用剩余的缓冲液分多次洗净研钵 ， 洗液并入锥形瓶中 ， 剧烈振摇 ５ｍｉｎ ， 静置 ２ｈ ～ ３ｈ 后过 滤至比色管 （ ６．１２ ） 中 。 ８ ． ３ 　 酶活动度的测定 ： 准确移取 ２０．０ｍＬ 滤液于锥形瓶 （ ６．１０ ） 中 ， 加入 ２０ｍＬ 水和 ３ｍＬ２％ 过氧化 氢溶液 （ ５．２ ）， 摇匀后在 ３０℃ 恒温水浴锅 （ 或恒温培养箱 ）（ ６．１ ） 中放置 １５ｍｉｎ ， 加入 ５ｍＬ１０％ 硫酸溶 液 （ ５．３ ）， 摇匀 ， 用 ０．２ｍｏｌ ／ Ｌ 高锰酸钾标准溶液 （ ５．４ ） 滴定剩余的过氧化氢 ， 滴定至微红色且 ３０ｓ 不褪 色为止 ， 记录消耗的高锰酸钾标准溶液体积 （ 犞 １ ）。 ８ ． ４ 　 空白试验 ： 吸取 ２０．０ｍＬ 滤液于锥形瓶 （ ６．１０ ） 中 ， 直接煮沸 １ｍｉｎ 。 冷却后加入 ２０ｍＬ 水和 ３ｍＬ ２％ 过氧化氢溶液 （ ５．２ ）， 摇匀后在 ３０℃ 恒温培养箱或水浴锅中放置 １５ｍｉｎ ， 加入 ５ｍＬ１０％ 硫酸溶液 （ ５．３ ）， 摇匀 ， 用 ０．２ｍｏｌ ／ Ｌ 高锰酸钾标准溶液 （ ５．４ ） 滴定剩余的过氧化氢 ， 滴定至微红色且 ３０ｓ 不褪色 为止 ， 记录消耗的高锰酸钾标准溶液体积 （ 犞 ０ ）。 ９ 　 结果计算 过氧化氢酶活动度 犡 按式 （ １ ） 计算 ： 犡 ＝ （ 犞 ０ － 犞 １ ） × 犮 犿 × （ １００ － 犕 ） × １７ × ５０ ２０ × １００ …………………（ １ ） 　　 式中 ： 犡 ——— 过氧化氢酶活动度 （ 以干基计 ）， 单位为毫克过氧化氢每克 （ ｍｇＨ ２ Ｏ ２ ／ ｇ ）； 犞 ０ ——— 空白试验用去高锰酸钾体积 ， 单位为毫升 （ ｍＬ ）； 犞 １ ——— 试样滴定用去高锰酸钾体积 ， 单位为毫升 （ ｍＬ ）； ２ 犌犅 ／ 犜 ５５２２ — ２００８ 犮 ——— 实际高锰酸钾标准溶液浓度 ， 单位为摩尔每升 （ ｍｏｌ ／ Ｌ ）； 犿 ——— 试样质量 ， 单位为克 （ ｇ ）； 犕 ——— 试样水分含量 ， ％ ； １７ ——— 与 １．００ｍＬ 高锰酸钾标准溶液 ［ 犮 （ １ ／ ５ＫＭｎＯ ４ ） ＝０．２ｍｏｌ ／ Ｌ ］ 相当的 Ｈ ２ Ｏ ２ 的质量 。 计算结果保留到小数点后一位 。 １０ 　 重复性 相同的实验材料 ， 用同样的方法 ， 在同一实验室由同一操作人员使用同一设备在较短的时间间隔内 获得两个独立的测定结果 ， 测定结果之间绝对差值大于其算术平均值的 １０％ 的情况不得超过 ５％ 。 犌犅 ／ 犜 ５５２２ — ２００８ 书 书 书 ８００２ — ２２５５ 犜 ／ 犅犌 中华人民共和国 国家标准 粮油检验 粮食 、 油料的过氧化氢酶活动度的测定 ＧＢ ／ Ｔ５５２２ — ２００８  中国标准出版社出版发行 北京复兴门外三里河北街 １６ 号 邮政编码 ： １０００４５ 网址 ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ．ｃｎ 电话 ： ６８５２３９４６ 　 ６８５１７５４８ 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 各地新华书店经销  开本 ８８０×１２３０１ ／ １６ 　 印张 ０．５ 　 字数 ６ 千字 ２００９ 年 １ 月第一版 　 ２００９ 年 １ 月第一次印刷  书号 ： １５５０６６ · １３５５４６ 如有印装差错 　 由本社发行中心调换 版权专有 　 侵权必究 举报电话 ：（ ０１０ ） ６８５３３５３３